大鼠帕金森氏病模型的建立

用Ｗｉｓｔａｒ大白鼠６４只，经微量注射６－羟多巴胺入右侧黑质区后，观察大鼠的行为和黑质及尾壳核细胞形态学变化。结果如下：①６４只大鼠中，３５只（５４．７％）恒定转向左侧且结果稳定，与帕金森氏病的症状相类似，被视为帕金森氏病旋转鼠模型。②在旋转鼠右侧黑质和尾壳核内，酪氨酸羟化酶样（多巴胺能）神经元和神经纤维末稍明显减少或消失，而左侧黑质和尾壳核内无明显变化。结果提示：６－羟多巴胺能选择性地损毁多巴胺能神经元及纤维末稍，从而建立稳定的帕金森氏病旋转鼠模型。

胎儿黑质发育的电镜观察

本实验应用透射电镜观察了水囊引产的４～９月正常胎儿黑质发育的特征。结果如下：①黑质神经元在胎龄第４月表现为不成熟细胞的超微结构特征。随着进一步发育，神经元核异染色质逐渐减少，细胞质和细胞器逐渐增多，至胎龄第９月，黑质神经元的超微结构已接近生后细胞的特征；②在胎龄第４月的黑质标本中未见突触结构，随着发育在某些相邻细胞突起的相对膜增厚，但尚未见明显的突触活性点，至第９月时可见典型的突触结构，且大部分为对称型突触，含有圆形清亮囊泡和明显的突触活性点。以上结果提示，胎儿黑质在第４月发育尚不成熟，至第９月已接近成熟。

人胎黑质神经元发育的初步观察

应用尼氏染色方法,观察第3～10月人胎黑质神经元的分布、数量和形态学发育变化。结果如下:①在人胎第3～10月,黑质神经元位于中脑腹侧大脑脚底与红核之间,并可区分为腹侧细胞稀疏的网状部和背则细胞密集的致密部。致密部在第3～4月为连续的细胞带,第5月以后渐变间断而形成明显的细胞群。②随着胎龄增加,每张中脑横切片上黑质神经元的数目略有减少,神经元的密度逐渐降低,尤以第8～10月最明显。③从胎龄第3～10月,黑质神经元胞体逐渐增大,胞质逐渐增多,神经元的形态从胎龄早期无明显突起的小圆形细胞为主,逐渐发育为胎龄晚期的锥形和梭形细胞为主,并带有一个或多个胞质突起。结果提示:人胎黑质神经元的细胞形态学发育在胎龄3～4月时尚不成熟,而第9～10月时已接近成人。

人胎垂体生长激素样免疫反应细胞的发育

为探讨人胎垂体生长激素细胞发育规律，本文用免疫细胞化学结合图像分析，研究１９例不同胎龄人胎垂体生长激素细胞的形态、大小、光密度变化。结果如下：①胎１６周已存在生长激素免疫反应细胞，随胎龄增加，细胞多排列成团或索，并由周边部向远侧部的中央延伸。②随胎龄增加，生长激素样免疫反应细胞数量逐渐增多，细胞逐渐增大，胞浆逐渐增多，核浆比值逐渐变小。至胎龄３２周，生长激素样免疫反应细胞以大型细胞为主，多为圆形或卵圆形。③生长激素样免疫反应细胞的光密度随胎龄增加而逐渐增高，２６周达高峰，以后呈下降趋势，但仍高于２４周的水平，结果提示：垂体生长激素细胞的发育是从幼稚到成熟的过程，生长激素细胞的功能在胎２４－２６周最旺盛。

