银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ_(1-40)表达的影响

目的:研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法:采用冈田酸(OA)海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型,3周后银杏内酯腹腔注射,水迷宫行为学试验检测学习记忆能力,免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果:与拟AD模型组比较,银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失(P<0.01)。结论:银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力,其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化,减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。

亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因的生物信息学分析

目的分析和预测亚洲带绦虫成虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ基因及其编码的蛋白的结构和功能。方法利用一系列的生物信息学软件分析了亚洲带绦虫RNA聚合酶亚单位Ⅱ蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、二级结构等蛋白质性质,并同日本血吸虫、秀丽隐杆线虫、果蝇、人等的蛋白作了对比。结果Blastx分析该基因为全长基因,该基因全长645bp,编码区为45～517,编码157个氨基酸;无跨膜区;具有较稳定的理化性质。结论应用生物信息学方法从亚洲带绦虫成虫cD-NA文库中筛选出聚合酶亚单位Ⅱ基因。

人体带绦虫的分子鉴定

目的:对采自云南大理的6条人体带绦虫进行虫种分子鉴定。方法:对云南省大理有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,对6条人体带绦虫成虫进行形态学鉴定;提取虫体基因组DNA,用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物对DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测;将虫卵喂食2头幼猪(5×105/头),40 d后解剖检查.观察囊尾蚴寄生情况。结果:6条人体带绦虫的形态和牛带绦虫相似,亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260 bp,牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性;只在感染幼猪肝脏发现有囊尾蚴寄生,其他组织和肌肉内没有囊尾蚴寄生。结论:形态学和分子生物学鉴定6条人体带绦虫标本均属于亚洲带绦虫。

亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其蛋白质结构与功能的生物信息学分析

目的分析和预测亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其编码蛋白的结构与功能特性,用于指导其生物学功能的实验研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如VectorNTIsuite,从亚洲牛带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别出泛素缀合酶基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构等。结果该序列为全长基因,编码区为76bp-537bp,编码154个氨基酸。该序列为泛素缀合酶基因同源序列。其编码蛋白的理论分子量为17397.1,亚细胞定位在细胞核。预测该蛋白无跨膜区。与吸虫属的泛素缀合酶进化关系最近。结论应用生物信息方法从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了亚洲牛带绦虫泛素缀合酶cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息。

猪带绦虫腺苷酸激酶的克隆及其重组蛋白免疫反应性的评价

为原核表达猪带绦虫腺苷酸激酶(ADK),对其免疫性进行初步研究,本研究以猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中ADK同源基因重组质粒为模板,通过PCR扩增并将其亚克隆于原核表达载体pET28a(+),构建了pET-Ts-ADK重组质粒,经IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE鉴定,表明重组蛋白约30ku。经His-镍蛋白纯化柱纯化后western blot试验表明该重组蛋白可被猪带绦虫、亚洲带绦虫及牛带绦虫患者血清识别,表明猪带绦虫ADK基因在原核表达系统中表达获得的蛋白具有免疫反应性。

亚洲牛带绦虫泛素缀合酶E2的克隆表达及免疫鉴定

目的克隆表达亚洲牛带绦虫泛素缀合酶E2(UBCE2)全长编码序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做充分准备。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含有UBCE2基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,并使用Western blotting分析其免疫反应性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-UBCE2构建成功,该基因在大肠杆菌中以包涵体形式得到表达,十二烷基肌氨酸钠纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠杆菌BL-21/DE3得到高效表达,亲和层析得到高纯度的蛋白且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫患者血清识别,表明其有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫UBCE2可在原核表达系统中表达,并具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能奠定基础。

生物显微镜照明系统的改进和探索

目的:通过对Nikon YS100生物显微镜的结构原理及发展现状分析,探索生物显微镜照明系统改进的方法,实现改善视觉效果、节约教学成本。方法:将普通卤素灯、红光LED、蓝光LED、白光LED替换现用飞利浦7388卤素灯,并按各类灯源参数对电源作相应调整,对比观察标本效果。结果白光LED观察效果较其他几种光源效果好。结论:在电光源生物显微镜上用高亮度发白光二极管取代现用的卤素灯具有亮度高、节能、经济、环保等优势,可以替代生物显微镜现用卤素灯。

