云南HPV-16型E6、E7基因的突变分析

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型(HPV-16)是引起宫颈癌的一种主要高危型病毒,其2个致癌基因E6和E7的核酸序列变异可能会影响其对宿主细胞的致癌性,已有研究表明其序列突变呈现地域差异性。因此,研究不同地域HPV-16这2个基因的变化情况是宫颈癌流行病学调研的主要内容,也可为研究E6和E7的致癌性积累数据。研究以NCBI登录号为NC_001526.2的HPV-16型病毒的序列为参照,采用Neighbor-joining方法对云南地区74例HPV-16样本的E6、E7的DNA序列构建进化树,结果显示:只有亚洲和欧洲变异亚型,而没有发现非洲1、非洲2、亚-美洲和北美洲这4种变异亚型。DNA序列分析显示:E6的碱基突变以T178G(D25E,59.46%)和T350G(L83V,8.11%)为主,E7的碱基突变主要以A647G(N29S,59.46%)和T846C(同义突变,60.81%)为主。发现E6的新突变有A95G(同义突变,1.35%)和A135G(K11R,1.35%);E7的新突变有C625T(L22F,1.35%)、C627T(同义突变,12.16%)、G689A(G43E,1.35%)、T748G(S63A,1.35%)。此外还发现有一个共突变现象:T178G(D25E,59.46%)-A647G(N29S,59.46%)-T843C(同义突变,21.62%)-T846C(同义突变,60.81%)。

儿童剂量不含硫柳汞的流感病毒裂解疫苗的制备及其稳定性研究

目的探讨儿童剂量不添加防腐剂的流感疫苗制备及其稳定性。方法将H1N1、H3N2、B型流感病毒接种于鸡胚尿囊液中制备儿童剂量的3批不含硫柳汞的流感病毒裂解疫苗,进行疫苗的稳定性试验。分别采用单向免疫扩散法（SRID）及酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血凝素及卵清蛋白浓度,并检测疫苗总蛋白浓度、外观、无菌试验、内毒素、游离甲醛及pH值等。结果疫苗pH值为7.2,总蛋白浓度为182～189mg/mL。2～8℃保存3、6、9、12、18个月及（37.0±2.0）℃放置7、14d,H1N1、H3N2及B血凝素浓度有所下降,但最终均保持在6.0μg/0.25mL以上。结论不添加硫柳汞的流感疫苗稳定性符合《中国药典》（2010版）标准,提高了疫苗的安全性。

脂联素基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联

目的探讨脂联素(adiponectin,Acrp30,ADIPO)基因启动子区域多态性与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的相关性.方法采用Taq Man探针基因分型方法对NSCLC患者(n=179)与健康体检人群(n=242)进行ADIPO基因启动子区域SNP-12140和SNP-11426两个位点进行基因分型,评估这2个SNPs与NSCLC发生的相关性,同时根据肺癌病理类型进行分层分析,评估这2个位点与NSCLC中与鳞癌和腺癌的相关性.结果病例组和对照组NSCLC基因SNP-12140位点基因型和等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05),SNP-11426位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组中无差异(P>0.05).在鳞癌和腺癌中SNP-12140和SNP-11426无差异(P>0.05).结论脂联素基因启动子区域SNP-11426与NSCLC的发生有关,其中A等位基因可能减少NSCLC的患病风险(OR=0.622,95%CI:0.398～0.971),但是该位点与肺癌的病理类型无相关性.

利用微波组织处理机快速制备透射电镜样品的方法探讨

透射电镜用于疾病的病理诊断已为广大医务工作者熟知，但电镜样品常规制备的方法周期较长、过程繁琐，不能及时做出报告，限制了电镜在临床诊断上的广泛应用。因此缩短样品制备时间，且不影响组织细胞超微结构并达到病理诊断的要求，成为现阶段学者们的研究热点。本实验利用微波组织处理机，对快速制备电镜样品的方法进行探讨，并报道如下。

知难而进 奋力开拓

总结了１９９５年的工作，提出了１９９６年的奋斗目标及保证措施。

临床常见酵母样真菌鉴定方法的比较

目的为寻求快速、准确、满足临床要求，比较3种常见酵母样真菌鉴定方法。方法对我院临床分离出的21例酵母样真菌分别采用同化试验、显色法、YBC卡进行鉴定比较。结果同化试验鉴定出11例白念珠茵，3例光滑念珠菌，2例近平滑念珠茵，与YBC卡总符合率为76．2％（16／21）；显色法鉴定出11例白念珠茵，3例光滑念珠菌，5例热带念珠菌，与YBC卡的总符合率为90．5％（19／21）：YBC卡鉴定出12例白念殊菌，3例光滑念珠茵，4例热带念珠菌，2例近平滑念珠茵。结论对于酵母样真菌首选CHROMagar念珠菌显色培养基对进行培养，少数显色不典型或不能显色的茵落再采用Vitek32一YBC或同化试验及形态学进行鉴定．

