江西省人感染猪链球菌病原学和基因组特征分析

目的了解江西省2005-2020年猪链球菌菌株病原学和基因组特征,分析15年间分离株之间的关联,为人感染猪链球菌病防控提供参考依据。方法通过聚合酶链反应法扩增猪链球菌基因组上的16S rRNA、cps2j、mr、sly、ef、gapdh毒力基因,通过测定最小抑菌浓度确定菌株的耐药性,通过全基因组测序和序列比对分析菌株之间的遗传多态性。结果10株人源和8株猪源猪链球菌均为血清2型菌株,毒力基因谱不同,至少携带3种毒力基因。对阿奇霉素和四环素耐药率高达89.89%和77.78%,携带氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类及叶酸通道拮抗剂4类耐药基因。分为3个ST型,其中ST7型12株、ST1型5株、ST373型1株。全基因组序列分析显示2005年疫情菌株与四川省暴发疫情菌株同源,2006-2020年分离菌株基因组多态性大。结论江西省人感染猪链球菌病均为散发,菌株基因组多态性大,2005年疫情菌株与四川省暴发菌株相关,随后年份为多点平行传播。

山东某地区产气荚膜梭菌的分子型别与耐药特征

目的分析山东省某地区临床及动物中分离的产气荚膜梭菌的分子型别及耐药特征。方法对山东省56株产气荚膜梭菌进行PFGE、MLST分子分型、药敏试验和耐药基因检测,比较分析同一来源菌株内部和不同来源菌株间的型别和耐药特征。结果56株产气荚膜梭菌分为53个PFGE型,有50株菌表现出独特的型别。MLST分型将其分为46个ST型,其中40种ST型仅包含一株菌。本研究中菌株均对万古霉素,美罗培南和头孢西丁表现为敏感;对甲硝唑、青霉素、莫西沙星和氯霉素的耐药率相对比较低,分别为3.57%、7.14%、8.93%和1.79%;然而,对克林霉素的耐药率高达53.57%,人类来源菌株与动物来源菌株的耐药谱呈现出较为明显的差异。基于全基因组的耐药基因分析显示,所有56株产气荚膜梭菌均携带mprF基因,其次是tetA(P)(98.21%),tetB(P)(87.5%)以及ermQ(51.79%)。结论我国山东某地区临床来源与动物来源产气荚膜梭菌耐药谱存在显著差异,同一地区的菌株分子型别具有很强的多样性。需要开展更全面的的系统监测为制定控制措施提供流行病学依据。

虾源达卡气单胞菌全基因组分析和致病性研究

目的为了解虾源达卡气单胞菌的毒力、耐药基因分布和全基因组信息,并初步评估达卡气单胞菌的致病性。方法对虾源分离株进行分子鉴定和多位点序列分型;利用β-溶血和胞外蛋白酶实验、秀丽隐杆线虫液体毒性实验、细胞毒实验、小鼠实验及毒力基因检测研究其致病性;通过药敏实验及耐药基因检测分析其耐药特征;利用eggnog、Prophage Hunter工具对全基因组序列进行分析。结果菌株18FX22鉴定为达卡气单胞菌。该菌的致病性主要表现:有β-溶血能力和胞外蛋白酶活性;对秀丽隐杆线虫、小鼠成纤维细胞和小鼠均有致病性。经检测,该菌携带7种毒力基因和12种耐药基因,发现其对阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林和多粘菌素3种药物有耐药性。全基因组测序结果发现:18FX22的全基因组大小为4811079 bp,GC含量为61.33%。COG注释发现18FX22共有3850个基因,具有20类功能。前噬菌体预测结果发现18FX22的基因组中含有2个前噬菌体序列。全球达卡气单胞菌的聚类结果显示该菌与GCA016729585的进化关系更近。结论本研究从商品虾分离出达卡气单胞菌,发现该菌株的毒性较强,指示应加强海鲜食品安全的管控,并为达卡气单胞菌的防治提供参考。

