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枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估 被引量:11
1
作者 周珍文 胡旭初 +5 位作者 邓秋连 马长玲 陈晓湘 胡凤玉 徐劲 余新炳 《热带医学杂志》 CAS 2008年第3期235-237,F0003,共4页
目的对益生菌—枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础。方法采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24h)获得芽孢,使用pH2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐... 目的对益生菌—枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础。方法采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24h)获得芽孢,使用pH2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验。结果在DSM培养基中,80%~90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011。在模拟胃液中1h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活。在模拟小肠环境中3h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖。结论枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体。 展开更多
关键词 枯草杆菌 芽孢 耐性 口服疫苗
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枯草杆菌芽孢载体疫苗的研究及其在寄生虫病防治中的应用前景 被引量:7
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作者 周珍文 胡旭初 余新炳 《热带医学杂志》 CAS 2007年第9期935-936,934,共3页
枯草芽孢的良好安全性,独特的抗性及其免疫学特征,使它作为疫苗载体具有很大的优势。本文对枯草芽孢结构、理化性状、免疫学特性,及表面表达外源蛋白的芽孢疫苗免疫学活性,重组芽孢口服疫苗对动物的免疫保护性进行综述,并对其在寄生虫... 枯草芽孢的良好安全性,独特的抗性及其免疫学特征,使它作为疫苗载体具有很大的优势。本文对枯草芽孢结构、理化性状、免疫学特性,及表面表达外源蛋白的芽孢疫苗免疫学活性,重组芽孢口服疫苗对动物的免疫保护性进行综述,并对其在寄生虫病防治中的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 枯草杆菌 芽孢 重组疫苗
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幽门螺杆菌儿童分离株中性粒细胞激活蛋白克隆及表达序列 被引量:1
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作者 周珍文 关锐梨 +6 位作者 夏慧敏 付捷 邓秋连 谢永强 黄勇 廖灿 龚四堂 《广州医学院学报》 2011年第3期86-90,共5页
目的:从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1基因组扩增中性粒细胞激活蛋白(NAP)基因,克隆入T载体,并亚克隆入表达载体pGEX-4T-1,进行测序及基因比对分析,为幽门螺杆菌疫苗研制奠定基础。方法:根据GenBank中幽门螺杆菌NAP序列,设计一对特异... 目的:从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1基因组扩增中性粒细胞激活蛋白(NAP)基因,克隆入T载体,并亚克隆入表达载体pGEX-4T-1,进行测序及基因比对分析,为幽门螺杆菌疫苗研制奠定基础。方法:根据GenBank中幽门螺杆菌NAP序列,设计一对特异性引物扩增幽门螺杆菌临床儿童分离株NAP全长基因,与T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切、测序鉴定,经EcoRⅠ、NotⅠ双酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定,IPTG诱导重组蛋白表达,并对基因进行测序及比对分析。结果:以幽门螺杆菌儿童分离株GZCH1为模板,成功扩增了NAP基因,基因大小为435 bp,重组pGEX-4T-1-NAP双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中,序列比对分析显示其与幽门螺杆菌J99株氨基酸一致性达99.2%,IPTG诱导后,pGEX-4T-1-NAP/BL21在相应分子量(42.8 kD)可见融合蛋白的表达。幽门螺杆菌儿童分离株GZCHl NAP序列已登录GenBank(登录号:GU301881)。结论:从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1中成功克隆了NAP基因,并获得重组蛋白的表达,为NAP幽门螺杆菌疫苗研制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 儿童 中性粒细胞激活蛋白 克隆 表达