云南汉族人群内质网氨肽酶2基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的相关性

目的 探讨内质网氨肽酶2 （ERAP2）基因多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）的相关性.方法 收集云南地区汉族人群NSCLC患者223例,健康体检者205名.采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP2基因单核苷酸多态性（SNP） rs2248374和rs2549782位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述2个SNP位点及单倍型与NSCLC的相关性.结果 病例组和对照组ERAP2基因rs2248374等位基因频率A和G分别为45.5％（203/446）、54.5％（243/446）和37.8％ （155/410）、62.2％（255/410）,差异有统计学意义（x2=5.220,P＜0.05）,rs2549782位点GG、GT、TT基因型频率分别为21.5％（48/223）、48.9％（109/223）、29.6％（66/223）和11.7％（24/205）、49.8％（102/205）、38.5％（79/205）;等位基因频率G和T分别为46.0％（205/446）、54.0％（241/446）和36.6％（150/410）、63.4％（260/410）,差异有统计学意义（x2值为8.656和7.741,均P＜0.05）,由rs2248374和rs2549782位点构建的单倍型AG和GT的频率分别为44.6％ （199/446）、36.1％ （148/410）和53.1％（237/446）、61.7％ （253/410）,差异有统计学意义（x2值为6.567,均P＜0.01）.病例组中吸烟和非吸烟患者rs2248374位点的等位基因频率A和G分别为52.9％（72/136）、47.1％ （64/136）和42.3％（131/310）、57.7％ （179/310）,rs2549782位点的等位基因频率G和T分别为54.4％（74/136）、45.6％（62/136）和42.3％ （131/310）、57.7％ （179/310）,差异有统计学意义（x2值为4.498和5.831,均P＜0.05）,而鳞癌和腺癌患者的rs2248374位点AA、AG、GG基因型频率分别为17.3％（24/139）、56.1％ （78/139）、26.6％（37/139）和27.8％（22/79）、38.0％（30/79）、34.2％（27/79）,rs2549782位点GG、GT、TT的基因型频率分别为18.7％（26/139）、55.4％（77/139）、25.9％（36/139）和27.8％ （22/79）、36.7％（29/79）、35.4％（28/79）,差异有统计学意义（x2值为6.999和7.093,均P＜0.05）.结论 ERAP2基因与NSCLC的发生及病理类型有关,rs2248374和rs2549782位点AG单倍型可能增加NSCLC的患病风险（OR=1.435,95％ CI为1.088 ～ 1.893）,而rs2248374和rs2549782位点GT单倍型可能降低NSCLC的患病风险（OR=0.697,95％ CI为0.528 ～0.919）.

流行性感冒病毒裂觧疫苗的制备工艺研究

目的研制安全有效的流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗[Influenza Vaccine(Split Virion),Inactivated;lnfV-Sp]。方法将H1N1、H3N2和B型三株流感病毒分别接种鸡胚,收取尿囊液,经乙醚和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)裂解病毒,制成疫苗,电镜观察了流感病毒裂解效果,用美国癌症研究所选育的Swiss小鼠[(Institute of Cancer Research,ICRUS)(ICRUS)分送各国饲养实验,各国称为ICR小鼠]进行了疫苗的安全性和免疫学效果实验。结果电镜观察结果显示,裂解剂对病毒裂解完全,疫苗中无完整病毒颗粒,裂解效果好,疫苗具有良好的安全性和免疫原性。结论动物实验初步表明,该疫苗安全有效,为开展人体临床研究提供了依据。

一株埃可病毒12型病毒分离鉴定及其VP1基因特征分析

目的分离并鉴定2010年昆明市无菌性脑膜炎的病原埃可病毒12型（ECH012）病毒株F343／KM／2010，分析其VP1基因遗传特征，为病毒性脑炎的防控提供科学依据。方法采用RD细胞和Hep-2细胞对15份疑似无菌性脑膜炎患者粪便样品进行分离，经微量中和试验对该分离株进行鉴定，通过RT—PCR法扩增病毒VP1基因和测序，并采用MEGA5．05等软件进行进化树和同源性分析。结果9份样品出现细胞病变效应，其中F343／KM／2010分离株经微量中和试验定型为ECH012病毒；经RTPCR法扩增获得873bp的VP1基因，与国内外11株ECH012病毒分离株核苷酸和氨基酸的同源性为81．4％～92．8％和97．6％～99．3％，其中与国内分离株的核苷酸和氨基酸同源性为89．5％～92．8％和98．3%～99．5％。F343／KM／2010株与原型株Travis比较在氨基酸上有8个位点发生突变，而与中国株比较主要在第288位点上发生了突变。在进化树上与国内分离株属于同一个分支，而国外分离株分属其他两个不同的分支。结论F343／KM／2010分离株为肠道病毒ECHO12病毒，与中国其他分离株同属一个分支。

ERAP1基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联研究

目的探讨内质网氨肽酶1(endoplasmic reticulum aminopeptidase 1,ERAP1)基因多态性与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的相关性。方法入选NSCLC患者224例,健康体检人群207例。采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP1基因SNP rs26653和rs26618两个位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述两个SNPs及单倍型与NSCLC的相关性。结果病例组和对照组ERAP1基因rs26618和rs26653基因型和等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05)。病例组和对照组rs26618/rs26653单倍型CG、TC的单倍型频率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ERAP1基因与NSCLC的发生有关,rs26618/rs26653-CG单倍型可能增加NSCLC的患病风险,rs26618/rs26653-TC单倍型对NSCLC可能具有保护性作用。