基于阳离子共轭聚合物荧光共振能量转移结合杂交链式反应信号扩增检测端粒酶活性

检测端粒酶活性对肿瘤、癌症的早期诊断,以及开发以端粒酶为靶标分子的抗肿瘤、抗癌药物具有重要意义。本研究基于阳离子共轭聚合物Poly[(9,9-bis(6'-N,N,N-trimethylammonium)hexyl)fluorenylene phenylene(PFP)与荧光染料SYBRGreenI(SG)之间的荧光共振能量转移,建立了一种简单快速的端粒酶活性检测方法。当端粒酶存在时,引物探针被延伸,生成具有-(GGTTAG)n重复序列的DNA。然后通过链霉亲合素与生物素的特异性作用将端粒酶延伸产物连接在磁性微球上。加入与端粒酶延伸产物匹配的探针-(CTAACC)2。端粒酶延伸产物形成双链结构之后加入SG,SG能够特异性的嵌入到DNA双链结构中。最后,加入PFP。PFP是一种带有正电荷的水溶性共轭阳离子聚合物,可以通过静电作用与双链DNA发生吸附。PFP与嵌入在双链结构中的SG发生荧光共振能量转移(FRET)。根据FRET的效率可以实现对端粒酶活性的定量检测。本方法可以检测到3.0×10^5个Hela细胞中提取的端粒酶活性。将本方法与杂交链式反应(HCR)反应结合,可实现检测信号的放大,提高检测的灵敏度,可以检测到6.0×10^4个Hela细胞中的端粒酶活性,灵敏度提高了一个数量级。本方法简单、快速,无需标记、扩增过程,无酶参与,检测成本低,灵敏度高。

基于恒温指数扩增反应高灵敏度检测端粒酶活性

端粒酶延伸产物是具有(ggttag)n重复序列的DNA.设计1条与2个重复序列相匹配的特异性的DNA探针-(ctaacc)2使其与端粒酶延伸产物杂交,形成双链DNA.过量的DNA探针被磁性石墨烯吸附,通过磁分离去除.利用恒温指数扩增反应(IEXPAR)对端粒酶延伸产物捕捉的DNA探针进行快速的扩增.用与双链DNA特异性结合的SYBR Green I染料对扩增产物进行实时荧光检测.在优化条件下,可以检测到低至50个癌细胞中的端粒酶活性.实现了恒温扩增条件下端粒酶活性的高灵敏度检测.

VIP客户感知网络质量分析服务体系的研究和应用

目前通信业的竞争已从原来简单的价格竞争转换为包含品牌和服务在内的综合竞争,其中服务水平正逐渐成为企业的核心竞争能力之一。基于对长沙移动VIP客户现状的认识,深刻分析了建立新型客户感知网络质量分析服务体系的必要性。通过平衡网络资源、业务质量与客户体验之间的关系,更加有针对性、高效地围绕客户体验,以提升网络业务服务质量和客户满意度,从而增强运营商的市场竞争力,打造长期的服务竞争优势。

基于杂交链式反应信号放大和磁分离技术荧光检测端粒酶活性

端粒酶是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶,它一般在癌细胞中被激活.它与端粒DNA的不断复制以及癌细胞的不断增殖密切相关.所以检测端粒酶的活性对癌症的早期诊断以及以端粒酶为靶标分子的抗癌药物的开发具有重要意义.利用杂交链式反应（HCR）无酶放大检测信号,建立了一种简单、快速的端粒酶活性检测方法.端粒酶延伸产物是一条末端具有（ggttag）_n重复序列的DNA.在实验过程中,通过链霉亲合素与生物素的特异性作用将端粒酶延伸产物连接在磁性微球上.设计一条端粒酶延伸产物特异性的DNA探针I作为杂交链式反应的引发探针.DNA探针I的3′-端与端粒酶延伸产物的重复序列匹配,通过杂交,DNA探针I被固定在磁球上;DNA探针I的5′-端引发DNA探针II和探针III发生杂交链式反应.DNA探针II和探针III上都标记有荧光基团,可以利用荧光直接进行信号检测.在反应过程中,通过磁分离去除多余未反应的三种DNA探针.在优化条件下,可以检测到1.0×10~5个Hela细胞中的端粒酶活性.该方法简单、快速、检测成本低,分析全程无酶参与,在肿瘤或癌症的临床诊断以及以端粒酶为靶标分子的抗癌药物的筛选上具有广阔的应用前景.

加强石化品牌文化建设大力提升石化企业的核心竞争力

随着现代企业经营环境的变化,各个企业都十分注重品牌与品牌文化的培育和打造,将文化的力量注入自己的产品中来,从而提高企业的市场竞争力、寻求竞争优势。本文从品牌文化的培育角度阐述了我国石化企业如何加强品牌文化建设,以提升石化企业的核心竞争力、促进石化企业不断做大做强。