膜联蛋白A7对肿瘤细胞黏附分子表达及生物学行为的影响

[目的]研究Annexin A7基因对肿瘤细胞黏附分子表达及其生物学行为的影响。[方法]采用sh RNA干扰技术稳定转染小鼠Hca-P细胞,获得Annexin A7下调表达及Hca-P无关序列细胞株,采用Western Blot、q RT-PCR分别检测Annexin A7对黏附相关分子FAK、Src、E-cadherin等基因及蛋白表达水平的影响,应用淋巴结粘附及Transwell侵袭实验检测Annexin A7下调对Hca-P细胞淋巴结粘附及侵袭能力的干扰。[结果]Annexin A7基因表达下调组细胞的FAK和Src基因及蛋白表达水平较A7无关序列组分别上升1.81倍、1.80倍及1.58倍、1.59倍（P〈0.05）,E-cadherin基因及蛋白表达水平则分别下降54.11%和54.27%,而上述分子基因与蛋白表达水平在未处理Hca-P组与A7无关序列组间无统计学差异（P〉0.05）,且在Annexin A7下调后Hca-P细胞的淋巴结粘附及侵袭能力上升,Sh RNA-Annexin A7组淋巴结黏附细胞数（1074±162.8）显著性多于A7无关序列组（234.7±40.08）及Hca-P组（220.3±39.53）（P〈0.05）,Sh RNA-A7细胞组穿过小室的细胞数目（294.8±64.40）明显多于A7无关序列细胞组（79±28.04）及Hca-P细胞组（57.60±25.62）（P〈0.05）,而Hca-P与无关序列细胞组之间则无统计学差异（P〉0.05）。[结论]Annexin A7可通过影响黏附相关分子FAK、Src、E-cadherin等基因与蛋白表达水平从而改变Hca-P细胞生物学行为。

eEF1A1低表达对肝癌细胞凋亡、增殖与迁移的影响及eEF1A1/A2与ANXA7间的相互作用

[目的]研究shRNA抑制eEF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响,并通过分别下调eEF1A1和ANXA7的表达,探讨肝癌Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。[方法]构建靶向eEF1A1基因的shRNA质粒表达载体,瞬时转染至小鼠肝癌Hca-P细胞中,设无处理组（CON）、eEF1A1-shRNA组（eEF1A1-shRNA）、转染pGPU/GFP/Neo-NC的阴性对照组（NC）三组细胞进行实验。采用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测eEF1A1的抑制效果,并分别检测各组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。此外,复苏已稳定低表达ANXA7的Hca-P细胞,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测无处理组（CON）、ANXA7-shRNA转染组（ANXA7-shRNA）、阴性对照组（NC）三组Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达。[结果]eEF1A1靶向shRNA成功下调小鼠肝癌Hca-P细胞中eEF1A1基因的表达。流式细胞仪检测显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组细胞凋亡率分别为2.85%±0.37%、4.71%±0.21%和3.01%±0.33%,eEF1A1-shRNA组的细胞凋亡较CON组和NC组明显增加（P〈0.05）;CCK-8实验发现,eEF1A1-shRNA转染细胞后细胞增殖能力较CON组和NC组明显下降;Transwell实验显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组迁移细胞数目为123.75±9.26、66.84±17.47、115.31±12.59,eEF1A1-shRNA组细胞迁移能力较CON组和NC组显著减弱（P〈0.05）。qRT-PCR和Westernblot检测显示,eEF1A1-shRNA组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组明显降低（P〈0.05）,相较其无处理组的蛋白表达水平,eEF1A2和ANXA7分别下降了57%和21%;ANXA7-shRNA组中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组亦明显降低（P〈0.05）。[结论]通过靶向eEF1A1的shRNA使eEF1A1低表达,可诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力及迁移能力。eEF1A1、eEF1A2与ANXA7的表达密切相关,且eEF1A1与ANXA7存在相互作用,可能共同参与调控肿瘤的发生与发展。