2023年度输血医学科研新进展

输血医学与人工智能、材料科学和多组学等前沿科学不断交叉融合,我们对输血医学的认识不断深入和完善。本文就2023年度输血医学基础及临床治疗领域的主要科研进展,特别是血细胞的“生”、“老”、“病”、“死”、“治”等方面的部分代表性成果作简要概述。

跨文化敏感度对提高外语学习者跨文化交际能力的影响

由于经济全球化的快速发展,跨文化交际能力越来越成为衡量当代人才培养的重要组成部分。而跨文化敏感度作为跨文化交际能力的情感层面,在成功的跨文化交际中也起到了非常重要的作用。文章针对跨文化敏感度对跨文化能力培养的重要影响入手,目的在于提高中国学者的跨文化交际能力。

血小板低下对树突状细胞在体迁移与归巢模式的影响研究

目的:探讨血小板低下对过继性树突状细胞(DC)在体内迁移模式的影响。方法:腹腔注射抗CD41单克隆抗体以建立血小板低下小鼠模型。将带报告基因的骨髓来源DC经脚垫和静脉两种途径输注至血小板低下和正常小鼠体内,用活体成像技术监测DC在小鼠体内的迁移和组织内分布情况。结果:经抗GPⅡb抗体处理组小鼠体内80%以上血小板被清除。DC经脚垫回输72 h后,在血小板低下组迁移到腘窝淋巴结(PLN)和腹股沟淋巴结(ILN)的比例分别为(0.32±0.02)%和(0.02±0.01)%;对照组上述两部位内为(0.27±0.15)%和(0.02±0.02)%。两组之间无统计学差异(P>0.05)。经静脉输注DC 72 h后,血小板低下组和对照组小鼠组织内的分布均主要集中在脾脏、肝脏引流淋巴结、肺脏和肝脏等,且分布比例无统计学差异。结论:小鼠体内血小板低下至不足20%时,对经皮下和静脉两种途径输注的DC在体内迁移和组织分布无明显影响。

雷帕霉素诱导耐受性树突状细胞抑制急性移植物抗宿主病的动物实验

目的探讨雷帕霉素（RAPA）诱导过继性输注的耐受性树突状细胞（DCs）对急性移植物抗宿主病（a GVHD）的治疗效果。方法分离15只BALB/C雄性小鼠（MHC为H-2Kd）的骨髓细胞及脾细胞,输注入经8.5Gy辐射处理（TBI照射）的30只雄性C57BL/6J小鼠（MHC为H-2Kb）中建立a GVHD模型（BALB/C→C57BL/6J）;为验证a GVHD造模是否成功,将C57BL/6J小鼠分为MHC不合移植组、MHC相合移植组及单纯TBI照射组（10只/组）,3组小鼠经8.5 Gy TBI照射后分别输入BALB/C来源骨髓细胞及脾细胞、C57BL/6J来源骨髓细胞及脾细胞及同等体积PBS对照,采用流式细胞术检测供鼠植入比例并观察受鼠存活情况。体外培养受鼠骨髓来源DCs,加入RAPA以诱导耐受性DCs（RAPA-t DCs）,加入PBS作为对照DCs（PBS-DCs）。将a GVHD模型鼠随机分为3组（10只/组）,分别是RAPA-t DCs实验组（静脉输注RAPA-t DCs 4!106/只）、PBS-DCs对照组（静脉输注PBS-DCs 4!106/只）及PBS对照组（静脉输注PBS）;采用活体荧光成像观察DCs在a GVHD小鼠体内的迁移、分布情况;同时监测3组小鼠的平均体重波动并统计生存率,评价RAPA-t DCs对小鼠a GVHD的抑制效果。结果流式细胞术检测：与PBS-DCs组小鼠比较,RAPA-t DCs组小鼠DCs表面的CD40、CD80、CD86和MHCII表达丰度明显受到抑制（P〈0.05）;2组小鼠DCs表面趋化因子受体CCR1平均荧光强度（MFI）为14.5±1.4 vs.10.0±2.1,表面趋化因子受体CCR5为12.7±2.3 vs 7.2±1.2（P〈0.05）,表面趋化因子受体CCR7为7.8±1.3 vs.6.2±2.5（P〉0.05）。活体成像分析：RAPA处理不影响DCs在体迁移能力,RAPA-t DCs仍可归巢至淋巴结、脾脏等淋巴组织或器官。PBS-DCs组和RAPA-t DCs组a GVHD小鼠在移植后19 d体重（g）下降-2.4±1.5 vs-1.9±1.2（P〈0.05）,生存期（d）延长10.1±5.5 vs 16.6±6.7（P〈0.05）,但各组小鼠最终均全部死亡,整体生存率无差异。结论 RAPA可通过抑制小鼠DCs表面共刺激分子的表达诱导DCs耐受,过继性RAPA-t DCs仍具备一定的T细胞富集区归巢能力;过继性输注RAPAt DCs可一定程度缓解小鼠a GVHD,延长小鼠生存期,但对其整体存活率无明显改善。

全血在应急输血救治中的应用进展

输血救治是抢救重度出血伤员的重要环节。随着输血医学的发展和进步,人类输血历史从最初的全血输注逐渐发展为成分血输注。而近年来美、英、法等国家在战场上院前救治中使用全血得到更好损伤控制复苏效果的经验使全血重新受到了输血医学界重视。本文主要通过全血输注优势、全血的采集与存储、全血的战时应用与临床疗效以及全血相关实验研究4个方面来介绍紧急状态下全血输注带给重度出血伤员的益处,它可以改善伤员的预后,提高伤员的生存率。