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儿童急性下呼吸道感染病原菌分布及耐药性研究 被引量:12
4
作者 邓秋连 邓力 +4 位作者 周珍文 谢永强 黄勇 黄旭强 余嘉璐 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期746-749,共4页
目的调查儿童急性下呼吸道感染的主要病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法选取2006年2月至2007年2月临床诊断为肺炎及支气管肺炎的患儿1097例,采用抽吸法采集患儿深度痰标本,立即接种哥伦比亚绵羊血琼脂平板和加万古霉素的马血... 目的调查儿童急性下呼吸道感染的主要病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法选取2006年2月至2007年2月临床诊断为肺炎及支气管肺炎的患儿1097例,采用抽吸法采集患儿深度痰标本,立即接种哥伦比亚绵羊血琼脂平板和加万古霉素的马血巧克力平板,置5%CO2培养箱。35℃培养18~24h,进行细菌分离培养,分别采用K-B法和E-Test法对分离的病原菌进行药敏试验。结果共检出细菌432株、白色念珠菌28株,阳性检出率41.2%(52/1097),病原菌依次为流感嗜血杆菌140株(12.8%),肺炎克雷伯菌92株(8.4%),肺炎链球菌79株(7.2%),大肠埃希菌32株(2.9%),鲍曼不动杆菌19株(1.7%),铜绿假单胞菌17株(1.5%),卡他莫拉菌12株(1.1%),金黄色葡萄球菌4株,A组乙型溶血性链球菌3株,其他阴性杆菌24株。流感嗜血杆菌β-内酰胺酶产生率36.4%,流感嗜血杆菌对氨苄西林、四环素、复方新诺明、氯霉素、头孢呋辛、头孢克洛、阿莫西林/克拉维酸的耐药率分别为36.4%,40.7%,70.7%,20.7%,2.7%,12.9%,3.6%,对头孢曲松、氧氟沙星、阿奇霉素的耐药率均为0;肺炎链球菌SP对万古霉素、氧氟沙星和阿莫西林的耐药率为0,对氯霉素、四环素、复方新诺明、头孢呋辛、头孢曲松和亚胺培南耐药率分别为7.0%,86.9%,91.9%,72.7%,3.9%和2.6%,对大环内酯类药物红霉素和林可酰胺类药物克林霉素的耐药率高达100%和93.7%,耐青霉素肺炎链球菌占11.4%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对亚胺培南耐药率为0,对阿米卡星、环丙沙星的耐药性较低;肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率高达98.7%,对头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟和头孢吡肟耐药性较高,达38.9%~60.1%。大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶和头孢西丁耐药率均小于10%。结论流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌是儿童社区获得型急性下呼吸道感染的主要病原菌,其耐药性有上升趋势,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等非发酵菌的感染也不容忽视。 展开更多
关键词 肺炎 下呼吸道感染 病原菌 耐药性 儿童
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广州地区肺炎住院患儿感染肺炎链球菌的血清型分布及耐药性研究 被引量:11
5
作者 邓秋连 邓力 +5 位作者 黄旭强 谢永强 黄勇 周珍文 余嘉璐 赵长安 《热带医学杂志》 CAS 2008年第11期1130-1133,共4页
目的了解广州地区肺炎住院的患儿感染肺炎链球菌的耐药性及血清型分布情况。方法用吸痰法采集患儿痰标本进行涂片,革兰氏染色镜检,合格痰标本划线接种血平板,用E-test法检测分离到的肺炎链球菌对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢呋辛... 目的了解广州地区肺炎住院的患儿感染肺炎链球菌的耐药性及血清型分布情况。方法用吸痰法采集患儿痰标本进行涂片,革兰氏染色镜检,合格痰标本划线接种血平板,用E-test法检测分离到的肺炎链球菌对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢呋辛、亚胺培南、氧氟沙星、万古霉素、红霉素和克林霉素9种药物的耐药性,采用K-B法检测四环素、复方新诺明的耐药性,并采用荚膜肿胀技术对分离到的79株肺炎链球菌进行血清分型。结果79株肺炎链球菌中青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)11.4,青霉素中介肺炎链球菌(PISP)77.2,青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)11.4,对红霉素、克林霉素的耐药率分别为100和93.7,对阿莫西林、氧氟沙星、万古霉素的耐药率均为0,对头孢曲松、头孢呋辛、亚胺培南的耐药率分别为3.8、72.2、2.5。