绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

阳痿的发病机理与分类初探

通过比较现代医学和传统中医对勃起功能障碍的相关论述,结合《内经》相关知识,提出个人观点:阳痿的本质是肾气虚,病因是五藏六腑之精不能藏于肾。辨证分析的目的是通过了解患者的身体情况以明确病因和藏腑的功能状态。并将中医阳痿分为4类:痿证阳痿、疾病阳痿、证候阳痿、体质阳痿。

术前超声引导注射与术中注射纳米碳在甲状腺乳头状癌淋巴结清扫中的应用效果对比

目的:对比术前超声引导注射与术中注射纳米碳在甲状腺乳头状癌淋巴结清扫中的淋巴示踪效果。方法:回顾性分析我院行甲状腺乳头状癌手术162例患者的临床资料,其中术前超声引导注射纳米碳组59例,术中注射纳米碳组103例。分析两组患者淋巴结清扫数目和转移淋巴结的检出数目。结果:术前超声引导注射纳米碳组平均淋巴结清扫数、转移淋巴结检出数、<5 mm淋巴结清扫数、<5 mm转移淋巴结检出数、>5 mm淋巴结清扫数、>5 mm转移淋巴结检出数、中央区淋巴结清扫数、中央区转移淋巴结检出数、侧颈区淋巴结清扫数、侧颈区转移淋巴结检出数均明显高于术中注射纳米碳组(P<0.05和P<0.001)。结论:术前超声引导纳米碳注射较术中注射有更好的淋巴结清扫率。

锰渣处理含铜废水的研究

采用氮气吸附法通过ASAP2010型比表面积孔径分布仪测定了锰渣的孔容分布及比表面积特征,结合吸附理论对锰渣用于废水处理的可行性进行了分析探讨,并通过正交试验和单因素方法研究了锰渣用于含铜废水处理的影响因素。结果表明,铵盐焙烧渣经800℃焙烧后的锰渣样微孔较发育,比表面积、微孔比例和孔容最大,适合作为含铜废水处理剂;pH变化对锰渣吸附铜离子的影响比较明显,而反应时间对吸附率影响较小;锰渣对含铜废水中铜离子适宜的吸附条件为pH为6、残渣投加量为1.5g、反应时间为2.5h,吸附率为96%;锰渣对含铜废水的吸附作用符合Freundlich等温吸附模型。

口腔面部窒息的急救

口腔颌面部外伤及下颌骨切除的病人和全麻插管术后病人可以发生急性的呼吸道阻塞产生窒息。现将４例报道如下。４例病人，２例门诊急救后住院，２例为住院手术病人。１临床资料例１，男，５４岁。左下颌牙龈癌侵犯下颌骨，行左下颌骨半侧切除。病人全麻带管后回病房，清醒...

基于数据挖掘技术的校园网络入侵检测系统应用

入侵检测技术的主动防御思想是校园网建设的基础。阐述引入数据挖掘技术的必要性,构建基于数据挖掘的入侵检测系统,对经典的关联算法进行改进。

实例法在VB教学中的应用

本文通过具体示例说明了实例教学法在V B教学中的特点,使相对枯燥的理论变得容易理解,提高了课堂的教学效率,激发了学生的学习能动性。

关于加强开发区建设环境保护管理工作的思考

建设开发区是我国探索社会主义市场经济建设的一项重大举措,对吸引外资和发展经济起到了十分重要的作用,但开发区建设中的环境保护管理工作却是我国建设项目环境管理中的薄弱环节。本文通过对开发区建设环境保护管理工作中存在的问题及产生原因的分析,提出了加强开发区建设环境保护管理工作的一些思路,以减少人为干扰,增加环境保护工作的指导性。

一种新的覆盖粗糙集度量方法

现有的近似精度和粗糙度不能反映不同覆盖之间的粗细关系。为解决该问题,提出一种新的覆盖粗糙集度量方法,将知识粒度引入到覆盖近似空间中,给出覆盖粒度概念,重新定义近似精度及粗糙度。实例验证结果表明,该方法能区分出2种不同覆盖粒度上的近似精度和粗糙度。

