动物模型BLUP法评定内蒙古白绒山羊的遗传趋势

本研究应用动物模型BLUP法估计了1989～1998年内蒙古鄂托克旗阿尔巴斯白绒山羊种羊场抓绒量和抓绒后体重的遗传进展。结果为抓绒量的遗传进展呈上升趋势，抓绒后体重的遗传进展基本平稳。研究表明，内蒙古白绒山羊根据个体表型值选种，存在准确性较差和难以同时兼顾两个性状的缺点。本文认为今后内蒙古白绒山羊选种方法应该采用动物模型BLUP法。

生长因子对山羊无腔卵泡卵母细胞体外生长的影响

山羊无腔卵泡卵母细胞在胰岛素样生长因子I(IGF I)和表皮生长因子 (EGF)及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)单独或联合存在时 ,与FSH一道体外培养 9d ,结果表明 ,IGF I( 10 0ng/mL)能有效地维持卵泡卵母细胞的存活并促进其生长 ,存活率达 75 0 0 % ,相对生长率达 4 5 0 6% ;EGF( 50ng/mL)能提高卵泡卵母细胞的体外存活率 ,类似于IGF I ,但对其生长相对表现出抑制影响 ;bFGF( 50ng/mL)对卵泡卵母细胞的体外存活具有促进作用 ,但对卵母细胞生长的促进作用不明显 (卵母细胞的存活率为 76 92 % ,相对生长率为 31 55% )。IGF I( 10 0ng/mL)和EGF( 50ng/mL)联合存在时 ,不论是对卵泡卵母细胞的存活 ,还是对生长均产生了最好的效果 ,卵母细胞存活率达到 90 91% ,相对生长达 4 8 2 4 %。本试验结果一个共同点是在FSH存在的情况下 ,这 3种生长因子单独或有选择的联合 。

山羊卵巢无腔卵泡卵母细胞的体外生长

山羊卵巢无腔卵泡卵母细胞在以ＤＭＥＭ为基础，添加ＨＥＰＥＳ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＦＣＳ（１０％）、ＦＳＨ（４０ｍｇ／Ｌ）、次黄嘌呤（２ｍｍｏｌ／Ｌ）、异双丁酰环腺苷酸（２ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＩＧＦ－Ｉ（５０μｇ／Ｌ）、氢化可的松（４０μｇ／Ｌ）和ＩＴＳ（５０μｇ／Ｌ）的培养液中得以存活并生长。在二维培养体系中，卵泡在体外的生长模式和体内有很大差别。最显著的特征是卵泡不像在体内那样保持完整的立体结构一直到结束。绝大部分卵泡不同程度地发生基膜溶解和破裂，颗粒细胞向四周扩展并贴壁，形成单层。由于卵泡原有三维立体结构的破坏，易于导致卵母细胞的迁移。在生长方式上以数个卵泡聚集生长对其卵母细胞的生长似乎较为有利。卵泡卵母细胞在体外培养９ｄ，其直径可达１５０μｍ以上，达到了成熟时体积，存活率为５３％。实验证明，山羊无腔卵泡卵母细胞在合适的培养体系中，能在体外存活并生长，并能发育到成熟时的大小。

牛卵巢腔前卵泡的机械分离试验

机械方法处理胎牛、犊牛和成年牛卵巢可以获得大量的腔前卵泡。胎牛卵巢用眼科手术剪刀剪碎（Ｍ１）或用组织切碎机切碎（Ｍ２），犊牛和成年牛卵巢用组织切碎机切碎，经悬浮吹打和过滤，平均每只卵巢可获得腔前卵泡胎牛为３２８２（Ｍ１）和５６８８（Ｍ２），犊牛为２１００，成年牛为３５２．在所分离的胎牛和犊牛卵巢卵泡中原始卵泡和初级卵泡占绝大部分，而成年牛卵巢卵泡主要是初级卵泡和次级卵泡。不论是胎牛、犊牛或成年牛。

山羊卵巢无腔卵泡的体外发育

在三维琼脂凝胶培养体系中 ,山羊无腔卵泡的生长模式类似于体内。在一定培养时间内能善为保持其完整的立体结构和形态。原始卵泡能在体外启动 ,并得到一定程度的生长。初级卵泡能发育为次级卵泡 ,次级卵泡发育为有腔卵泡。卵泡在体外发育过程中 ,表现出了明显的优势化。本试验首次初步揭示了山羊无腔卵泡的体外发育基本过程和规律。

哺乳动物腔前卵泡的体内和体外发育

对哺乳动物包括啮齿类和家畜等卵巢腔前卵泡体内和体外发育，近几年的研究结果进行分析，认为哺乳动物卵巢腔前卵泡体内的发育模式基本相似，但不同动物又具有各自的特点。腔前卵泡在合适的培养条件下能在体外发育并成熟，促性腺激素和生长因子等在其体外发育过程中具有调节作用。发育过程中卵泡质量的鉴定和卵母细胞标准的确定及培养体系的建立是该领域需要解决的问题。