79株肺炎链球菌中只有1株PSSP仅对红霉素耐药,78株肺炎链球菌对两种以上药物耐药,多重耐药率为98.7(78/79),同时对克林霉素、红霉素、四环素、复方新诺明耐药的菌株65株,占82.3(65/79)。79株肺炎链球菌血清型分别为19F(70.9),23F(16.5),6B(5.1),4(2.5),15B(2.5),不能分型(2.5),7价疫苗涵盖率为94.9(75/79)。结论广州地区肺炎住院患儿肺炎链球菌对大环内脂类抗生素红霉素和林可酰胺类抗生素克林霉素耐药情况严重,对二代头孢菌素头孢呋辛耐药率居高,临床治疗儿童肺炎链球菌感染的肺炎应首选阿莫西林和三代头孢菌素。7价疫苗覆盖率高,预防儿童肺炎链球菌感染所致的肺炎,采用7价疫苗可以达到很好效果。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 血清型 耐药性 儿童
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美洲大蠊主要变应原Cr-PI基因同源性分析 被引量:7
6
作者 刘志刚 黄炯烈 +2 位作者 杨慧 周珍文 李金生 《热带医学杂志》 CAS 2002年第2期131-134,共4页
目的 探索研制美洲大蠊重组变应原疫苗的新途径 ,对美洲大蠊主要变应原Cr PI基因序列进行同源性分析。方法 选用从本室构建的美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选到的 5个阳性克隆 ,在测序的基础上 ,通过互联网进入NCBI主页 ,采用Blastn程序 ... 目的 探索研制美洲大蠊重组变应原疫苗的新途径 ,对美洲大蠊主要变应原Cr PI基因序列进行同源性分析。方法 选用从本室构建的美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选到的 5个阳性克隆 ,在测序的基础上 ,通过互联网进入NCBI主页 ,采用Blastn程序 ,将测得的美洲大蠊主要变应原基因序列与GenBank中的基因序列进行同源性分析。结果 所筛选到的美洲大蠊若虫 5个新基因中 ,一个为核糖体蛋白基因 (AF 31 4 962 ) ,一个为美洲大蠊主要变应原Cr PI基因 (AF31 4 963) ,且中国大陆美洲大蠊主要变应原Cr PI基因序列与不同地理分布的美洲大蠊Cr PI基因序列有一定差异。结论 不同地理区域的美洲大蠊同一种变应原其基因序列有一定差异 ,编码的氨基酸亦不相同。本研究提示在临床变态反应疾病的诊断和脱敏治疗中 ,为了提高其诊断的特异性和治疗疗效 ,应尽可能使用具有我国区域特色 (即本地化 ) 展开更多
关键词 Cr-PI基因 美洲大蠊若虫 变应原 序列测定 同源性分析 重组变应原疫苗 变态反应疾病
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美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定 被引量:7
7
作者 刘志刚 黄炯烈 +2 位作者 周珍文 李金生 杨慧 《热带医学杂志》 CAS 2002年第1期32-35,共4页
目的 对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆 ,并测定其基因序列 ,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据。方法 选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者 ... 目的 对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆 ,并测定其基因序列 ,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据。方法 选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者 (如哮喘、过敏性鼻炎 )阳性血清 ,对美洲大蠊若虫cDNA文库进行免疫学筛选。使用按照重组载体入ExCellNotI/EcoRI/CIP臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物 ,扩增阳性噬菌斑中插入的cDNA片段。并对cDNA插入片段进行序列测定。结果 经用阳性血清对 2 3× 10 4 噬菌体斑的免疫学筛选 ,获得了 5个阳性克隆 ,PCR直接序列分析表明这 5个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因克隆。结论 该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因 。 展开更多
关键词 美洲大蠊若虫 重组变应原 CDNA文库 免疫学筛选 序列分析
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广州地区肺炎链球菌儿童分离株临床分布及药敏特征 被引量:9
8
作者 黄莲芬 解锐历 +7 位作者 彭丽兰 钟华敏 谢永强 关小珊 李小聪 陈晓光 李华 周珍文 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第9期1044-1047,共4页
