采用可溶性噻唑盐WST-8检测细胞病变

目的 建立一种简便和客观的检测细胞病变的方法。方法 活细胞代谢过程中 ,可溶性噻唑盐WST 8在电子载体 1 MethoxyPMS存在时被还原形成的可溶性甲染料 ,通过读取A4 50 6 30 间接检测活细胞的个数 ,可用于细胞病变的检测。将WST 8法用于rhIFN α1b效价的检测 ,并与结晶紫法和常规镜检相比较。结果 相关性研究表明在一定细胞浓度范围内 (2 0 0～ 5 5 0 0 0细胞 孔 )Wish活细胞个数与A4 50 6 30 值呈线性相关 ,相关系数为 0 998。WST 8法检测rhIFN α1b的效价结果与结晶紫法和常规镜检结果基本一致 ,相关系数分别为 0 911(P <0 0 0 1)和0 94 5 (P <0 0 1)。结论 WST

高选择性手性酯酶产生菌的筛选及应用

从土壤中分离得到 2 30株产酯酶菌株 ,经反复筛选 ,从中挑选出一株酶活及选择性均较高的菌株YQ2 31,该菌株所产酯酶能将外消旋的酯水解为手性醇 (环戊烯酮 ) ,且该酶优先水解 (R) -型酯 .经生理生化试验鉴定 ,该细菌为不动杆菌属 (Acinetobactersp .) .研究了该菌株的产酶过程 ,结果表明 :酶活在 2 4h达最高值 .同时研究了该菌株的催化特性 ,在反应 12h时其转化率达 48.8% ,eep为 92 .3 % ,ees为 70 .3 % .图 3表 2参

非洲绿猴肾细胞(Vero)无血清细胞库的建立

目的建立Vero细胞无血清细胞库。方法采用序贯适应和直接适应方法,将Vero细胞从有血清培养适应到无血清培养,建立Vero细胞无血清细胞主库和工作库,采用STR图谱并结合染色体计数对Vero细胞进行鉴别,并对Vero细胞无血清细胞库进行致瘤性和病毒外源因子检定。结果两种方法均能使Vero细胞适应到无血清培养,其中直接适应法可大大缩短适应代次,因此选择其作为建立Vero细胞无血清细胞库的方法。Vero细胞无血清主库和工作库的STR图谱与日本细胞库公布的Vero细胞STR图谱完全一致,Vero细胞库无外源因子污染,无致瘤性。结论Vero细胞无血清细胞库可用作生物制品生产用候选细胞基质。

细胞密度和营养供给对H1N1流感病毒产率的影响

探究细胞培养生产流感病毒过程中,高细胞密度引起低单位细胞病毒产率(Svy)的原因及找到解决方法。通过增加微载体浓度以及换液操作获得较高的细胞密度;考察了感染时细胞密度(CCI)和病毒感染用维持培养基对病毒产量和单位细胞病毒产率的影响。在12.6 g/L微载体培养过程中,通过换液操作,可获得高细胞密度,达到1.47×107 cells/m L。在CCI为1×107cells/m L条件时,选择合适的维持培养基,其Svy最高达到5.14×103 virions/cell,比同等条件下用DMEM维持培养基的Svy值提高了近一倍。高密度培养MDCK细胞生产流感病毒时,充分考虑不同阶段的培养条件和营养需求,可以提高细胞密度和单位细胞病毒产率,进而提高流感病毒的产量。该研究结果为工业化生产流感病毒疫苗提供了基础数据。

高校主题团日活动提升党史教育实效性途径研究——基于无锡某高职院校的调研

运用调查问卷及访谈方式,对无锡某高职院校党史教育教学工作进行了调查,并分析了传统党史教育的缺陷,提出了"实践教育,特别是依托主题团日活动开展党史教育,是提升党史教育实效性重要途径"的基本思想,并结合活动开展的具体实践,探索提出了主题团日活动介入党史教育的主要途径。

无锡职教园与锡西新城协同发展的思考

按照《苏南现代化建设示范区规划》提出的"在无锡建设职业教育改革实验区"的要求,分析苏南现代化建设新形势下无锡职教园与锡西新城协同发展面临的问题,并提出对策建议,以期为无锡职教园和锡西新城的一体化发展提供借鉴,带动园区企业的科技创新,进而推动无锡新板块"魅力锡西,山水智城"——锡西新城的全面发展。