89株纹带棒状杆菌耐药性及其耐药基因特征分析

目的通过分析河北省华北理工大学附属医院临床分离的纹带棒状杆菌的耐药性和基因组特征,为临床鉴别、治疗和防控提供参考。方法收集并鉴定临床分离非重复纹带棒状杆菌89株。经VITEK2-Compact全自动细菌仪联合16S rRNA鉴定为纹带棒状杆菌,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,使用全基因组测序技术进行测序。结果药敏结果显示所有菌株对利奈唑胺及万古霉素都表现为敏感,对环丙沙星(89,100.0%)全部耐药;全基因组测序共检出identity在90%以上耐药基因16种,大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因和耐药表型匹配度较高;在基因组水平上,纹带棒状杆菌的传播具有优势克隆群。结论该院分离的纹带棒状杆菌同时携带多种抗菌药物的耐药基因,其某些耐药表型和耐药基因型具有一致性。该院纹带棒状杆菌院内传播由于优势克隆群的存在,菌株在进化过程中能通过耐药基因的获得及累积而产生不同的克隆群。

霍乱弧菌的分子分型方法

在霍乱流行和暴发调查中,追溯传染源和调查传播途径往往需要对霍乱弧菌进行分型分析。对霍乱弧菌进行血清分型和噬菌体-生物分型,是得到菌株基本信息不可缺少的手段。如果想要揭示菌株在分子水平上的变异和进化规律,则需要进行分子分型分析。本研究对霍乱弧菌的各种分子分型方法进行逐一介绍并加以综合比较。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因检测及其同源性分析

目的探讨临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药机制,并进行同源性分析研究。方法用软件WHONET 5.6对连云港第一人民医院临床分离标本筛选出29株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药率统计分析;采用表型筛选试验对试验菌进行产A、B类碳青霉烯酶筛选;PCR法扩增确认相应的碳青霉烯酶酶型基因,目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析29株试验菌的同源性。选取其中6株菌作多位点序列分型(MLST)。结果 29株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物均表现出高耐药性;碳青霉烯酶表型筛选试验全部呈阳性,28株测出相应的A、B类碳青霉烯酶型,另一株未测出酶型;28株筛选试验测出A、B类酶型的菌株中26株产A类碳青霉烯酶,经PCR确定酶基因型均为KPC-2型,2株产B类金属酶,经PCR确定一株基因型为NDM-1,一株基因型为VIM-2,未测出酶型的一株菌未扩增出A、B类相关基因;29株试验菌PFGE分型结果分为3群,26株产KPC-2型碳青霉烯酶的菌株为同一群,其中17株属于同一型。选取的6株做MLST分型的菌株,MLST分型结果均属于ST11型。结论连云港第一人民医院分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要机制为产碳青霉烯酶,以产KPC-2型碳青霉烯酶为主,同时有VIM-2和NDM-1型碳青霉烯酶的检出。PFGE和MLST分析结果表明:该院存在着耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌医院感染暴发流行。

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型研究

为探讨新疆北疆奶牛乳房炎致病菌的流行规律,本研究采用SmaⅠ酶切,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法对43株分离自新疆6个规模奶牛场隐性乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌进行了分子分型比较研究。结果表明,所有菌株都能被PFGE法分型,43株金黄色葡萄球菌可分为A、B、C、D和E5个基因型。A型株(22株,51.2%)有13个亚型,相似度在81.8%～96.8%之间,在5个奶牛场均分离到,是主要的流行株;B型(25.6%)、C型(14.0%)、D型(7.0%)各型别内菌株间的相似度为100%,E型仅有1株。不同地区主要流行株有差别:乌鲁木齐主要流行A型菌株,昌吉以A型和B型菌株为主,而奎屯主要流行C型和B型。有2个奶牛场流行株只有1个基因型,也有2种基因型(3个牛场)或3种基因型(1个牛场)同时存在,但以1种为优势株。这些结果提示,不同地区主要流行株有差别,多数奶牛场以1种流行株感染为主,不同牛场可能流行相同的菌株,在较大地域范围内某些流行株具有侵染优势。

