绿色木霉对黄瓜灰霉病的防治作用

通过温室盆栽测定绿色木霉对黄瓜灰霉病的预防和治疗效果。试验结果表明 ,绿色木霉对灰霉病的最佳预防浓度为 4× 10 9个 /ml(毫升 ) ,而且在灰霉病菌侵染前喷施为好 ;在黄瓜受灰霉菌侵染初显症状时 ,喷施绿色木霉防治的最佳浓度是 10 8个 /ml(毫升 )。

抗药性木霉菌研究进展

概述了筛选抗药性木霉菌株的必要性 ,重点介绍了筛选抗药性木霉菌株的技术和木霉菌株抗药的分子机理 ,最后对抗药性木霉菌的研究热点进行了展望。

耐多菌灵木霉菌株的可溶性蛋白电泳研究

本文利用筛选获得的耐多菌灵的木霉菌株,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)发现:耐药性菌株的可溶性蛋白含量比对照菌株增加,而且在Rf=0.873处出现较强的特征性条带,说明该处的基因表达量增加。

靶向抗肿瘤GnRH-PE39KDEL融合蛋白表达培养基的优化

通过筛选培养基、单因子筛选试验及正交试验进行摇瓶发酵,确定适合该菌株表达融合蛋白的最佳培养基配方。采用该优化培养基可使抗肿瘤GnRH-PE39KDEL融合蛋白表达量占总蛋白的34.5%,占可溶蛋白的40%。

红曲霉菌体残渣酶解条件优化研究

为提高红曲霉菌(Monascus purpureus)体残渣的利用率,采用机械破壁和酶解结合方法释放胞内蛋白。细胞破碎液经纤维素酶与复合酶联合处理,通过正交试验确定最佳的水解条件为红曲霉菌体残渣质量浓度60 g/L、酸性纤维素酶用量1.0%、复合酶用量0.5%、水解时间36 h。在此条件下,红曲霉菌体残渣的失重率达到27.86%,总糖含量达到7.38 g/L,小肽含量达到83.95 mg/g,游离氨基酸含量达到22.31 mg/g。

非致病性双核丝核菌BNR-1对小麦防御酶系的影响

用非致病性双核丝核菌(Nonpathogenic Binucleate Rhizoctonia species)菌株BNR-1接种处理小麦植株根际,测定一定生长期内小麦防御酶活性变化,结果表明经过BNR-1处理的小麦样品,其防御酶过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸转氨酶(PAL)、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性明显提高,而且经过BNR-1处理的小麦样品纹枯病(wheat sharp-eye spot)发病率明显降低。

原生质体融合技术改良植病生防木霉菌株

以产孢量大,对苯菌灵有抗性,对潮霉素B敏感的哈茨木霉菌株T9和产孢量少,对潮霉素B有抗性,对苯菌灵敏感的康宁木霉菌株Tk7a为亲本,进行原生质体融合,筛选获得抗最高浓度杀菌剂的融合子。所有融合子的产孢量均比亲本菌株Tk7a大。融合子按照菌落形态的不同分成4组,大部分融合子的几丁质酶、葡聚糖酶和内切葡聚糖酶的活性比亲本菌株高。融合子对棉花猝倒病菌和小麦全蚀病菌的寄生能力基本等同于亲本菌株;融合子对小麦全蚀病的防效比亲本菌株稍好,其刺激麦苗根部生长的能力与亲本菌株相差不大。两个融合子根际竞争能力比亲本菌株T9强,和亲本菌株Tk7a相当。

芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆、序列分析及其在伯克氏菌B418中的表达

采用PCR技术扩增到枯草芽孢杆菌几丁质酶基因的编码序列。片段共2227bp,含有一个具有1788个核苷酸的开放阅读框架,起始密码子位于211bp,终止密码子位于1998bp,共编码氨基酸605个。序列比较发现同已发表的枯草芽孢杆菌几丁质酶核苷酸具有99.39%的同源性。将该基因与大肠杆菌-伯克氏菌穿梭质粒pRK415连接,获得重组质粒pRChi113。重组质粒电击转入伯克氏菌B418中,获得工程菌株B418-9、B418-13。与野生菌株B418相比,平板拮抗试验表明,工程菌株B418-9、B418-13对大丽花轮枝孢、立枯丝核菌、麦根腐长蠕孢、禾谷丝核菌抑菌效果明显提高。

多功能植病生防木霉的分离筛选与鉴定

从采集的120份土壤样品中分离获得木霉244株。对峙培养发现其中对棉花立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)具有拮抗能力的有114株;固体培养检测木霉的解磷和固氮能力,发现所有菌株都能够水解植酸钙,有74株能够水解磷酸钙,未发现具有固氮能力的菌株。对抑菌圈和解磷圈最大的19株木霉在液体培养条件下检测了解磷和解钾能力,其中菌株T13-8(1.792μg/mL)、T23(1.652μg/mL)显示出较高的解磷能力,部分菌株在液体培养条件下不能解磷;部分菌株在液体培养下显示出解钾功能,其中菌株T47-4(20.585μg/mL)显示出较高的解钾能力。上述19个菌株的形态学和ITS序列分析鉴定表明,其中9个菌株为Trichoderma longibrachiatum,8个菌株为T. harzianum,另外2个菌株分别为T. virens和T. citrinoviride。