石墨烯/导电高分子/离子液体修饰的黄曲霉毒素B_1免疫传感器的制备及应用

依次电沉积氧化石墨烯、2,5二(2噻吩)-1-对苯甲酸吡咯和氯金酸于金电极表面,以EDC/NHS为活化剂,将黄曲霉毒素B_1(AFB_1)抗体共价连接在导电高分子膜上,最后滴涂1,3-二丁基咪唑六氟磷酸盐离子液体于上述修饰电极表面,制得AFB_1免疫传感器。以Fe(CN)_6^(3-/4-)的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)为测试底液,采用循环伏安法和交流阻抗法考察此免疫传感器的电化学行为。研究表明:石墨烯和纳米金的引入明显提高了修饰层的电子转移速率,使电极的表观活性面积由裸金电极的0.1772 cm^2增加到0.2188 cm^2和0.2640 cm^2。当AFB_1浓度在3.2×10^(-15)～3.2×10^(-13)mol/L范围内,传感器的交流阻抗响应值与浓度呈线性关系,相关系数R^2=0.994,检出限为1.1×10^(-15)mol/L。传感器在4℃下保存20周以上,电化学响应保持基本不变。本方法的灵敏度和稳定性优于现有文献报道,并应用于花生样品中痕量AFB_1的测定。

MDCK细胞宿主蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的建立检测犬肾细胞(madin-darby canine kidney, MDCK)宿主细胞蛋白(host cell protein, HCP)含量的双抗体夹心ELISA。方法从MDCK细胞中提取细胞总蛋白,免疫新西兰兔制备兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体,抗体经辛酸-硫酸铵沉淀和Protein A层析纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,Western blot检测抗体特异性。用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,并采用改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体,建立ELISA并确定包被抗体浓度和辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体稀释度等最适条件。确定该方法较佳的线性范围及检测限,并对该法特异性、准确度、精密性和重复性进行验证。最后,用该方法分别对接种流感病毒的MDCK细胞上清收获液和纯化样品进行MDCK细胞蛋白含量检测,初步验证其在纯化工艺开发中的适用性。结果通过免疫新西兰兔制备了高滴度的兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体血清,滴度可达1∶8 000。纯化后的兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体纯度>90%,并可与MDCK细胞蛋白特异性结合。建立的双抗体夹心ELISA的理想包被抗体质量浓度为10μg/mL,酶标抗体的工作浓度为1∶500稀释。该方法的线性范围为50~2 500 ng/mL,检测限为50 ng/mL;该方法对Vero细胞、293T细胞和Mrc-5细胞等其他细胞HCP无交叉反应,特异性良好;不同浓度的MDCK细胞HCP回收率在98.5%~111.9%之间,变异系数均<10%。接种流感病毒的MDCK细胞培养上清经多步纯化后MDCK细胞蛋白质量浓度逐渐降低至<900 ng/mL,纯化工艺可有效去除MDCK细胞蛋白残留。结论建立双抗体夹心ELISA检测MDCK细胞残余HCP含量的方法,可用于基于MDCK细胞培养的流感疫苗下游工艺开发中宿主细胞残留HCP含量监测。

新时代提升无锡城市软实力的路径研究

进入新时代,软实力越来越成为一座城市综合实力的重要标识。近年来,围绕提升城市软实力,无锡聚焦城市形象营销、推动人才集聚、优化营商环境、供给文化产品等领域精耕细作、久久为功,致力打磨出一个软实力厚重的“精彩城市”。无锡市第十四次党代会提出了“努力在文化软实力上取得突破”的工作目标,需要无锡对标先进、学习榜样,秉持市民文明素质和城市文明程度双向提升、历史传统与现代魅力竞相绽放、城市治理与人居生活的优化更新、人才招引与城市推介相得益彰等原则,从塑造精神内核、培育文化特质、更新治理模式、创新城市叙事等方面,为提升城市软实力定势、起势、造势、借势,推动软实力与硬实力紧密联动,为无锡“走在率先实现社会主义现代化最前列”提供强大精神动力。