尼古丁对脂多糖诱导的大鼠小胶质细胞激活和白细胞介素6表达的影响

目的:观察尼古丁对脂多糖(LPS)诱导的原代大鼠脑皮层小胶质细胞激活的影响及对细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的影响,探讨尼古丁在PD中的可能作用机制。方法:培养原代大鼠脑皮质胶质细胞,纯化小胶质细胞,用尼古丁预处理30min,再加入LPS,采用ELISA检测小胶质细胞不同时间点分泌IL-6的水平及免疫细胞化学检测小胶质细胞特异的离子钙结合蛋白(Iba1)的阳性细胞数。结果:激活的小胶质细胞胞体增大,活化标记物Iba1表达上调;ELISA方法测定显示10μg/LLPS致小胶质细胞在4、8和24h分泌细胞因子IL-6的量与对照组比较均增加(t=14.115、23.530和32.076,P均<0.05),其中在4和8h分泌IL-6的量差异无统计学意义,达到高峰;但经尼古丁(100μmol/L)预处理后,尼古丁和LPS有交互作用,小胶质细胞的激活被抑制(F交互=13.418,P=0.006),且在4h分泌IL-6的量减少(F交互=92.569,P<0.001)。结论:尼古丁可能对LPS引起的炎症反应具有保护作用。

尼古丁抑制脂多糖诱导的原代多巴胺能神经元变性及相关机制

目的： 观察尼古丁对脂多糖（LPS）诱导的胎鼠中脑小胶质细胞激活的影响及对其白介素6（IL-6）分泌的影响,以探讨尼古丁对中脑多巴胺（DA）能神经元的保护机制.方法： 取孕14d SD大鼠,胎鼠中脑腹侧区组织,混合培养中脑神经元-胶质细胞,Elisa检测细胞不同时间点分泌IL-6的水平;免疫细胞化学术检测小胶质细胞特异的钙结合蛋白（Iba1）和标记DA能细胞的酪氨酸羟化酶（TH）的阳性细胞数.结果： 经LPS激活的小胶质细胞胞体增大,活化标记物Ibal表达上调;DA能细胞的数目减少,突起受损.Elisa方法测定显示10ng/ml LPS致小胶质细胞在8、24和72h分泌IL-6的量均增高;在尼古丁（100μmol/L）预处理组,小胶质细胞的激活被抑制,TH免疫阳性的多巴胺能神经元的数量增加,LPS＋尼古丁组分泌IL-6的量减少,在不同时间点（8、24和72h）与LPS组比较差异均有统计学意义.结论： 尼古丁可抑制小胶质细胞的激活,保护多巴胺能神经元,抑制小胶质细胞炎性因子的释放可能是其主要保护机制.

一氧化氮合酶阳性神经元在大鼠下丘脑的分布

采用ＮＡＤＰＨ－Ｄ组织化学方法研究了一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元在大鼠下丘脑的分布。结果：ＮＡＤＰＨ－Ｄ阳性神经元在室旁核、视上核、室周核和下丘脑外侧区活性较高，在穹隆周核、乳头复合体和正中隆起外侧带也有阳性细胞。提示：ＮＯ可能参与下丘脑激素的调节。

人胎垂体生长激素放射免疫测定

目的：为探讨不同胎龄人胎垂体生长激素含量变化与胚胎生长发育的关系。方法：用双抗体放射免疫分析方法研究了２７例人胎垂体。结果：在胎２４周以前，随胎龄增加，垂体所含生长激素逐渐增加，２４周达高峰，以后随胎龄增加，垂体生长激素含量呈下降趋势，但仍高于２２周以前的水平。结论：胎儿垂体生长激素的合成在胎２４～２６周最旺盛，推测人胎垂体移植供体以此阶段为宜，同时为研究人胎生长发育的调控提供新的资料。

大白鼠皮质向脊髓及尾壳核的分支投射

用逆行荧光素双标记法，研究了大白鼠大脑皮质向脊髓及尾壳核的分支投射。将颗粒蓝（ＧＢ）及核黄（ＮＹ）分别注入９只大白鼠的脊髓及尾壳核，发现皮质脊髓神经元的分布相当广泛，皮质尾壳核神经元的分布区域几乎全部重叠于皮质脊髓神经元所分布的区域内。在大脑皮质的４、３区内，发现荧光素双标记细胞，约占同区内总标记细胞的１０％。结果提示大脑皮质内有神经元向脊髓及尾壳核发出分支投射。