江西省2005-2015年脑膜炎奈瑟菌血清分型和分子分型分析

目的对江西省2005-2015年分离的脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis,Nm)进行血清分型和分子分型研究,揭示菌群特征和变迁情况。方法对2005-2015年分离的200株脑膜炎奈瑟菌采用血清凝集的方法鉴定血清群,对引起流脑流行的血清群进行脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST),使用BioNumerics软件构建最小生成树。分析不同来源、不同年份分离株的血清型和分子型别以及变迁情况。结果 200株脑膜炎奈瑟菌中,有168株可鉴定为已知血清群,包括C群(101株)、B群(50株)、A群(12株)、W135群(2株)、Y群(2株)和X群(1株),另外32株为不可分群菌株。临床病人、密切接触者和健康人群分离株中分别有100%、86.0%和28.9%的菌株为C群。针对健康人群分离株,2005年、2007年、2008年、2012年分离的菌株中,C群分别占1.9%、58.8%、81.5%和0%。95株C群菌株分为14个PFGE型,其中NMNh.JX0001和NMNh.JX0002为优势带型,分别包含46和30株菌。NMNh.JX0001型菌株在2005-2006年、2007-2008年、2013-2014年3个时间段在C群菌株中所占比例分别为97.2%、28.6%、10.0%;而NMNh.JX0002型菌株在2005-2006年、2007-2008年、2013-2014年3个时间段在C群菌株中所占比例分别为2.8%、57.1%、90.0%。挑选优势带型以及相似带型的33株菌株进行MLST分型,均为ST-4821型。结论江西省2005-2015年的流脑病例均为C群菌株引起。在健康人群中存在C群脑膜炎奈瑟菌。虽然近10年流行的C群菌株MLST序列型未发生改变,但是PFGE型别发生了变迁,提示菌株基因组存在微进化。PFGE型别的变迁有可能导致流行模式发生改变,所以有必要开展持续监测,密切关注新型菌株在人群中的传播扩散以及引起的流脑病例。

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出bla_(KPC)类基因(64株检出bla_(KPC-2)、1株检出bla_(KPC-3))、9株(10.2%)检出bla_(NDM)类基因(均为bla_(NDM-1))、7株(8.0%)检出bla_(IMP)类基因(均为bla_(IMP-4))。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而bla_(NDM-1)和bla_(IMP-4)阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。

上海口岸管道水中军团菌污染状况及其细胞内生长能力研究

目的 了解口岸公共场所管道水军团菌污染状况和细菌在细胞内的生长能力.方法 采集上海市口岸管道水132份,采用GVPC（军团菌选择性培养基）培养计数法对水样中军团菌进行定性和定量分析.用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究.结果 平板培养法检测管道水中军团菌阳性率为18.94％,25份培养阳性标本中军团菌定量数值为50～1 320菌落形成单位（CFU）/L.分离的25株军团菌中17株是嗜肺军团菌;其中血清1型2株、8型13株、7型1株、5型1株;其余8株为米克戴德军团菌.细胞内生长实验结果显示,4个血清型的嗜肺军团菌均具有很高的细胞内生长能力,而米克戴德军团菌细胞内生长能力较低.结论 管道水中军团菌污染率和含菌量较高,且菌株具有很高的细胞内生长能力,提示其具有一定致病性,有引起军团菌病的危险,应采取相应消毒和预防措施.

MLVA方法在军团菌分子分型中的应用评价

目的探讨MLVA方法在军团菌分型中的可应用性。方法选用文献报道的9个军团菌VNTR位点,对我国环境水中分离的81株Lp1型军团菌菌株和2株参考菌株进行分子分型研究,并与PFGE和SBT分型结果进行了比较。结果 81株分离菌株9个VNTR位点的等位基因型别数分别为6,3,4,2,3,3,2,4和7,其中部分菌株的某些位点无扩增产物或产物为非目的片断。7个位点PCR产物具有重复单元;Lpms3位点PCR产物无重复单元;Lpms31位点部分菌株PCR产物有重复单元,另一些菌株无重复单元。对于具有重复单元的序列,不同菌株间以及同一菌株内各重复单元的序列变异均较大,3个位点存在不完整的重复单元。根据8个位点的PCR产物电泳结果,81株Lp1型分离菌株分为19个MLVA型。通过PFGE和SBT方法,81株Lp1型分离菌株分别分为46种PFGE带型和21种ST型。结论 MLVA方法的分型能力不及PFGE方法,而与SBT方法分型能力相当。但是,MLVA方法操作简单、成本低廉,而且可对培养阴性的标本进行分型,因此,该方法适合在基层推广应用。