山羊离体腔前卵泡的超微结构

对分离出来的山羊活体腔前印泡的超微结构进行了观察。结果表明，卵泡的外周由两层纤维状结构组成的基膜覆盖，基膜与颗粒细胞相连。卵泡卵母细胞的线粒体外观呈圆形，具有不发达的板状嵴。这些发现为腔前印泡的鉴定提供了超微结构上的依据。

与绵羊KAP6-1相似的6个绒山羊全长cDNA的克隆与序列分析

用SMARTTM技术构建了绒山羊体侧部皮肤组织的cDNA文库 ,随机挑选克隆提取质粒 ,用M13正向测序引物对插入片段进行测序 ,得到 6 36个cDNA序列。与GenBank数据库比对 ,有 4 1个序列与绵羊角蛋白关联蛋白(KeratinAssociatedProtein ,KAP6 1)cDNA高度同源。 4 1个序列可归为 6个不同的cDNA ,GenBank登陆号分别为AY310 74 9、AY310 75 0、AY310 75 1、AY310 75 2、AY310 75 3和AY310 75 4。与绵羊KAP6 1基因组基因比较 ,推测这 6个序列为全长cDNA ,分别为编码 82、84、71、71、83和 83个氨基酸的碱性蛋白质 ,甘氨酸和酪氨酸的含量大于 6 0 % ,它们之间核苷酸序列的一致性大于 5 5 4 % ,读码框氨基酸序列的一致性大于 79 8%。与其他物种KAP6s比较 ,绒山羊的 6个cDNA和绵羊的KAP6 1cDNA的序列一致性最高 ,为 81 9%～ 98 8% ,不同物种KAP6 1之间氨基酸序列一致性大于 5 0 %。

内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤cDNA文库的构建及KAP6-2 cDNA的克隆

用SMART技术构建了绒山羊 (Caprahircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。TrizolReagent(GIBCO/BRL)分离RNA后 ,用Oligotex (QIAGEN)提取mRNA ;以锚定引物反转录合成cDNA第一链作为模板 ,以 2个锚定引物 ,用长链PCR扩增全长cDNA双链。CHROMASPIN 4 0 0去除小片段后用SfiⅠ酶切 ,连接到SfiⅠ消化的pBluescriptⅡSK (带有SfiⅠA和B两个位点 )质粒载体中 ,转化E .coli 5α ,库容量为 1 8×10 5clones。随机挑选克隆提取质粒 ,5′测定插入片段的核苷酸序列 ,与GenBank数据库比对后发现 1个KAP6 2cDNA ,序列号为AY316 15 8。绒山羊KAP6 2由 6 75个核苷酸组成 ,编码 96个氨基酸 ,具有高甘氨酸

动物模型BLUP法估计内蒙古白绒山羊育种值的研究

应用动物模型BLUP法估计了阿尔巴斯白绒山羊种羊场1989～1998年共10个年度3 981只个体的抓绒量和体重的单性状育种值，以及这两个性状的综合育种值。在模型中考虑的固定效应有年龄效应和性别柸禾鍠年度效应、随机效应有个体的加性效应和个体永久性环境效应。比较育种值选择与表型值选择的结果表明：（1）公羔依据断乳重选择与依据育种值选择的结果差异较大；（2）育成母羊依据表型值选择与依据综合育种值选择的结果差异极显著（P＜0.01）；（3）育成公羊依据表型值选择与依据综合育种值选择的结果差异极显著（P＜0.01）；（4）种公羊依据抓绒量和体重的表型值选择结果分别与依据各自性状育种值选择结果的秩相关均未达到显著水平（P＞0.05）。研究表明：内蒙古白绒山羊应用个体表型值选种存在准确性较差的缺点；动物模型BLUP法适合用于内蒙古白绒山羊的选种。并根据生产实际情况提出了一套选择种公羊的具体方法。

基于转录组数据的蒙古牛皮肤组织抗寒相关信号通路及候选基因的筛选

本研究旨在通过对冬夏两季蒙古牛皮肤组织进行转录组测序和生物信息学分析,找到与蒙古牛抗寒性状相关的信号通路及候选基因。用Ion ProtonTMSequencer分别对冬季和夏季成年蒙古牛的皮肤组织进行转录组测序,随后对转录组数据进行处理、与参考基因组比对、差异表达分析、GO和KEGG富集分析以及候选基因筛选,并用Real-time PCR方法对转录组数据进行可靠性检测。结果显示,冬季组和夏季组分别得到86 954 060和69 837 009条reads;冬季组与参考基因组的唯一比对率为73.21%,夏季组为75.55%;冬夏两组共有182个差异表达基因(DEGs),与夏季组相比,其中117个在冬季组中上调,65个在冬季组中下调;Real-time PCR分析显示,转录组测序结果可靠;GO分析结果显示,细胞组分、分子功能、生物学过程分别富集到21、39和224个term;KEGG分析结果显示,差异表达基因(DEGs)显著地富集在脂类代谢、凝血、酪氨酸代谢、类固醇合成和视黄醇代谢相关通路上;共筛选出8个候选基因。综上表明,脂类代谢、凝血、黑色素合成相关通路和基因,以及与毛发发生相关的基因可能在蒙古牛抗寒过程中发挥重要作用。