牛带绦虫亚洲亚种核糖体蛋白L10a基因分析

目的：分析和预测牛带绦虫亚洲亚种成虫核糖体蛋白LlOa基因及其编码蛋白的结构和功能。方法：构建牛带绦虫亚洲亚种成虫eDNA文库，进行EST测序，将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对及基因完整性判断；应用NCBI上的BLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对，利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构。结果：BLASTX分析该基因为全长基因，全长698bp，编码区为24-681，编码218个氨基酸，无跨膜区，具有较稳定的理化性质。结论：从牛带绦虫亚洲亚种成虫cDNA文库中筛选出核糖体蛋白L10a基因。

基础医学形态学实验中心运行机制的探讨

我院首个省级实验教学示范中心经过1年多的建设,在运行机制方面积累计了一定的经验。通过总结和探讨中心的运行机制,为进一步加强对医学生创新能力和动手能力的培养,建设和发展基础医学形态学实验中心提供借鉴。

亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29基因克隆表达

目的识别亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29(Hydatid disease diagnostic antigen P-29)的已知序列并行克隆和蛋白表达及免疫学研究。方法利用在线生物信息学工具序列分析后以亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果重组体构建成功并以包涵体形式存在,破包涵体纯化蛋白并得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫病人血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。

亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析

目的通过筛选亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)成虫cDNA质粒文库,识别半胱氨酸分泌蛋白(Ta CRISP),并进行克隆表达,为进一步研究其功能提供基础依据。方法用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别TaCRISP的全长编码基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能;将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,测序鉴定重组质粒,之后进行诱导表达,表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果该基因全长1090bp,编码239个氨基酸,1aa-16aa位为分泌信号肽,理论分子量为26973.8,等电点为5.96。生物信息分析揭示,Ta CRISP与中殖孔绦虫CRISP一致性为38%,相似性为54%;所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中表达成功。结论发现亚洲牛带绦虫Ta CRISP基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因克隆、表达及纯化

目的扩增、克隆和表达亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)Spef1-Like基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含Spef1-Like基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果PCR,双酶切及DNA测序见过均表明重组质粒pET-28a(+)-Spef1-Like构建成功,该基因在大肠埃希菌中以上清表达,纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。结论成功克隆了亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因,并表达和纯化了Spef1-Like蛋白,为研究Spef1-Like的功能及其疫苗等研究提供了基础依据。

猪带绦虫腺苷酸激酶基因及蛋白结构特性分析

目的分析和预测猪带绦虫腺苷酸激酶（ADK）基因及其编码的蛋白结构和特性。方法利用各种在线生物信息网站及其它分析软件包,分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中识别的腺苷酸激酶基因的结构和编码区序列,分析、预测编码的蛋白质的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。结果该基因全长864 bp,编码区为110－758,编码215个氨基酸,为全长基因。理论分子量、等电点分别为23771.4 Da和6.86;没有跨膜区;三维结构建模图显示其线性表位的部位。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了腺苷酸激酶基因的cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面的信息。

亚洲牛带绦虫NOMO1基因在原核细胞中表达

目的构建亚洲牛带绦虫NOMO1基因原核重组质粒,进行原核表达、纯化及免疫学研究。方法以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含NOMO1基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒后再行诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western-blotting)分析其免疫反应性。结果成功建构了原核重组质粒pET28a(+)-NOMI1。该基因在大肠埃希菌中以包涵体形式存在,破包涵体后纯化蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3得到高效表达。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被亚洲牛带绦虫、牛带绦虫病人血清识别,具有免疫反应性。结论成功克隆亚洲牛带绦虫NOMO1基因、表达和纯化得到了该基因的重组蛋白并且证明该基因具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能提供条件。

亚洲带绦虫膜联蛋白B3基因生物信息学分析

目的识别亚洲带绦虫新基因,分析和预测该基因及其编码蛋白的结构和特性,为其生物学功能研究提供依据。方法利用在线生物信息学网站及工具进行序列分析、预测其编码的膜联蛋白B3的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象、进化树等。结果该基因全长1176 bp,编码区为70~588 bp,编码173个氨基酸,为全长基因;无跨膜区;具有多个磷酸化位点和B细胞线性表位;蛋白的理化性质稳定,理论分子量为19339.7;没有质体、线粒体定位序列;氨基酸序列高度保守。结论运用生物信息学方法从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中识别出了亚洲牛带绦虫成虫膜联蛋白B3基因,并对其所编码的蛋白质的结构与功能进行预测。