p16^(INK4a)和Fas在椎间盘组织细胞中的表达及意义

目的:分析衰老关键基因p16INK4a及凋亡相关基因Fas在人类椎间盘退变过程中的表达变化。方法:分别取正常人和腰椎间盘退变患者的髓核及纤维环组织块制作石蜡切片,利用免疫组织化学及免疫荧光法检测p16INK4a和Fas的表达情况;提取总蛋白及总RNA,利用Westernblot及RT-PCR对p16INK4a和Fas的表达以及视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)的磷酸化状态进行分析。结果:p16INK4a在正常人椎间盘髓核及纤维环组织中的表达阳性率分别为6.6%、4.7%,在内破裂椎间盘(IDD)及突出椎间盘(LIDP)组织中的表达分别为44.1%、38.9%和56.1%、46.7%,较正常人椎间盘明显升高(P<0.05),尤以LIDP中的表达上调显著(P<0.05);Fas在正常椎间盘与IDD的髓核及纤维环组织中的表达阳性率均较低,分别为9.9%、8.1%和10.2%、10.9%,在LIDP组织中有相对较高表达阳性率,分别为25.2%和22.0%;Westernblot及RT-PCR分析显示,p16INK4a与Fas在各自蛋白及相应mRNA水平上的表达具有相同的变化趋势;p16INK4a与Fas极少在同一个椎间盘细胞内表达;随着p16INK4a表达的升高磷酸化pRb也逐渐减少。结论:p16INK4a可能参与了椎间盘细胞的衰老过程,是导致椎间盘退变发生和发展的原因之一;Fas表达升高可能是突出椎间盘细胞中的一种继发改变。

退变椎间盘聚集蛋白聚糖中硫酸软骨素链变化的实验研究

目的:研究内破裂及突出椎间盘细胞合成的聚集蛋白聚糖中硫酸软骨素链(CS)在长度及数量分布上的变化。方法:将正常椎间盘、内破裂(IDD)及突出椎间盘(LIDP)髓核或纤维环的组织20mg培养于24孔板中,用放射性同位素35S-硫酸盐和3H-丝氨酸标记新合成的蛋白聚糖分子。将聚集蛋白聚糖单体从培养的组织片中提取,用四氢硼酸钠或木瓜蛋白酶消化后,凝胶色谱分析硫酸软骨链的变化特征。结果:IDD椎间盘组织内细胞合成的聚集蛋白聚糖内CS链的数量明显减少,但长度保持相对正常;突出椎间盘组织中CS的数量和长度有明显下降和缩短,CS链数量的减少较IDD组织中更为严重。结论:IDD组织合成CS的减少主要是由于生成的CS链数量减少所致,而数量的进一步减少以及CS链长度的缩短是LIDP组织中CS合成量下降的主要原因。

p16^(INK4a)蛋白在正常及骨关节炎关节软骨细胞中的表达及差异分析(英文)

背景:在诸多老化和衰老的研究中,p16INK4a是研究较多的一种产物,然而其在与衰老密切相关的骨性关节炎中的研究较少。目的:观察p16INK4a在正常和骨性关节炎软骨细胞中的表达,讨论其在骨性关节炎病理过程中的作用。设计:以诊断为依据设立对照的实验研究。地点和对象:实验在北京大学第三医院骨科完成,对象为骨性关节炎软骨标本,取材于在北京大学第三医院骨科手术的膝骨关节炎患者。正常老年、中年及青年组软骨标本分别取自无骨性关节炎患者。干预:直接从软骨组织中提取蛋白和细胞的总RNA,分别进行Westernblot和RT-PCR分析,检测p16INK4a在年轻、中年、正常老年人及骨性关节炎患者软骨中的表达情况。对p16INK4a下游底物pRb的磷酸化状态也进行了蛋白表达的分析。主要观察指标:p16INK4a在蛋白水平及mRNA水平上的表达。结果:在关节软骨细胞中,p16INK4a的表达随着年龄的增长,其表达量也逐渐增多;相应地,p16INK4a的主要靶物质pRb的磷酸化明显减少,相反非磷酸化的pRb的含量则相对增高。与正常人相比,这些变化在骨性关节炎的软骨细胞中尤为显著。结论:p16INK4a/pRb途径可能在关节软骨细胞的老化及骨性关节炎的发病过程中具有一定的调节作用。

椎间盘源性下腰痛与椎间盘内神经生长

疼痛的椎间盘外层纤维环、内层纤维环和髓核中都有神经纤维分布。体外研究发现椎间盘基质成分中蛋白多糖含量和结构变化,尤其是硫酸软骨素含量变化对神经生长具有明显的调节作用。在退变的椎间盘中,硫酸软骨素含量减少有利于椎间盘外周分布的神经纤维向内层纤维环甚至髓核内生长,从而导致椎间盘源性下腰痛。

程序化死亡基因5(PDCD5)在骨关节炎软骨中的表达及意义

目的 :研究程序化死亡基因 5 (PDCD5 )在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律 ,探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法 :取 2 0例骨关节炎及 10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨 ,分离软骨细胞 ,留取组织块制作石蜡切片。分别用流式细胞术、直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜及RT -PCR检测PDCD5在正常及骨关节炎软骨细胞内的表达水平及部位 ,免疫组织化学检测PDCD5在关节软骨内的表达特征。结果 :在骨关节炎软骨细胞中PDCD5表达上调 ,以细胞核内增强为主 ;在骨关节炎的组织切片中PDCD5表达增强 ,阳性细胞主要分布在表层及深层 ,而在股骨颈骨折中PDCD5阳性细胞主要分布在表层及中层。结论 :PDCD5可能参与了骨关节炎软骨细胞的凋亡过程 。