目的分析儿童肺炎链球菌的临床分布和耐药性,为临床合理用药提供依据。方法按全国临床检验标准操作规程对2013年1月1日至2015年12月31日间采集的儿童细菌培养标本进行常规肺炎链球菌分离培养和鉴定,结合检验历史系统分析阳性病例来源标... 目的分析儿童肺炎链球菌的临床分布和耐药性,为临床合理用药提供依据。方法按全国临床检验标准操作规程对2013年1月1日至2015年12月31日间采集的儿童细菌培养标本进行常规肺炎链球菌分离培养和鉴定,结合检验历史系统分析阳性病例来源标本类型及患儿年龄分布,并用MIC法分析肺炎链球菌的耐药性情况。结果共分离1 243株肺炎链球菌,1岁以内婴儿分离率最高,占42.80%。标本来源有呼吸道标本(72.81%),耳分泌物(15.37%),血液(5.63%),脑脊液(3.06%),胸腔积液(2.01%)。所分离的肺炎链球菌株中,对红霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别高达94.93%、85.76%和73.53%,对青霉素G、阿莫西林、头孢曲松、美罗培南、头孢噻肟耐药率较高,分别为24.70%、39.59%、24.05%、22.85%,19.89%,对喹诺酮类耐药率均低于10.00%,未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。结论 0~1岁为广州地区儿童肺炎链球菌感染的主要年龄阶段,该地区肺炎链球菌儿童分离株对红霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑的耐药情况较严重,青霉素G、阿莫西林、头孢曲松的耐药性有显著提高,在临床使用上应引起重视。临床医生应根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,以提高治愈率。 展开更多
关键词 儿童 肺炎链球菌 耐药性
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粉尘螨cDNA文库的构建 被引量:3
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作者 刘志刚 周珍文 +3 位作者 高波 罗时文 陈淑贞 张兆松 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期923-925,共3页
目的构建粉尘螨cDNA表达文库。方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotIdT18作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链。加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位... 目的构建粉尘螨cDNA表达文库。方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotIdT18作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链。加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果已成功构建一个含4.8×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.2kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对粉尘螨特异性重组变应原的进一步研究。 展开更多
关键词 粉尘螨 CDNA文库 构建 定向克隆技术
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金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达 被引量:5
10
作者 李飞 周帅 +8 位作者 董慧 黄艳梅 梁秉绍 李娟 龙燕 王洁琳 谢永强 杨镒宇 周珍文 《检验医学与临床》 CAS 2016年第18期2553-2555,共3页
目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩... 目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素B 克隆 表达
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广州地区儿童患者脑脊液分离病原菌构成及耐药特征 被引量:2
11
作者 黄莲芬 周珍文 +4 位作者 钟华敏 谢永强 关小珊 陈晓光 李华 《现代检验医学杂志》 CAS 2018年第1期81-85,共5页
目的了解广州地区儿童脑脊液培养分离病原菌构成及药敏特征,为儿童脑膜炎经验治疗提供帮助。方法 2011年1月1日~2015年12月31日5年间,对疑似脑膜炎患儿取脑脊液,按《全国临床检验操作规程》进行病原菌培养、鉴定和药敏,分析病原菌构成... 目的了解广州地区儿童脑脊液培养分离病原菌构成及药敏特征,为儿童脑膜炎经验治疗提供帮助。方法 2011年1月1日~2015年12月31日5年间,对疑似脑膜炎患儿取脑脊液,按《全国临床检验操作规程》进行病原菌培养、鉴定和药敏,分析病原菌构成和药敏特征。结果共分离132株病原菌,G+菌占57.58%(76/132),G-菌占39.40%(52/132),真菌占3.03%(4/132),主要病原菌为大肠埃希菌(23.48%,31/132),肺炎链球菌(22.73%,30/132),金黄色葡萄球菌(12.12%,16/132)和无乳链球菌(9.85%,13/132)。