一起O139霍乱暴发的传染来源分析

目的对一起霍乱暴发疫情中来自患者和甲鱼的O139群霍乱菌株分离株分子特征分析,判断传染来源。方法对疫情调查中的3株患者分离株和3株来自水产市场甲鱼标本的分离株,采用聚合酶链反应(PCR)检测分离菌株的毒力相关基因(ctxAB、toxR、zot);用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型,所得结果以Bio-Numeric V4.0软件进行聚类分析。结果6株菌所有毒力相关基因全部阳性,均为产毒株。6株菌可得2个PFGE型,其中2株甲鱼株与3株患者株带型相同,1株甲鱼株独立成型。通过Pulse Net China数据库搜索,6株菌与中国某省O139群霍乱弧菌聚餐暴发菌株分子分型不同。结论此次霍乱暴发疫情中甲鱼为可能的传染来源,提示该地区在今后霍乱防治工作中,应注意以甲鱼为重点的水产品的安全。

一起霍乱疫情分离株的耐药性和分子流行病学分析

目的对2017年北京市房山区一起霍乱疫情的O1群霍乱弧菌的分子流行病学特征和耐药性进行分析。方法采集患者和有关人员及外环境(包括食物)样本109件,用实时荧光PCR检测碱性蛋白胨水增菌液中O1/O139群霍乱弧菌特异性基因;同时按常规法分离培养鉴定;对鉴定的阳性菌株用实时荧光PCR检测霍乱弧菌CTX基因,用微量肉汤稀释法进行20种药物敏感试验,用Not I和SfiⅠ限制性内切酶进行脉冲场凝胶电泳实验和聚类分析。结果109件样本增菌液O1群霍乱弧菌特异性基因阳性率19.27%(21/109,患者、密切接触者中家属和就餐地厨师肛拭子各1件阳性,就餐地后厨外环境样本18件阳性);常规培养鉴定O1群小川型霍乱弧菌阳性率5.50%(6/109,患者和就餐地厨师肛拭子各检出1株,就餐地后厨外环境涂抹检出4株);6株O1群小川型霍乱弧菌,霍乱CTX基因均阴性,对20种抗生素中12种100%敏感,对头孢唑林100%耐药,PFGE分子分型条带具有一致性。结论该起霍乱疫情的病原为O1群小川型非产毒株;PFGE分子分型溯源表明疫情与厨师有关;应关注霍乱疫情菌株的耐药监测。

2014—2018年仙桃市伤寒沙门菌分子分型及耐药性分析

目的了解仙桃市伤寒沙门菌的耐药性及分子分型特征。方法收集2014—2018年分离的29株伤寒沙门菌开展药敏试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及多位点序列分型(MLST)分析。结果药敏结果显示,29株伤寒沙门菌中27株菌对26种临床常见抗菌药物均为敏感/中度敏感,余2株菌有不同程度的耐药性,其中1株菌株耐药谱分布较广,对β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂复合物类药物耐药。PFGE结果显示,29株伤寒沙门菌可分为6种PFGE型别,其中流行优势型为HuBXTSal003型别。MLST分型显示,29株菌株共有2种序列型,其中ST2为优势ST型。结论仙桃市伤寒沙门菌株存在优势PFGE带型及优势ST型,有多重耐药菌株出现。

贵阳市甲型副伤寒沙门菌脉冲电场凝胶电泳分型分析

目的了解贵阳市甲型副伤寒沙门菌的分子流行病学特征,分析菌株的相似性,为追踪传染来源、查找传播途径提供线索。方法用脉冲电场凝胶电泳(pulsed field gelelectrophoresis,PFGE)方法进行分型。结果根据细菌染色体DNA的SpeI酶切图谱,将贵阳地区146株甲型副伤寒沙门菌分成10个PFGE带型,1型32株占21.9%,2型73株占50.0%,3型13株占8.9%,4型7株占4.8%,5型14株占9.6%,6型、7型、8型和9型各1株,各占0.7%,10型3株占2.7%,各型之间的相似性在98.1%～72.0%。暴发株24株被分为5个PFGE带型,1型占54.2%,带菌者1株为1型。各年菌株的PFGE带型不尽相同,1型和2型为常年流行带型。高流行区县的甲型副伤寒菌株被分为9个PFGE带型。结论贵阳地区甲型副伤寒沙门菌流行复杂以2型和1型为优势流行带型,提示存在同一克隆群的菌株广泛传播。该研究进一步证实PFGE是一种发现或预警暴发的可行服务手段。