大鼠中缝背核至背海马投射纤维递质性质的研究

目的 :研究大鼠中缝背核至背海马投射纤维的递质性质。方法 :用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪法和免疫细胞化学相结合的双重标记技术研究中缝背核 5 羟色胺 (5 HT)样神经元至背海马投射。结果 :在中缝背核内可见到HRP标记细胞、5 HT阳性反应细胞和 5 HT HRP双标细胞。结论 :中缝背核 5

高锆镁锆中间合金工艺研究

应用N235—H2SO4分离技术,使锆与其他多种杂质元素分离,以提高原料K2ZrF6质量,降低合金杂质含量,通过控制炉料配比,稳定提高Zr的含量,采用机械搅拌替代传统的人工搅拌,加速生产过程还原反应进程,使合金成分均匀化,从而解决了合金成分偏析难题。

人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３～６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３～６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。

大鼠脑干内一氧化氮合酶阳性神经元的分布

用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织化学法观察了一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元在大鼠脑干的分布。实验用Ｗｉｓｔｅｒ大鼠１０只，常规灌注固定处理，取脑作冰冻连续切片，片厚４０μｍ，间隔３张取１张。ＮＡＤＰＨ酶组织化学染色。结果表明：ＮＯＳ阳性神经元主要分布于中脑和脑桥上部，延髓分布极少。在上丘浅灰质层（ＳＵＧ）、中脑导水管周围灰质背外侧部（ＬＤＣＧ）、中缝背核（ＮＲＤ）、被盖背外侧核（ＬＤＴＤＴｇ）、桥脚被盖核（ＰＰＴｇ）最为密集。其他部位如脚间核、上丘深灰质层、下丘，其它中缝核团以及脑干的网状结构也有少量分布。在脑干的运动核团和中脑导水管周围灰质的其它部分则未见分布。ＮＯＳ神经元在脑干的分布提示，ＮＯ可能参与了脑干内多种功能的调节。

人海马的胚胎发育研究

用尼氏染色法，观察了第４～１０个月人胎海马的发育。结果表明：随着胎龄增长，锥体层细胞的密度减低，细胞体积增大，但变化不呈等速。至胎龄第９个月出现锥体形细胞，胎龄第１０个月，细胞发育趋向成熟。另可见海马各区的发育速度不一致。结果提示用５个月以前的海马细胞作供体用于移植研究，可望获得较理想结果。

大鼠脑干5－羟色胺神经元至腰骶髓的投射研究

应用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行追踪法结合免疫细胞化学双重标记法，观察了大鼠脑子５－羟色胺（５－ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔｍｉｎｅ，５－ＨＴ）神经元向脊髓腰６（Ｌ６）和骶１（Ｓ１）节段的纤维投射。结果表明：在脑桥尾侧网状核、前庭神经外侧核、巨细胞网状核、外侧旁巨细胞网状核、外侧网状核三叉下亚核、中缝大核及中缝苍白核出现ＨＲＰ－５－ＨＴ双标记细胞。提示Ｌ６和Ｓ１节段的５－ＨＴ传入纤维起源是广泛的，不仅延髓网状结构，而且脑桥网状结构和脑神经核内的５－ＨＴ能神经元也向Ｌ６和Ｓ１投射。

大鼠蓝斑酪氨酸羟化酶样神经元至背海马投射观察

目的 :观察大鼠蓝斑至背海马投射纤维的递质性质。方法 :用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪法和免疫组织化学相结合的双重标记技术研究蓝斑TH样神经元至背海马投射。结果 :在双侧蓝斑内可见到HRP标记细胞、TH阳性反应细胞和TH HRP双标细胞 ,同侧明显多于对侧。结论 :背海马接受双侧蓝斑纤维的投射 。