大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、头孢吡肟、丁胺卡那霉素、妥布霉素、亚胺培南、厄他培南和美洛培南无耐药,头孢替坦耐药率3.22%,头孢他啶9.38%,氨曲南12.90%,氨苄西林/舒巴坦、氧氟沙星、环丙沙星、头孢曲松、庆大霉素和头孢唑林约为30%,复方新诺明和氨苄西林60%以上,ESBL阳性率为31.25%。肺炎链球菌对厄他培南无耐药,泰利霉素耐药率5.88%,氯霉素14.71%,头孢曲松17.76%,阿莫西林23.53%,美洛培南32.30%,头孢噻肟35.29%,而对四环素、红霉素、青霉素和复方新诺明都高于70%。金黄色葡萄球菌对利福平、替加环素、喹奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和万古霉素无耐药,环丙沙星和庆大霉素耐药率6.25%,复方新诺明12.50%,克林霉素耐药率18.75%,四环素31.25%,红霉素62.50%,对头孢类高于90%,对青霉素近100%,MRSA比率为56.25%。无乳链球菌对青霉素无耐药,环丙沙星耐药率7.69%,氧氟沙星23.08%,对四环素、红霉素、克林霉素耐药率均高于60%。结论广州地区儿童脑脊液培养病原菌主要为大肠埃希菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌,不同病原菌药敏特征不同,为儿童细菌真菌性脑膜炎的预防、病原学快速诊断和治疗提供指导。 展开更多
关键词 儿童 细菌 真菌 脑膜炎 耐药性
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鼠伯氏疟原虫CSP基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达 被引量:1
12
作者 马长玲 胡旭初 +6 位作者 赵玉利 李艳文 胡凤玉 陈晓湘 周珍文 张咏莉 余新炳 《热带医学杂志》 CAS 2006年第8期855-857,F0004,共4页
目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将... 目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSPN端片段定向克隆入pEGFP/PbCSP-C,构建pEGFP/PbCSP'重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定。将pEGFP/PbCSP和pEGFP/PbCSP′分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达。结果PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至pEGFP-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达。 展开更多
关键词 伯氏疟原虫 CSP 绿色荧光蛋白 HELA细胞
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达 被引量:3
13
作者 容莉莉 杨镒宇 +4 位作者 关锐梨 关小珊 邓秋连 谢永强 周珍文 《广州医药》 2013年第4期1-4,共4页
目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础。方法根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模... 目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础。方法根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp;重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98%。经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白。结论成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 MRSA CHIPS 克隆 原核表达
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广州地区脑血管病病人感染产超广谱β-内酰胺酶菌耐药性调查
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作者 魏衍超 肖柯玲 +5 位作者 钟南山 王敏玲 吴晓蔓 周珍文 苏丹红 肖庆忠 《中西医结合心脑血管病杂志》 2005年第2期117-120,共4页
