随机ssDNA文库不对称PCR扩增条件的优化及回收效率比较

本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增出来的条带清晰、稳定、特异性高,并具有较好的纯化效率。

体内诱导抗原技术研究进展

体内诱导抗原技术(IVIAT)作为一种新兴的体内诱导基因筛选技术,相比其他筛选技术具有不需要动物模型的显著优势。大量试验证实体内诱导基因可能与病原微生物在机体内生存以及致病性相关,同时其表达产物也是良好的药物靶标和疫苗候选基因。论文综述了IVIAT的原理、操作步骤及优缺点,由于现阶段该技术在寄生虫病上应用较少,因此分析了其在寄生虫病上所具有的优势和可能存在的问题。

养殖环境中耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌gyrA基因的检测与序列分析

该文探讨从养殖场动物、环境、饲养员等分离的大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物的靶位基因gyrA突变特征.对养殖环境中分离的8株大肠杆菌进行临床常用氟喹诺酮类药物的耐药性分析、PCR扩增gyrA基因并测序,并采用DNASTAR软件对gyrA基因的氟喹诺酮耐药决定区进行生物信息学分析.结果表明:养殖场环境中分离的菌株编号为1,6和8的3株大肠杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星敏感,菌株2,3,4,5和7的5株大肠杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星耐药;氨基酸序列分析发现,敏感菌株氨基酸位点未发生突变或83位发生单突变;耐药菌株的突变发生在83位Ser→Leu替代和87位Asp→Asn替代,且发生氨基酸双替代的菌株均为高度耐药菌株.表明不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌gyrA基因的氨基酸变异具有多种类型,该研究将更好地诠释养殖场大肠杆菌的氟喹诺酮类耐药机制.

不同免疫途径对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为探讨不同免疫接种途径对鸡新城疫(ND)弱毒疫苗免疫效果的影响,我们将健康1日龄海兰蛋公鸡雏鸡(48只)随机分为滴鼻免疫组、肌肉注射免疫组、后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组,每组12只。分别于第14日龄和28日龄接种新城疫IV系弱毒苗(LaSota株)1羽份/只,后海穴半剂量免疫组接种0.5羽份/只。分别于免疫前和免疫后7、14、21d和28d称重,无菌操作采血,分离血清,检测血清中的血凝抑制效价(HI)。结果显示:与常规途径免疫组相比,后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.05),且显著提高试验鸡只的日增重(P<0.05);滴鼻免疫组与肌肉注射免疫组相比,虽然增加了HI效价,但统计学比较差异不显著(P>0.05)。试验结果说明后海穴接种鸡新城疫疫苗可显著提高鸡血清NDV的HI效价,提高鸡生产性能,同时节约疫苗用量。

某牛场粪源大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定

为了解重庆市某牛场牛群大肠杆菌O157∶H7的感染情况,我们以牛场犊牛为研究对象,采集其新鲜粪便,经LB培养基增菌培养、免疫磁珠富集后,在山梨醇麦康凯琼脂上划线培养,最后PCR扩增eae A基因目的片段,以此分离鉴定粪源大肠杆菌O157∶H7。结果显示:在所采集的39份犊牛粪便样品中,分离得到一株符合大肠杆菌O157∶H7生长特点且含有eae A基因的菌株。

后海穴注射黄芪多糖对脾虚泄泻犬的治疗效果

32只健康本地犬饲养1周后按体质量灌胃番泻叶水煎剂6 m L/kg人工复制脾虚泄泻证病理模型,造模成功后随机分为4组:黄芪多糖治疗组后海穴注射黄芪多糖注射液0.25 m L/kg,2次/d;硫酸庆大霉素治疗组后海穴注射硫酸庆大霉素注射液0.2 m L/kg,2次/d;后海穴针刺组后海穴注射生理盐水0.25 m L/kg,2次/d;病理对照组不作任何处理;同时设立4头健康犬作为空白对照,造模期间灌胃生理盐水。用药后治疗期间测定试验犬只的体质量、三大临床指标、部分血液指标和脾脏指数,并统计分析。结果表明,黄芪多糖治疗组血红蛋白、红细胞水平在较短时间内恢复正常,脾脏指数显著(P<0.05)高于硫酸庆大霉素治疗组;硫酸庆大霉素治疗组白细胞降低速度极显著(P<0.01)快于黄芪多糖治疗组。这表明后海穴注射黄芪多糖注射液可以用于治疗犬脾虚泄泻证。

E.tenella感染早期雏鸡盲肠扁桃体ChIL-17A和ChIL-17F表达水平的相反变化

为探讨ChIL-17及其受体在抗柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）感染中的作用，本研究用E．tenellaRC株孢子化卵囊口服感染14日龄非免疫蛋公鸡，于感染后0，2，4，6，12，24，3，5，7d共9个不同时间点同时提取对照组和试验组雏鸡盲肠扁桃体RNA，采用实时荧光定量PCR方法检测ChIL-17A、ChIL-17F和ChIL-17RA基因的表达动态。结果显示，ChIL-17A表达水平在感染后持续下调，感染后4h为感染前（0h）的0．13倍（P〈0．01），感染后3d达最低表达水平，仅为感染前（0h）的0．0097倍。而ChIL-17F的表达水平则呈现相反的变化，在感染早期明显上调，感染后2h上调3．07倍（P〈O．05），感染后4h上调6．49倍（P〈0．01），其后时间点与感染前相比表达水平则无显著性差异。ChIL-17RA与感染前相比表达上调，于感染后24h和7d分别上调1．73倍和2．21倍（P〈0．01）。结果表明，ChIL-17及其受体基因的表达水平在感染后均呈现显著变化，说明它们在E．tenella感染中具有重要的宿主-寄生虫免疫生物学意义。特别是ChIL-17A和ChIL-17F在感染早期（感染后2～4h）表现出显著的相反表达动态说明两者在宿主防御E-tenella感染的早期具有不同的免疫调节功能，而这一具体调节机制还有待于进一步的研究加以阐明。