人胎大脑皮质细胞的冷冻保存

目的：筛选人胎大脑皮质细胞冷冻保存的适宜条件。方法：将胎龄４～６月人胎大脑皮质制成细胞悬液并分别保存于４℃和液氮中，分别于保存第１ｄ，５ｄ，１５ｄ和３０ｄ用台盼蓝染色法观察细胞存活率。结果：①胎龄４～６Ｍ人胎大脑皮质细胞在冷存后均可存活，以胎龄４Ｍ细胞存活率较高。②冷存１ｄ～５ｄ时，４℃保存的细胞存活率高于液氮保存的细胞存活率，但随着保存时间的延长细胞存活率显著下降。③冷存１～３０ｄ时，液氮保存的细胞存活率无明显变化，且在１５ｄ和３０ｄ时细胞存活率明显高于４℃保存者。结论：人胎大脑皮质细胞的保存条件以胎龄４Ｍ、４℃短期保存和慢速冷冻、快速复温的液氮长期保存为宜。

人海马胚胎发育的超微结构研究

电子显微镜下观察了15～30周人胎海马CA3区神经元的发育。结果表明:随着胎龄增大,核内异染色质减少,染色质分散。线粒体和粗面内质网等细胞器的数量随增龄而增加。随着树突和树棘的生长.细胞间隙中的神经毡日益丰满。突触的三大基本结构清晰可辩,早期以对称型突触稍多,以后发现非对称型突触居多。提示:20周以前的细胞较少分化,可选作供体,用于海马移植研究。

尼古丁对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的:观察尼古丁(NIC)对脂多糖(LPS)诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法:60只大鼠随机分为4组,每组15只。LPS组(L组)、NIC组(N组)和NIC+α7型烟碱乙酰胆碱受体(nAChR-α7)阻断剂α-银环蛇毒素组(α-BTX)(M组)分别腹腔注射PBS、NIC和NIC与α-BTX,连续4周,并于2周末一次性黑质内注射LPS。对照组(C组)均给予PBS。4周末进行阿朴吗啡诱导的旋转试验,并用免疫组化方法观测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量及离子钙结合蛋白1(Iba1)阳性细胞的形态。结果:4组大鼠旋转实验阳性率及30min内旋转圈数差异有统计学意义(χ2=10.179,P=0.006;F=54.681,P<0.001),TH免疫阳性神经元数差异有统计学意义(F=861.541,P<0.001)。与N组相比,L组及M组旋转实验阳性率降低,旋转圈数减少(P<0.05),TH免疫阳性神经元数减少(P<0.05)。N组Iba1阳性细胞多呈静止期的形态;L组与M组细胞形态相似,大多呈活化期的形态。结论:NIC可能通过nAChR-α7抑制小胶质细胞的活化,对LPS诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元起保护作用。

脂多糖对大鼠中脑原代培养细胞的神经损伤作用

目的:观察脂多糖(LPS)对大鼠中脑原代混合细胞多巴胺能神经元的损伤作用。方法:取孕14d的SD大鼠胚胎中脑原代培养。①将细胞分为正常对照组和不同剂量LPS(0.01、0.10、1.00和10.00mg/L)组,体外培养7d后,实验组加入不同浓度的LPS,持续作用72h后,经酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色,计数TH阳性细胞数目并观察形态变化。②将细胞分为正常对照组和0.1mg/L的LPS组。体外培养7d,实验组加入终浓度为0.1mg/L的LPS,分别作用8、24和72h,收集细胞上清液,用ELISA检测白细胞介素6(IL-6)的含量;分别对作用8、24和72h的原代细胞进行TH和离子钙结合蛋白1(Iba1)的免疫细胞化学染色,计数多巴胺能神经元和激活的小胶质细胞的数量。结果:TH阳性细胞减少,大部分细胞表现为突起数目的减少,突起变短并有串珠样改变。0.1mg/LLPS分别作用8、24和72h的给药组与对照组相比,IL-6的含量均有显著增加(t分别为15.787、16.712和15.910,P均<0.001)。激活的Iba1染色阳性神经元的数量分别为(40.0±6.1)、(76.0±3.4)和(69.0±5.2)(F=387.820,P<0.001)。在24和72h的LPS给药组中,TH染色阳性神经元的数量分别为(18.0±5.3)和(10.0±3.2)(F=94.840,P<0.001)。结论:LPS通过激活小胶质细胞释放IL-6发挥对多巴胺能神经元的损伤作用。