目的 了解广州地区脑血管病病人感染产超广谱 β -内酰胺酶革兰阴性杆菌情况及对 18种抗生素耐药性进行调查分析。方法 对广州 12家医院分离的 3 499株革兰阴性杆菌 ,其中包括分离自神经内科、神经外科脑血管病病人 3 89株 ,检测其超... 目的 了解广州地区脑血管病病人感染产超广谱 β -内酰胺酶革兰阴性杆菌情况及对 18种抗生素耐药性进行调查分析。方法 对广州 12家医院分离的 3 499株革兰阴性杆菌 ,其中包括分离自神经内科、神经外科脑血管病病人 3 89株 ,检测其超广谱 β -内酰胺酶 ,并以K -B法检测所有菌对 18种抗生素的敏感性。结果 广州地区常见革兰阴性杆菌产超广谱 β -内酰胺酶总体检出率 3 8.4% (819/213 4) ;神经科脑血管病病人超广谱β -内酰胺酶检出率 5 5 .5 %(12 1/2 18) ;其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的检出率分别是 5 3 .1%、5 7.5 %。结论 广州地区脑血管病病人大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌超广谱 β -内酰胺酶检出率与总体检出率比较有统计学意义 (P <0 .0 1) ,18种抗生素的耐药率所有产酶株与非产酶株比较有统计学意义。 展开更多
关键词 脑血管病 感染 超广谱Β-内酰胺酶
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儿童幽门螺杆菌感染4种诊断方法的对比 被引量:10
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作者 黄敬 邓秋莲 +5 位作者 周珍文 王凤华 谢永强 黄勇 耿岚岚 龚四堂 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期2087-2089,共3页
目的比较幽门螺杆菌(helicobacter pylori,H.pylori)培养、13C尿素呼气试验(13C-UBT)、病理组织学检查和快速尿素酶试验(RUT)4种方法在诊断儿童H.pylori感染中的临床价值。方法 142例因消化道症状需胃镜检查患儿在前1d均行13C-UBT检查,... 目的比较幽门螺杆菌(helicobacter pylori,H.pylori)培养、13C尿素呼气试验(13C-UBT)、病理组织学检查和快速尿素酶试验(RUT)4种方法在诊断儿童H.pylori感染中的临床价值。方法 142例因消化道症状需胃镜检查患儿在前1d均行13C-UBT检查,胃镜直视下胃窦处取3块黏膜分别行H.pylori培养、病理组织学检查和RUT。结果 142例胃镜检查患儿,H.pylori阳性总检出率53.5%(76/142)。慢性浅表性胃炎患儿、慢性浅表性胃炎并十二指肠球炎患儿和十二指肠球部溃疡患儿H.pylori检出率分别为39.2%、61.9%和100%。以"总检出率"为诊断标准,H.pylori培养灵敏度97.4%,特异度100%,符合率98.6%;13C-UBT检测方法灵敏度94.7%,特异度98.5%,符合率96.5%;病理组织学方法灵敏度84.2%,特异度97.0%,符合率90.1%;RUT方法灵敏度89.5%,特异度81.8%,符合率85.9%。以"总检出率"和"细菌培养"为诊断标准,13C-UBT、病理组织学和RUT灵敏度、特异度和符合率差异无统计学意义(P>0.05)。结论儿童胃、十二指肠疾病,H.pylori感染是引起十二指肠球部溃疡和慢性浅表性胃炎并十二指肠球炎的主要病因之一。H.pylori培养仍是检测儿童H.pylori感染的"金标准",应重视其在临床工作中的应用。不配合胃镜检查3岁以上儿童可行13C-UBT检测H.pylori感染。不推荐临床上以病理组织学检测结果阴性作为否定H.pylori感染的依据。不推荐临床上以RUT单项检测结果作为诊断H.pylori是否感染的依据。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细菌培养 13C呼气试验 尿素酶试验 病理组织学
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2011~2012年广州地区儿童腹泻病原菌分布及耐药性分析 被引量:12
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作者 黄莲芬 刘海英 +2 位作者 谢永强 钟华敏 周珍文 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第10期1351-1353,共3页
目的:了解广州地区儿童细菌性腹泻主要病原菌分布及其耐药性。方法对2011~2012年疑似细菌性腹泻患儿大便标本进行细菌培养,分析病原菌分布特征及耐药性。结果2011~2012年共检出儿童腹泻病原菌416株,其中沙门菌属、致病性大肠埃希... 目的:了解广州地区儿童细菌性腹泻主要病原菌分布及其耐药性。方法对2011~2012年疑似细菌性腹泻患儿大便标本进行细菌培养,分析病原菌分布特征及耐药性。结果2011~2012年共检出儿童腹泻病原菌416株,其中沙门菌属、致病性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、白色念珠菌分别占53.61%、37.98%、5.29%、1.68%。主要病原菌对抗菌药物的耐药率分别为氨苄西林85.25%、复方磺胺甲噁唑54.28%、头孢噻肟44.70%、头孢曲松42.53%、氯霉素40.66%、头孢他啶23.55%、氨曲南23.36%、环丙沙星14.88%、头孢吡肟8.07%、头孢哌酮/舒巴坦7.99%、哌拉西林/他唑巴坦7.42%、亚胺培南0.00%。结论广州地区儿童腹泻病原菌以沙门菌属、致病性大肠埃希菌、空肠弯曲菌为主;敏感性排名前5位的抗菌药物为亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星。 展开更多
关键词 腹泻 病原菌 耐药性 儿童