抗癌症的新武器

当前，树突状细胞(DCs)是免疫治疗方面的一个热门话题，它们不仅为免疫系统提供抗原，且对T细胞激活有决定性作用。使DCs提供抗原的问题已以不同方式解决，大多数有关DCs的体外研究已在融合之前进行，尽管这些方法达到不同程度的成功，但此法在细胞培养时所花费的时间和费用是很值得的。

衣原体疫苗的进展

衣原体在人类、哺乳动物和鸟类中会引起各种疾病。对人类和动物的健康及全球农业生产会产生重大影响。人的2种主要衣原体病原体是沙眼衣原体和肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae)。沙眼衣原体会引发慢性结膜炎等，是人类最普通的性传播疾病，感染为隐性过程，如果不治疗，

是否有必要进行甲型肝炎疫苗的加强接种?

资料表明健康人群全程初免甲型肝炎 (HA)疫苗后 ,保护性抗体水平可持续 10年以上 ,潜在的免疫记忆可提供比抗 HA病毒 (HAV)抗体持续时间更长的保护力。专家得出结论 ,没有证据表明 ,健康人群全程初免后 ,还需要加强接种 HA疫苗。但是加强接种能否在特殊的病人群体中被省略还需要进一步调查。

制备流感疫苗的细胞基质研究进展

考虑到鸡胚生产流感疫苗的局限性,研究者们开始关注细胞培养疫苗生产技术.此文主要介绍了几种常用的细胞基质（如Vero、PER.C6、Madin-Darby狗肾细胞和其他动物细胞）,阐述了利用细胞培养技术制备流感疫苗的方法及研究进展.相关研究显示细胞基质生产的流感疫苗与鸡胚生产的流感疫苗相比,效果相似或者更好.

微载体浓度与细胞接种密度对MDCK细胞生长的影响

目的探讨微载体浓度与犬肾脏上皮（Madin-Darby canine kidney,MDCK）细胞接种密度之间的关系,及其对MDCK细胞生长代谢的影响。方法实验设计了4组不同的单个微载体周围的细胞数范围,分别为0-10、10-20、20-60和60-120个,每组范围分别通过控制微载体浓度或细胞接种密度得到2组不同条件的实验组,即12 g/L微载体组和5×104个/ml MDCK细胞组、7 g/L微载体组和1×105个/ml MDCK细胞组、3 g/L微载体组和5×105个/ml MDCK细胞组、1 g/L微载体组和1×106个/ml MDCK细胞组,其中1、3、7、12 g/L微载体组细胞接种密度均为2×105个/ml,5×104、1×105、5×105、1×106个/ml MDCK细胞组微载体浓度均为3 g/L。经转瓶培养,每隔24 h取样,进行细胞计数,并检测细胞代谢。按确定的最佳细胞接种密度和微载体浓度培养MDCK细胞72 h后,接种0.01 MOI的甲型流感病毒株A/PR8/34,检测病毒的HA效价。结果当一个微载体周围的细胞数控制在20-60个之间,微载体浓度为3 g/L,细胞接种密度为5×105个/ml时,活细胞密度（viable cell density,VCD）可达3×106个/ml以上,细胞在72-96 h之间,能获得一个较为稳定的平台期,葡萄糖等营养物不会消耗过多以致耗竭,而乳酸、氨等代谢副产物的累积对培养环境造成的压力较小,有利于后期流感病毒的接种,同时还可达到理论最高活细胞值的60%以上。HA效价可达12 log2HA units/50μl。结论控制单个微载体周围细胞数在20-60个之间,细胞生长和代谢显著优于其他条件,且有利于病毒的复制,提高了病毒滴度。为基于MDCK细胞大规模高效生产流感病毒疫苗的工业化生产提供了数据参考。

流感病毒聚合酶结构功能及其作为抗病毒靶点研究进展

流感病毒RNA聚合酶是由PB2,PB1,PA三个亚基组成的蛋白质复合物,分别由流感基因片段1,2,3编码。在流感病毒基因组RNA复制,病毒mRNA转录以及维持病毒生命周期中发挥着重要作用。近年来随着对其深入研究,为抗流感病毒药物的研制奠定了基础。本文主要介绍了RNA聚合酶各个亚基的结构、功能,亚基间相互作用以及RNA酶抑制剂的研究进展。