AXL在鼻咽癌中的功能及表达调控的分子机制

目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种高侵袭性的上皮源性恶性肿瘤,具有独特的地理和种族分布特征,多发于中国南方和东南亚地区,其治疗主要依靠放射治疗和化学治疗。但NPC通常发现于晚期,且常出现局部复发和远处转移,患者预后较差。受体酪氨酸激酶AXL在多种肿瘤中表达上调,参与肿瘤增殖、迁移、侵袭等过程,与肿瘤不良预后相关。本研究旨在检测AXL在NPC细胞系及组织中的表达,探讨AXL在NPC中的生物学功能及表达调控的分子机制。方法:利用基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中的GSE68799、GSE12452、GSE53819三个数据集分析AXL在正常鼻咽上皮组织及NPC组织中的表达水平,利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析AXL与头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSC)患者预后的关系,包括总生存时间(overall survival,OS)、无病生存期(disease-free interval,DFI)、疾病特异性生存期(disease-specific survival,DSS)及无进展生存期(progression-free interval,PFI)4个预后指标;采用蛋白质印迹法检测AXL在正常鼻咽上皮细胞系及NPC细胞系中的蛋白质表达水平,免疫组织化学实验检测AXL在正常鼻咽上皮组织及NPC组织中的表达;利用慢病毒干扰载体包装病毒感染5-8F和Fadu细胞建立稳定敲低AXL的细胞系,利用慢病毒表达载体包装病毒感染C666-1和HK-1细胞建立稳定过表达AXL的细胞系,并通过real-time PCR及蛋白质印迹法检测稳转细胞系的干扰和过表达效率;利用CCK-8、平板克隆形成实验及Transwell实验检测敲低或过表达AXL对NPC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,利用裸鼠皮下成瘤实验检测敲低AXL对裸鼠体内肿瘤生长的影响;利用UCSC在线数据库查询并获取AXL上游2.0 kb启动子区域的碱基序列,将序列输入PROMO在线数据库中以容错率0%为条件预测AXL的转录因子,并利用JASPAR在线数据库预测ETS1与AXL的结合位点;通过real-time PCR及蛋白质印迹法检测ETS1表达改变对AXL蛋白及mRNA表达水平的影响;将AXL上游2.0 kb启动子区域划分为8个片段,每个片段长度为250 bp,分别针对8个片段设计引物,利用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验检测ETS1与AXL启动子区域的结合,明确ETS1对AXL的直接调控关系;利用功能回复实验检测ETS1是否通过AXL影响NPC细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结果:生物信息学分析发现AXL在NPC组织中高表达(P<0.05),且AXL高表达与HNSC患者更短的OS、DFI、DSS及PFI呈正相关。蛋白质印迹及免疫组织化学实验结果显示:相对于正常鼻咽上皮细胞系及组织,AXL在NPC细胞系及组织中高表达。Real-time PCR及蛋白质印迹实验结果显示:稳转细胞系的干扰及过表达效率满足后续实验要求。CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell实验及裸鼠皮下成瘤实验结果表明:AXL表达下调显著抑制NPC细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长(均P<0.05),AXL表达上调显著促进NPC细胞的增殖、迁移及侵袭(均P<0.05)。PROMO及JASPAR在线数据库预测结果显示:ETS1是AXL的转录因子,且与AXL启动子区域存在多个结合位点。Real-time PCR及蛋白质印迹法结果显示:敲低或过表达ETS1能够下调或上调AXL蛋白及mRNA的表达水平。ChIP实验结果显示:ETS1能与AXL的启动子区域结合,直接调控AXL的表达。功能回复实验结果显示:AXL能够回复ETS1对NPC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:AXL在NPC细胞系及组织中高表达,能促进NPC的恶性进展,其表达受转录因子ETS1的调控。

“高欢云洞”--北朝大型洞窟的未尽蓝图与开凿过程

位于山西省左权县城东南的“高欢云洞”石窟是一座开凿于北朝、但在当时并未完工的大型石窟,本文对“高欢云洞”进行了实地调查和测绘,通过辍工遗迹分析了石窟工程的初始设计和营造过程,认为其反映了邺城地区大型洞窟的基本作法,为响堂山等石窟的相关研究提供了参考。

小狐狸哭了

"呜呜……"小狐狸哭了,这是怎么回事呢?一天上午,小狐狸来到森林找食物吃。它碰到小兔,便问:"小兔小兔,