基于因子分析的558例肾阳虚证人群的证候量化分析研究

目的通过对558例肾阳虚证人群量化的证候信息进行因子分析以揭示肾阳虚证的构成规律,为肾阳虚证证候的客观化、标准化和规范化研究提供临床数据支持。方法首先对558例肾阳虚证人群的症状和舌脉体征进行频数统计分析,然后将肾阳虚证人群的主要证候信息量化,最后通过因子分析筛选出肾阳虚证的公因子及其代表性变量,并结合中医证候知识分析肾阳虚证的构成规律。结果应用主成分分析法提取了特征值大于1的8个公因子,累计贡献率为60.483%,经因子旋转后筛选出各公因子中载荷系数绝对值大于0.45的代表性变量,其中F1的代表性变量为畏寒喜暖(0.947)、不耐寒冷(0.932),F2的代表性变量为腰部酸痛(0.754)、腰膝酸软(0.720)、腰膝怕冷(0.466),F3的代表性变量为情绪低落(0.749)、不寐(0.711)、五更泄泻(0.470),F4的代表性变量为苔薄(0.819)、苔白(0.768),F5的代表性变量为耳鸣耳聋(0.687)、夜尿频多(0.591)、性欲减退(0.587),F6的代表性变量为脉沉(0.766)、脉弱(0.736),F7的代表性变量为脉细(0.942),F8的代表性变量为舌淡(0.961),这些公因子涉及的病位外候为腰、骨、脑、耳、前后二阴及生殖功能,病性为虚和寒。结论肾阳虚证的基本构成单位包括病位证候要素和病性证候要素,其病位在肾,肾之病位异常变化以腰、骨、脑、耳、前后二阴及生殖功能为主要外候;其病性为虚寒,所谓“阳虚则外寒”,由于阳气虚衰不能温煦体表,导致了外寒证候的出现。

枸杞多糖通过调节免疫在肿瘤免疫治疗中的应用前景分析

以PD-1/PD-L1单抗为代表的肿瘤免疫治疗是目前为止最具前景的肿瘤治疗方法,但是还需要寻找新的策略以提高临床疗效。枸杞多糖是中药枸杞的主要活性成分,具有调节淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、红细胞和NK细胞等免疫细胞功能的作用。文献报道该多糖可以通过TLR受体激活树突状细胞和巨噬细胞,进而影响淋巴细胞的功能。基于此,人们发现将该多糖应用于多种动物肿瘤模型治疗有良好效果,并发现其在人体肿瘤放化疗中具有减毒增效的作用。最新的研究发现枸杞多糖对小鼠肾细胞癌和肝癌的免疫治疗具有增效作用。这些研究结果表明枸杞多糖通过调节免疫在肿瘤免疫治疗中具有良好的应用前景。

基于内质网应激探讨糖肾平对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏保护作用及MCP-1/CCR2信号通路的影响

目的:观察糖肾平对db/db小鼠肾脏内质网应激及其对MCP-1/CCR2信号通路的影响,探究糖肾平减轻足细胞损伤,延缓糖尿病肾病进展的作用机制。方法:24只db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组和糖肾平组,以10只db/m作为对照组。观察小鼠一般状况,称取体质量、检测24 h尿蛋白定量;给药第0周和第12周检测各组小鼠空腹血糖和24 h尿蛋白定量;干预12周后取材,收集血清检测小鼠肾功能相关指标:血肌酐(Scr)和血尿素(UREA);检测血脂相关指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度胆固醇(LDL)水平;采用HE染色、PAS染色、Mallory染色和透射电镜观察肾组织病理形态;免疫组化检测小鼠肾组织GRP78、pAKT、AKT、MCP-1、CCR2和Nephrin蛋白表达;Western Blot检测GRP78、MCP-1、CCR2和Nephrin蛋白表达;Real-time PCR检测小鼠肾组织GRP78和Nephrin mRNA的表达。结果:与模型组比较,糖肾平组小鼠一般状态明显改善,体质量和24 h尿蛋白定量显著减少,Scr、UREA、TC、TG和LDL显著降低,病理染色显示肾组织损伤减轻,电镜观察发现足突融合和基底膜增厚减轻,肾组织GRP78、MCP-1、CCR2蛋白和mRNA下调,Nephrin蛋白和mRNA表达上调。结论:糖肾平通过调节内质网应激水平,抑制MCP-1/CCR2激活,维持足细胞形态稳定,进而保证肾小球滤过屏障完整,减少蛋白尿的发生,从而延缓DKD进展。