哺乳动物印记域DLK1-DIO3的研究进展

DLK1-DIO3印记域定位于人14号染色体、小鼠12号染色体及绵羊18号染色体远端,在真哺乳亚纲动物中印记保守。该印记域包含3个编码蛋白的父系表达基因Dlk1、Rtl1和Dio3以及若干大小不同的母系表达印记非编码RNA,如miRNAs、snoRNAs和大型非编码RNA Gtl2等。人和小鼠该印记域内印记基因剂量的改变将导致严重的表型异常甚至胚胎致死,暗示正常的发育需要域内印记基因的正常表达。文章重点论述了哺乳动物DLK1-DIO3印记域的印记调控机制和域内印记基因及其功能的研究进展。

蒙古羊骨髓间充质干细胞的分离培养及多向诱导分化

本研究旨在建立蒙古羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)体外分离、纯化、增殖方法,诱导其向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。穿刺法抽取蒙古羊骨髓组织,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化BMSC,增殖,并测定其生长曲线及细胞倍增时间。对第3代蒙古羊BMSC进行成脂、成骨及成软骨诱导,观察诱导后的细胞形态。采用油红O、茜素红、HE等染色法在组织学水平对BMSC进行成脂、成骨和成软骨分化鉴定。结果显示,蒙古羊BMSC呈现均一梭形成纤维细胞样生长,生长曲线呈S型,生长增殖能力良好。在不同分化诱导之后,细胞呈现脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的表型特征。表明获得的蒙古羊BMSC具有多向分化潜能,所分离细胞确为骨髓间充质干细胞。

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系，对山羊卵泡卵母细胞的采集方法，FSH和LH对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的作用，及培养时间对卵母细胞体外成熟的影响进行了研究。结果表明：采用切割法平均每枚卵巢采集到的A，B级卵母细胞的数量明显多于抽吸法；采用TCM199添加体积分数为10％FCS，1—2mg／L17β-B，10mmol／LHepes，0．12mg／mL丙酮酸钠，0．1mg／mL链霉素和0．125mg／mL青霉素，10mg／LFSH及20—50mg／LLH的培养体系，有利于山羊卵母细胞的体外成熟，并放出第一极体。山羊卵母细胞体外成熟培养20，22，24h，成熟率显著高于培养18，26，30h（P〈0．05）。

CIDR放置时间、不同饲养管理模式、重复超数排卵及发情时间对绵羊超数排卵的影响

本试验旨在研究绵羊孕酮控制释放器(CIDR)放置时间、不同饲养管理模式、重复超数排卵次数及超数排卵后发情时间对绵羊超数排卵的影响。CIDR放置不同时间结果显示,第10天起针组的平均可用胚胎数(P<0.05)、胚胎可用率(P<0.01)均高于第13天起针组;不同饲养管理模式结果显示,舍饲羊平均可用胚胎数、胚胎可用率极显著高于放牧羊(P<0.01);不同次数超数排卵结果显示,第2次超数排卵效果好于其他5次,与第3次之间差异不显著(P>0.05),与其他4次之间差异显著(P<0.05);通过比较绵羊超数排卵后发情效果发现,绵羊超数排卵后发情24h的胚胎利用效果最佳。综上所述,CIDR放置时间、不同饲养管理模式、重复超数排卵次数对供体绵羊超数排卵效果的影响极显著,且供体绵羊超数排卵后发情24h的胚胎利用效果最佳。

蒙古绵羊胎儿皮肤成纤维细胞分离培养与特性分析

本研究以蒙古绵羊胎儿为材料,进行了胎儿性别鉴定,结果显示为雄性。取其皮肤组织进行离体培养,对所获得的细胞进行纯化,筛选出成纤维细胞。通过形态观察发现,在10代以内,细胞形态良好,随着代数增加梭型细胞有拉长趋势,在第20代时梭形明显拉长,单位面积细胞数目大量减少;同时做了F5、F10代细胞的生长曲线,发现随着代数的增长,细胞生长力略有下降,但趋势不明显;对F5、F10代细胞做了核型分析,二倍体比率分别为85.71%和76.67%,这满足了作为核移植供体细胞的要求;细胞冻存后复苏贴壁情况良好。