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嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达 被引量:1
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作者 关小珊 周珍文 +3 位作者 关锐梨 邓秋连 谢永强 钟华敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第13期2150-2152,共3页
目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分... 目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。 展开更多
关键词 嗜麦芽窄食单胞菌 Smqnr基因 克隆 原核表达
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脓毒血症患者血液分离金黄色葡萄球菌毒素基因的检测 被引量:3
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作者 陈吟霜 周帅 +5 位作者 杨镒宇 谢永强 钟华敏 黄莲芬 姚淑雯 周珍文 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期3018-3020,共3页
目的了解脓毒血症患者金黄色葡萄球菌(SA)血液分离株毒素基因的携带情况。方法对从临床标本分离出的50株SA,设计特异性引物,PCR扩增sea、tsst-1、eta和hlg毒素基因。结果 50株SA中有44株携带以上毒素,占88%,各基因携带率分别为sea 42%(2... 目的了解脓毒血症患者金黄色葡萄球菌(SA)血液分离株毒素基因的携带情况。方法对从临床标本分离出的50株SA,设计特异性引物,PCR扩增sea、tsst-1、eta和hlg毒素基因。结果 50株SA中有44株携带以上毒素,占88%,各基因携带率分别为sea 42%(21/50)、tsst-1 52%(26/50)、eta 30%(15/50)、hlg 22%(11/50),同时携带2种及2种以上毒素的占44%(22/50),其中11株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)毒素携带率为100%(11/11),以sea为主,占90.91%(10/11),甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)39株毒素携带率79.49%(31/39),以tsst-1为主,占48.72%(19/39)。结论临床脓毒血症患者SA大部分携带毒素,MRSA的带毒率高于MSSA,表明MRSA致病性及毒性高于MSSA,临床需重视MRSA监控,合理使用抗生素,有效控制院内感染。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 毒素基因 耐甲氧西林金色葡萄球菌
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CD-1400型血细胞分析仪的使用体会
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作者 涂晓耘 王华 周珍文 《江西医学检验》 1995年第3期12-13,共2页
关键词 血细胞分析仪 方法介绍 自动化分析 使用体会 CDL4 使用不当 参考 影响工作 优越性 快速
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乳酸脱氢酶及其同工酶在胸腔积液中的临床意义 被引量:1
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作者 杨德昌 曾黎峰 周珍文 《江西医学检验》 1999年第4期212-213,208,共3页
目的探讨乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶对鉴别诊断胸腔积液中良、恶性疾病及监测其病程预后的临床价值。方法将207例伴有胸水的肺癌、结核性胸膜炎及肺炎、心功能不全、心力衰竭患者分为三组,LDH采用酶法检测,其同工酶则以醋纤琼脂糖... 目的探讨乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶对鉴别诊断胸腔积液中良、恶性疾病及监测其病程预后的临床价值。方法将207例伴有胸水的肺癌、结核性胸膜炎及肺炎、心功能不全、心力衰竭患者分为三组,LDH采用酶法检测,其同工酶则以醋纤琼脂糖电泳法进行酶谱分析。分别检测患者胸水和血清LDH及其同工酶。结果结核性胸膜炎患者胸水LDH增加显著,为1294±212.9U/L,与自身血清相比有显著差异(P<0.001),同工酶以LDH4、5增加明显,肺癌病人的胸水LDH为1021±363.8U/L,与自身血清相比也具显著性差异(P<0.001),同工酶以LDH5为主,而肺炎、心功能不全和心衰者胸水LDH为161±54.3U/L,与其血清相比无统计学意义,同工酶酶谱也无临床意义。结论血清和胸水LDH及其同工酶测定对心衰,肺部感染、结核性胸膜炎具有重要的鉴别诊断及监测疾病病程和预后的价值。 展开更多
关键词 乳酶脱氢酶 LDH同工酶 胸腔积液
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