基于Keap1/Nrf2/Ho-1信号转导通路探讨糖肾宁防治糖尿病肾病的作用机制

目的:通过网络药理学和体内外实验探究糖肾宁对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾脏的保护作用和对糖基化终末产物(AGEs)诱导的HK-2细胞损伤的影响,以及对Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/血红素加氯酶1(Ho-1)信号转导通路的调节作用。方法:通过TCMSP筛选糖肾宁药物靶点,通过GenGards、OMIM、drugbank、TTD、Disgenet数据库筛选DKD作用靶点,取公共靶点进行PPI网络分析并进行GO和KEGG预测。将40只SD大鼠,随机分为正常组10只,造模组30只;造模组给予高糖高脂饲料喂养8周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)构建DKD模型;将成模动物随机分为模型组,厄贝沙坦(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,糖肾宁组(1.05 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只;正常组与模型组灌胃等体积的去离子水;观察大鼠一般状况,称体质量、测24 h尿蛋白定量;干预16周后取材,收集血清检测血尿素(Urea)、血肌酐(Scr),血脂(TG、TC、LDL)、氧化应激(ROS、NO、SOD)指标;采用HE染色、Mallory染色和透射电镜观察肾组织病理形态;Western Blot和RT-PCR检测大鼠肾组织中Keap1、Nrf2、Ho-1、Gpx4蛋白及mRNA表达。体外培养HK-2细胞,并分为空白组、AGEs组(200μg/mL)、无药血清组、糖肾宁组,各组细胞培养48 h后,使用CCK-8法检测细胞活性,荧光探针法观察活性氧表达情况。结果:网络药理分析预测糖肾宁可能通过影响氧化还原相关信号通路,调控AGEs诱导的氧化应激反应,防治DKD肾损伤。体内实验中,与模型组比较,糖肾宁组大鼠一般状态改善,24 h尿蛋白定量显著减少(P<0.01),血清Scr含量降低(P<0.05),Urea有降低趋势,TC、TG、LDL显著降低(P<0.01,P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.05),病理染色显示肾间质纤维化明显减轻,电镜观察发现足突融合、粘连情况减轻,糖肾宁组肾组织Keap1蛋白和mRNA表达降低(P<0.01),Nrf2、Ho-1、Gpx4蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。体外实验中,AGEs诱导48 h后,HK-2细胞受到明显氧化应激损伤,细胞活性显著下降(P<0.01),糖肾宁组ROS含量减少,细胞活性显著升高(P<0.01)。结论:糖肾宁可以保护DKD大鼠的肾功能,降低AGEs诱导的肾小管上皮细胞氧化应激损伤,从而延缓DKD疾病进展,其机制可能是通过激活Keap1/Nrf2/Ho-1信号转导通路实现的。