纹带棒状杆菌耐药性及院内传播特征分析

目的揭示纹带棒状杆菌临床分离株耐药性及分子分型特征,为制定纹带棒状杆菌感染防治措施提供依据。方法收集从临床标本中分离的124株纹带棒状杆菌,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和16S rRNA鉴定后,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,并分析交叉耐药情况;采用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,并进行聚类分析。结果所有菌株均对环丙沙星耐药,96.0%的菌株为多重耐药菌株。124株纹带棒状杆菌可分为28个耐药谱,其中,美罗培南-克林霉素-四环素-头孢噻肟-环丙沙星-红霉素-青霉素为主要的耐药表型(37.9%,47/124)。克林霉素与红霉素、头孢噻肟与青霉素、美罗培南与青霉素之间存在交叉耐药。124株纹带棒状杆菌共分为44个型别,其中优势型别为CSS01.CN0058、CSS01.CN0022、CSS01.CN0055、CSS01.CN0015,具有相同或相似的耐药谱。结论纹带棒状杆菌已逐渐发展为院内感染常见病原菌,在院内传播过程中具有4个优势型别,耐药严重,传播能力强,应加强纹带棒状杆菌的系统监测。

江西省部分地区鼠形动物中巴尔通体分布及基因组序列研究

目的了解江西省鼠形动物中巴尔通体的携带状况和基因型特征,为巴尔通体感染的疾病预防控制提供科学依据。方法2018-2019年在南城县、广信区、横峰县、广丰区、铜鼓县5个鼠传疾病监测项目点,采集130只鼠形动物的肝、脾组织标本进行巴尔通体分离培养,挑取形态疑似巴尔通体的菌落纯培养后提取核酸,PCR检测巴尔通体属特异性基因gltA,阳性菌株鉴定为巴尔通体。对巴尔通体菌株进行全基因组测序,并基于全基因组序列构建聚类树。结果从130只鼠形动物的组织样本中分离巴尔通体14株,携带率为10.77%。黄毛鼠携带率最高(2/6),其次为黑线姬鼠(8/72)、褐家鼠(3/27)、臭鼬鼱(1/12)。基因组序列分析显示14株巴尔通体分为5个不同的分支,分为5种基因型,聚类结果显示在分离地区和宿主类型上没有聚集性。结论江西省鼠形动物中存在巴尔通体携带,携带的宿主类型多,菌株基因组多样性大,存在与人类致病性相关的基因型,存在人类感染的风险。

计算机网络安全管理与有效运行

计算机网络应用已经不能脱离人们的日常生活和工作,计算机网络的发展还呈现出一种加速化和扩大化的特征。但是计算机网络为人们带来便利的同时,网络系统的安全问题也为计算机网络的发展带来了损失。本文主要通过分析影响计算机网络安全的一些因素,探讨提高计算机网络安全管理技术的措施和方法,旨在为我国计算机网络发展提供参考。

美向行政:关于行政的美学思考

行政美学概念的产生,是西学输入中国进而改造和整合中学的结果;作为一种与美学密切相关的学问,行政美学无论在内涵还是外延上都体现了鲜明的美学特性,从美学的角度探究和理解行政活动是行政实践和行政发展的必然要求;目前学术界对于行政美学的研究尚在讨论和摸索中;行政美学的研究不仅是要发现行政活动的主观和客观的审美关系,而且还要充分利用人的审美体验塑造和改善行政活动,以促进行政活动的和谐可持续发展;"行政美学"研究不应只是单纯地构建一个封闭的学科体系或思想逻辑,而应将其作为一个开放性的话题来研究和讨论。