2020年度输血医学科研新进展

随着科研的发掘以及各种新技术新材料在输血医学领域的交叉和应用,输血医学的内容每一年都在不断被补充和完善。本文总结了2020年度输血医学相关重要研究进展。

双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立

目的构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具。方法通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-UbiGluc)。利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性。结果筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western印迹检测到HCV NS5A蛋白表达。NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移。IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低。结论该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值。

高压水动力法建立肝特异性白细胞介素-6报告基因小鼠模型

目的建立一种可实时、无创、特异监测肝白细胞介素-6(IL-6)瞬时表达的小鼠模型。方法通过水动力高压转染法将IL-6启动子启动的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因载体定向转染至小鼠肝,采用活体生物发光成像检测炎症刺激条件下肝Fluc的表达情况,并考察发光强度与肝IL-6表达的相关关系。结果高压水动力法成功将p IL-6-Fluc报告基因递送至小鼠肝,约使20%肝实质细胞表达目的基因。该法可造成一过性肝损伤但可在5~7 d恢复正常。p IL-6-Fluc可被脂多糖(LPS)激活,峰值时可上升(46.80±13.35)倍,远高于ELISA检测结果[(4.09±0.96)倍]。结论通过尾静脉水动力高压转染法可将p IL-6-Fluc特异性地递送至小鼠肝进而建立活体成像法检测小鼠肝IL-6瞬时表达模型;经验证,该模型可特异性地反映IL-6激活情况,且其灵敏度高于经典的ELISA方法。

腺病毒转染法构建表达乙型肝炎病毒核心蛋白小鼠肝癌细胞系及其在乙肝疫苗评价中的应用

目的构建一种可高效表达乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）核心蛋白（HBc）C57BL／6小鼠来源肝癌细胞系，并以其作为靶细胞评价乙肝基因疫苗在C57BL／6小鼠体内所引起的HBe特异性细胞毒性T细胞（CTL）的活性。方法以HBV全基因组为模板，采用PCR方法扩增HBe基因，插入AdEasy腺病毒穿梭载体，构建携带HBe蛋白的腺病毒穿梭载体AD—HBe，电转携带有腺病毒骨架质粒（Ad—Easy）的EcoliBJ5183感受态细胞，获得重组腺病毒质粒AD-CMV．HBc，经Pme，线性化处理后转染HEK293细胞进行包装得到相关的重组腺病毒，再感染C57BL／6小鼠来源肝癌细胞系Hepal-6。结果成功构建表达HBc蛋白的重组腺病毒，在体外对Hepal一6细胞的感染率几乎为100％，并且HBc蛋白得到高效表达。以此为靶细胞用于pVAX1-HBe基因疫苗免疫C57BL／6小鼠产生的CTL活性的体外检测。结论我们成功构建HBe蛋白表达的靶细胞系，对研究乙肝病毒核心抗原（HBcAg）所引起的细胞免疫反应及乙肝发病机理等方面有重要意义。

不同保存时间对4℃储存全血凝血功能的影响

目的探讨不同储存时间全血凝血功能变化,为战创伤/应急全血输注提供科学依据。方法采集60 ml枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖-腺嘌呤溶液(CPDA)抗凝全血25份,4℃冰箱储存,分别在储存第0、7、14、21、28、35天取样进行血栓弹力图(TEG)、血小板(PLT)计数、生化及其他血液学指标的检测。结果随着储存时间的延长,全血TEG R值变化不大;K值逐渐增大,在第28天高于正常值上限;Angle角逐渐减小,在第35天时低于正常值下限;MA值逐渐降低,在第28天时低于正常值下限。PLT计数逐渐降低,在第28天时低于正常值下限。生化及其他血液学指标中,白细胞(WBC)计数和Na^+逐渐降低;凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)逐渐升高;红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(Hct)、纤维蛋白原(Fbg)变化不大。结论全血在4℃储存21 d时,TEG MA值和PLT较新鲜全血虽有明显下降,但仍在正常范围之内,具备良好的凝血功能,可用于战创伤/应急输血救治。

小鼠NK细胞体内扩增、分离纯化的方法研究

目的为获得一定数量高纯度的自然杀伤细胞(natural killer cells,NK),拟采用水动力高压转染技术实现Flt-3配体(Flt-3 ligand,FL)基因在小鼠肝的高效表达,以刺激脾NK细胞体内扩增,随后通过优化免疫微磁珠分选(MACS)技术获取大量、高纯度NK细胞,为细胞治疗提供支撑。方法 C57BL/6小鼠经多次水动力高压转染FL表达质粒后,流式细胞术检测脾NK细胞的扩增程度及表型变化,并通过MACS技术分离纯化NK细胞。结果与一次水动力高压转染FL目的质粒的结果相比,两次水动力转染后小鼠脾明显增大,淋巴细胞绝对数量增加(6.02±1.15)倍,NK细胞亚群比例增加(2.07±0.39)倍,NK细胞亚群绝对数量增加(12.49±2.39)倍。同时,FL刺激对NK细胞活性及表型无明显影响。最后,经偶联CD5(Ly-1)磁珠阳选和去除T、B等多种杂细胞磁珠阴选相结合的双重分选方法,可获得纯度为(83.81±0.92)%的NK细胞,较单独阴选纯度提高(1.60±0.02)倍。结论经两次FL表达质粒水动力高压转染,可在不影响NK细胞活性及表型的前提下,实现其在小鼠脾的大量扩增。阳选和阴选相结合的双重MACS分选技术能有效去除T、B等杂细胞影响,获取高纯度NK细胞,为肿瘤细胞免疫治疗奠定基础。