基于项目的高职院校程序设计类课程改革探讨

为了改变目前高职程序设计类课程教学的传统模式,对该课程的教学形式、教学内容以及评价体系进行改革。教学实践表明,采用项目式教学模式能够激发学生的学习兴趣,使学生掌握扎实的理论知识并培养其实践能力。

李铁教授治疗重症肌无力经验采撷

国家级名老中医李铁教授根据自己多年对重症肌无力的中医理论研究和临床经验,认为重症肌无力的治疗不应拘泥于一脏一腑的单一治疗,要遵循"五行相生、效药相循"理论,注重五脏相生及药物相互兼顾,取得了较好的临床疗效。

浅谈API函数在VB中的应用

API函数是VB编程中一个很重要的组成部分,本文通过对API函数的概念、声明、调用和应用等各个方面详细的阐述,使读者对看似高深莫测的API函数有了一个清楚的认识,从而可以在自己的程序中比较轻松的使用它们,这样不仅扩展了程序的功能,更提高了程序的专业化水平。

婴儿先天性腮腺血管瘤的诊断和外科治疗

婴儿先天性腮腺血管瘤的诊断和外科治疗徐州市第一人民医院口腔科 周正国，万延俊，于玮徐州市第一人民医院病理科 陈福泰徐州市第六人民医院口腔科许开英口腔颌面部先天性血管瘤是婴儿常见病，常见的有颌面颈部皮肤毛细血管瘤和软组织海绵状血管瘤。婴儿先天性腮腺血管...

一种多粒度覆盖粗糙集模型

多粒度粗糙集是粗糙集模型在多粒度及分布式环境中的一种重要的拓展形式,其主要思想是采用一族而非一个粒空间中的知识来对目标进行粗糙逼近。将多粒度的思想引入覆盖粗糙集模型中,采用一族而非单个的覆盖,提出了一种多粒度覆盖粗糙集模型。

彩色多普勒闪烁伪像在囊性病变诊断中的应用

在彩色多普勒血流显像(CDFI)的应用实践中,常可见闪烁伪像(又称闪彩伪差),它是在CDFI的彩色取样框内出现的非血流信号的异常色斑。此色斑颜色杂乱,大小不一,闪烁不定,随机出现[1]。本文报告分析了多普勒闪烁伪像在囊性病变诊断中的应用情况。

Bi_4Ti_3O_(12)铁电薄膜的相变研究

用变温X射线及热分析等方法研究Bi_4Ti_3O_12铁电薄膜的相变,结果表明,在温度为350~445℃之间,薄膜经历由烧绿石相向钙钛矿相的结构相变,在670℃附近,薄膜由铁电相向顺电相转变;该相变是由于晶格畸变量b/a随温度上升连续减小,使得薄膜晶体对称性发生改变引起,在相变点附近未观察到潜热的产生。

Bi_4Ti_3O_(12)薄膜的结构与形貌分析

采用金属与金属氧化物复合靶的射频溅射法,在S_1,Au,Pt和Ti基片上沉积制备Bi_4Ti_3O_(12)(BTO)铁电薄膜,对不同基片沉积的BTO薄膜,以及不同退火温度下的薄膜的相结构、成分及形貌进行了分析。结果表明,BTO薄膜的结构与退火温度和沉积基片有关,不同基片上钙钛矿结构形成的温度按T_t<S_t<Au<Pt递增,SEM形貌观察也得到证实。

基于变精度粗糙集的约简算法在网络教育资源检索中的应用

本文研究了变精度粗糙集的属性约简问题,通过阈值设定,简化决策表,对网络教育资源本体库,设定概念与知识点的关联性,确定关键的条件查询属性值,提升网络教育资源的查询效率。

基于属性重要度约简算法在数据挖掘中的应用研究

属性约简是粗糙集理论研究的核心内容之一,本文通过对属性重要度的计算,以核为基础计算条件属性集中除核以外其他属性的重要性来确定最小的约简,最后通过实例分析验证了算法的有效性与可行性。