基于数据挖掘分析256例慢性肾脏病肾阳虚证候的演变规律

目的:分析肾阳虚证候在不同慢性肾脏病(CKD)病程阶段和时间演变中的变化特征,从而探索肾阳虚证候在CKD中的演变规律。方法:按照相关标准于2020年10月至2022年9月收集256例CKD患者的证候信息,制定“慢性肾脏病肾阳虚证评价量表”,利用SPSS Statistics 20.0软件、SPSS Modeler 18.0软件、Gephi 0.9.2软件和R 4.2.1软件,采用复杂网络分析、关联规则分析、概率转移矩阵分析和卡方检验等方法对CKD各期人群的证候信息及1周年时的证候变化进行数据挖掘和统计分析,并对各期患者的肾阳虚证进行综合评价。结果:在CKD人群中,女性中的肾阳虚证比例显著高于男性(P<0.01),65岁以上人群中占比高于65岁以下人群,并且随着肾病进展,肾阳虚证人群比例上升,CKD Ⅳ~Ⅴ期人群中的肾阳虚证比例显著高于CKD Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01)。CKD Ⅰ~Ⅴ期,暗淡舌频率持续升高,胖大舌和齿痕舌在CKD Ⅲ期以后频率升高,厚苔和腻苔在CKDⅤ期位居频率分布的前3位,在CKD Ⅲ期以后,位居频率分布前3位的全是以肾阳虚证为特征的弱脉、沉脉和细脉。舌脉复杂网络分析显示CKD终末期患者的核心舌脉特征是齿痕舌、白苔、沉脉和细脉。症状频数分析和复杂网络分析结果显示,畏寒喜暖、膝软乏力、形寒肢冷是CKD Ⅰ~Ⅲ期肾阳虚证患者症状频率分布位居前3位的主要症状,在CKD Ⅳ~Ⅴ期,困倦乏力、水肿、夜尿频多等阳虚水泛的表现成为特征性症状。水肿、面色晄白、腰膝酸软、便溏、精神萎靡症状的积分及肾阳虚证总积分随疾病进展逐渐升高,在CKD不同阶段之间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。病性证素频数分析显示,随着疾病进展,阳虚证、痰湿证、血瘀证、浊毒证频率逐渐升高并且在CKD不同阶段分布具差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。复杂网络分析结果显示阳虚证是贯穿CKD各期的核心证素,是CKD的主要证素类型,而痰湿证、血瘀证和浊毒证等兼证在CKD中后期逐渐显现。在CKD肾阳虚证人群中,作为兼夹证的痰湿证、血瘀证和浊毒证在不同CKD阶段的分布具差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),关联规则分析显示,随着疾病进展,痰湿证、血瘀证、浊毒证和饮停证这些兼证与肾阳虚证的关联程度逐渐增强。比较CKD肾阳虚证在1年内的变化情况,结果显示,病位以肾为中心,在脾、胃、心和肝之间传变,肾阳虚证有23.81%的概率向气虚相关证候(脾肾气虚、肝郁脾虚和心气亏虚)转化,23.79%向阴虚相关证候(肝肾阴虚,气阴两虚和肝胃阴虚)转化,9.52%向湿证相关证候(痰湿内阻和风湿痹阻)转化。而脾肾气虚证有20%向肾阳虚证转化,气虚血瘀证有33.33%向肾阳虚证转化。结论:随着CKD Ⅰ期进展到CKD Ⅴ期,肾阳虚症状的严重程度在逐渐加重,肾阳虚证候特征逐渐显著,并且痰湿、血瘀和浊毒等实邪证素在逐渐增多。随着时间的变化,CKD肾阳虚证有向气虚、阴虚和湿证相关证候演变的趋势。这些规律的发现,为CKD辨证论治提供了理论基础和参考指导。

慢性肾脏病肾阳虚证证候特征与临床生物学指标相关性及危险因素

目的:观察慢性肾脏病(CKD)肾阳虚证证候特征、与临床指标的相关性并探索影响CKD肾阳虚证的危险因素。方法:通过对符合纳入标准的225例慢性肾脏病患者进行中医证候判断,获得肾阳虚证组99例,非肾阳虚证组126例。总结肾阳虚证组症状、舌脉及兼证,运用因子分析和聚类分析归纳证候特征,运用方差分析及非参数检验方法比较肾阳虚证组、非肾阳虚证组及正常对照组之间的血红蛋白、红细胞计数、尿蛋白、尿葡萄糖、肌酐、尿素氮、肾小球滤过率水平,采用二分类Logistic回归分析模型对生活习惯、身体质量指数(BMI)、血糖、血脂等危险因素进行证候相关性分析。结果:CKD肾阳虚证患者高频症状是腰部酸痛、畏寒喜暖、精神萎靡、腰膝畏寒等。脉象以沉脉、细脉、弱脉为主,舌象中以白苔、暗淡舌、薄苔、腻苔为主。因子分析获得13个公因子分为5类,发现肾阳虚证患者症状病位在四肢尤以下肢为主、心胸、膀胱、肌表和胃部,病性表现主要是虚寒、气虚、水饮及血瘀。聚类分析可聚为11类,反映了肾阳虚证患者以气虚、血瘀和水饮停滞为主的舌脉及症状表现,证候体现病位特征集中在肌表、四肢、脾胃、耳窍、心神和膀胱等,总体而言病性表现与因子分析基本一致,一派虚寒衰弱表现兼有水饮、血瘀表现。频数分析也显示常见兼证证候要素主要包括气虚证、饮停证、寒湿证、血瘀证。与非肾阳虚证组比较,肾阳虚证组CKD 3-5期出现比例更高,肾功能尿素氮明显增高(P<0.05),肾小球滤过率明显降低(P<0.05);血红蛋白和红细胞计数明显降低(P<0.05);尿蛋白定性等级明显提升。此外,经回归分析结果显示女性、不运动或很少运动、存在饮食偏嗜是CKD肾阳虚证产生的危险因素(P<0.05)。结论:CKD肾阳虚证症状表现在病位病性表现上均具有相应特征,其中医证型与其对应的生物学指标具有一定程度上的相关性,血红蛋白、红细胞计数及肾小球滤过率、尿素氮和尿蛋白等能够一定程度反映CKD肾阳虚证的证候内涵,生活中相关危险因素能够影响CKD肾阳虚证的产生。