颈椎枪弹伤5例

手术治疗颈椎枪弹伤5例。首先明确颈部其他器官损伤及弹片位置;注意周围脏器损伤的处理;弹片取出与否取决于弹片位置和临床症状。

矫正拇掌指关节过伸畸形的新术式

目的为矫正拇掌关节过伸畸形寻求一种行之有效且操作简便的手术方式。方法采用近端切断拇短伸肌腱,保护止点周围的完整,在拇掌指关节掌侧拇长屈肌腱鞘浅面“8”字交叉,最后靠近拇内收肌止点与拇内收肌腱缝合。结果治疗34例拇掌指关节过伸畸形病人,其中类风湿病15例,掌板损伤10例,尺神经损伤9例,平均随访6年,所有过伸畸形完全矫正,未再复发。结论操作简便,疗效佳,有临床应用价值。

女性髌下脂肪垫慢性损伤的诊治

自1988～1998年,我们对女性经前期膝关节周期性疼痛的病人进行了诊治.其中37例行手术治疗,69例药物保守治疗.取得了满意的临床效果.现报道如下.1.临床资料本组共106例,年龄17～58岁.病史0.5～34年.症状:均在经前期1—2周出现双膝酸胀不适,活动时为重,程度不一.休息时可缓解.双膝伸直时疼痛加剧.其中47例双膝疼痛数年或数10年后渐呈持续性.96例患者有不同程度的情绪低落、嗜睡、烦躁和乳房胀痛、下腹胀、健忘等症状.查体:髌韧带深层可有模糊性压痛.而两侧压痛较为明显,并伴有轻、中度肿胀,直立位时更为明显.局部皮肤温度正常或稍高,无血管充盈征.血常规均无异常.ASO、RF均阴性.

聚集蛋白聚糖对盘源性下腰痛椎间盘内神经生长的影响

目的探讨痛性椎间盘神经纤维内生长的原因。方法以正常、内破裂及突出椎间盘中提取的聚集蛋白聚糖与培养基一起培养人骨髓神经母细胞瘤（SH-SY5Y），磷酸盐缓冲溶液（PBS）作对照处理，检测比较神经细胞轴突发生率及轴突长度。结果浓度为100mg／L时，内破裂及突出椎间盘髓核和纤维环聚集蛋白聚糖处理组中神经细胞轴突发生率及其长度[（44．8±2．8）％／（41．8±2．0）um和（34．2±2．9）％／（37．2±3．1）um；（56．0±1．5）％／（51．8±2．2）um和（48．8±1．5）％／（48．2±2．2）um]较正常对照组[（34．2±2．6）％／（29．0±2．5）um和（23．4±2．6）％／（26．2±2．2）um]明显增加（P〈0．05）；浓度为10mg／L或1000mg／L时，3者之间差异无统计学意义（P〉0．05），但均具有类似的上升趋势。结论痛性椎间盘中聚集蛋白聚糖对神经生长抑制能力减弱，有利于椎间盘源性下腰痛的产生。

p16^(INK4a)与Fas对椎间盘细胞功能影响的比较

目的分析p16INK4a及Fas在椎间盘细胞中的功能作用,探讨椎间盘退变的机制。方法利用p16INK4a及Fas特异性短链干扰RNA(siRNA)转染体外培养的内破裂(IDD)及突出(LIDP)椎间盘细胞。观察p16INK4a及Fas表达的沉默情况。分析视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白磷酸化状态、β-半乳糖苷酶(β-gal)染色阳性率、细胞形态和增殖的变化;放射性同位素标记培养细胞,观察细胞合成氨基葡聚糖(GAG)及核心蛋白的变化。结果p16INK4a及Fas特异性siRNA分别有效地沉默了椎间盘细胞内p16 INK4a及Fas表达。p16INK4a表达沉默使退变椎间盘细胞衰老表型及合成能力得以明显改善;Fas特异性siRNA转染的LIDP椎间盘细胞的生理功能有所恢复,但未及正常水平,而转染的IDD椎间盘细胞的功能无明显变化。结论p16INK4a基因介导的细胞衰老是椎间盘退变的一个关键启动因子。

断指再植术后高压氧治疗的疗效分析

目的 探讨断指再植术后高压氧 ( HBO)治疗的效果。方法 回顾性分析情况相近的 2 17只再植手指的治疗效果 ,分为四组。 A、B组为再植术后≤ 5 d出现微循环障碍。 C、D组为再植术后 >5 d出现微循环障碍。 A、C组仅予常规治疗 ,B、D组予常规治疗加用 HBO治疗。常规治疗 :主要为防凝、扩张血管 ;HBO治疗压力 0 .2 5 MPa( 2 .5 ATA) ,吸氧 30 min 2次 ,间歇吸空气 10 min;开始 2～ 3次 /d,3 d后为 1次 /d,10次为 1个疗程。结果 A、B、C、D组有效率分别为 46 .30 %、5 7.14%、5 5 .5 6 %、80 .77%。A、B、C三组间有效率差异无显著性 ,而 D组有效率高于其他 3组。结论 HBO对断指再植 >5