冠状病毒的新成员——SARS-CoV的基因组特性

20 0 3年 3月 ,人类发现一种新的冠状病毒SARS CoV ,这种病毒是非典型性肺炎 (SARS)的病原体。SARS CoV的基因组序列已经由包括中国科学家在内的全世界的科研人员测定完成。该文对国际报道的SARS病源的基因序列进行了收录 ,阐述了SARS CoV基因组的基本特性 :SARS CoV的基因组长约 2 8～ 30kb ,与冠状病毒科的基因组长度相符合 ,其中包括 11个编码序列 ,基因组的组织方式也与其他冠状病毒类似 ,从表面蛋白 (S蛋白 )、外膜蛋白 (M蛋白 )和核蛋白 (N蛋白 )上看 ,SARS病毒与其他冠状病毒的对应蛋白进化关系接近。同时发现 ,在某些区域 ,SARS病毒的基因序列与其他冠状病毒存在相当大的差异 ,具有自身比较保守的基因组序列结构。而且氨基酸的序列也与其他冠状病毒有很大程度的不同。基因信息的冗余分析表明 ,SARS CoV具有较低的冗余度 ,即发生变异的可能性比较大。虽然SARS CoV外表与冠状病毒类似 ,亲缘关系未超出冠状病毒科界限 ,但由于蛋白基因与氨基酸的序列与其他冠状病毒有本质不同 ,因此可能不是其他冠状病毒的变异体 ,而是一种与冠状病毒类似、但早已独立存在。

蒙古马基因组拷贝数变异的研究

拷贝数变异(copy number variation,CNV)在人类和动物基因组中普遍存在,是重要的遗传变异资源。本试验利用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)芯片对2匹蒙古马和1匹纯血马进行全基因组CNV检测,共检测到210个CNVs,长度6 109bp至571.87kb,平均值为37.81kb,中值为14.45kb。合并重叠的CNVs,共检测到70个CNV区域(CNV region,CNVR),大小从6 151bp至573.59kb,平均值和中值分别为38.93和14.45kb,总长度为6.19Mb。经CNV基因注释和功能分析发现,大部分基因与嗅觉受体活性、嗅觉感官知觉、化学刺激的感官知觉、识别和嗅觉传导等功能相关。对5个CNVRs进行qPCR检验,83.33%的qPCR结果与CGH芯片结果一致。通过对蒙古马基因组拷贝数变异的研究,证明CNV在马基因组中普遍存在,为揭示马基因组CNV与重要生物性状的关联性及品种改良奠定了基础。

蒙古羊羊水源干细胞分离培养及其成骨分化研究

试验旨在建立羊水源干细胞系并对其诱导形成成骨细胞的潜能进行研究。在胎牛血清浓度为15%的条件下对羊水源干细胞进行建系,并检测其类胚体形成能力;检测不同代数细胞的干细胞标志基因Oct-4、SH2、SSEA-1、Nanog、HLA-ABC、CD117的表达情况;利用地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸等因子进行诱导。结果表明,羊水源干细胞在体外可以持续增殖,悬浮培养形成的类胚体表达三胚层相关标记基因,经诱导可形成成骨细胞。试验成功分离了蒙古羊的羊水源干细胞并建系,且其具有向成骨细胞分化的潜能。

转录组揭示禁水环境下双峰驼结肠组织适应机制

旨在了解骆驼属在缺水条件下组织环境适应机制。本研究选取6峰6～9岁的成年阿拉善双峰驼,随机分为2组,第一组为对照组(colon1_3),正常采食饲料与水;第二组为禁水组(colon3),不给骆驼饮水,其他处理(饲草量)与对照组相同,禁水24d。采用Illumina HiSeq 2000测序平台通过对禁水(试验组)与正常饮水(对照组)条件下双峰驼结肠组织进行转录组测序,并对转录组数据进行质控、比对、差异表达、GO和KEGG分析。结果显示,禁水组与对照组比较共获得差异表达基因2 122个,其中上调表达基因813个,下调表达基因1 309个。GO分析结果显示,禁水组下调表达基因最为显著富集的条目有30条,上调表达基因中未得到统计学意义的富集条目。KEGG富集分析显示,禁水组下调表达基因显著富集到剪接体、蛋白外排、内质网蛋白合成过程、RNA转运、核糖体合成、mRNA检测、RNA降解代谢途径;上调表达基因富集到的通路包含局部细胞黏连、溶酶体功能等。上述结果表明,禁水环境下,结肠组织下调表达基因多于上调表达基因,下调表达基因多参与RNA加工和蛋白质合成,这些功能有利于骆驼在缺水环境下,减少RNA的合成,降低结肠组织的代谢速率。