土壤杀菌剂对木霉根际竞争的影响及木霉对玉米生长作用的初步研究

利用木霉对五氯硝基苯的天然抗性，在土壤中施用4-12μg·g^-1土五氯硝基苯。结果表明，哈茨木霉T7在用4μg·g^-1土五氯硝基苯处理的玉米根际土中的根际竞争指数为4．332，明显高于对照（RC=3．758）。表明适量浓度的土壤杀菌剂，能提高其在玉米根际土中的种群密度，从而提高其根际竞争；但在6-12μg·g^-1土五氯硝基苯处理的玉米根际土中均低于对照，表明过高浓度的杀菌剂会因影响木霉的生长而降低其在根际的竞争能力。盆栽试验表明，用哈茨木霉T7处理土壤，对玉米的出苗无明显作用，但对玉米植株后期的生长有明显的促进作用。

利用根癌农杆菌介导的转化方法改良木霉菌(英文)

根癌农杆菌介导的转化系统在丝状真菌的研究中具有重要的意义。通过农杆菌介导,成功实现了丝状真菌绿色木霉菌(Trichodermaviride)遗传转化,转化率约为30～80个转化子105个孢子。PCR检测和几丁质酶分析表明含有编码几丁质酶外源基因(chi113)的TDNA已整合进木霉菌基因组中,而且转化子都能够稳定遗传。农杆菌介导的遗传转化方法具有转化率高、操作简便、遗传稳定等优点,在丝状真菌的遗传转化中具有重要的意义。

木霉及其制剂对棉花真菌病害的防治效果(英文)

在盆栽条件下,9个木霉菌株对棉花丝核菌立枯病的防治效果为39.71%-82.35%,14个菌株对棉花枯萎病的防治效果为37.5%-75.00%,9个菌株对棉花黄萎病的防治效果为30.49%-65.85%。制备了绿色木霉LTR2的可湿性粉剂,田间条件下处理种子及灌根,菌剂对棉花枯萎病的防治效果达50.1%-80.0%。

两株多功能生防细菌在小麦根际定殖及其对小麦病害的防治效果

褐球固氮菌YKT41和伯克霍尔德氏菌B418分离自白俄罗斯明斯克市的大麦根际土,两株细菌均能在小麦根际有效定殖,最高定殖菌数分别为根际总好氧细菌总数的0.32%和7.94%。温室试验表明,两株细菌对小麦纹枯病的防效分别为47.02%和61.62%,对小麦全蚀病的防效分别为27.98%和44.65%。各处理组与空白对照间差异极显著(P<0.01)。

黑蛋巢菌属和红蛋巢菌属真菌的5种水解酶活性测定

通过测定黑蛋巢菌属9个菌株和红蛋巢菌属6个菌株的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、纤维素酶、木聚糖酶和木质素过氧化物酶共5种水解酶活性,为评价和合理利用鸟巢菌资源提供依据。结果表明,所有菌株均具有以上水解酶活性,同一种水解酶的活性在不同菌株之间以及同一菌株的不同水解酶活性差异显著。其中红蛋巢菌134表现出最大的几丁质酶活性,达到122.1 U/mL;黑蛋巢菌24的β-1,3-葡聚糖酶活性最强,达到143.7 U/mL;在25℃下培养,黑蛋巢菌185的纤维素酶活性最高,达到62.3 U/mL,35℃下培养,菌株185的纤维素酶活性也最高,达到了137.6 U/mL,所有菌株的纤维素酶活性在35℃培养4周比25℃培养2周要高;在25℃下培养时,菌株134的木聚糖酶活性最高,达到了464.8 U/mL,35℃培养4周时,菌株185具有最高的木聚糖酶活性,达到了745.6 U/mL,总体上木聚糖酶的活性在35℃培养4周高于25℃培养3周;黑蛋巢菌150表现出最高的木质素过氧化物酶活性,为0.297 U/mL。总体比较,菌株185的复合酶系较发达,有望利用该菌株完成植物秸杆的降解及利用。

巨大芽孢杆菌内切葡聚糖酶编码基因的克隆及序列分析

利用pBluescripts构建巨大芽孢杆菌基因组文库,在ABP平板上测定酶活性,共有78株阳性克隆子具有内切葡聚糖酶活性。将酶活性表达较好的一株菌株进行序列测定。测定结果这个片段共941bp,含有一个开放阅读框架,共348个核苷酸,可编码116个氨基酸。序列比较结果表明,该基因片段同已发表的枯草芽孢杆菌glyB aprE之间的同源性为35%;同芽孢杆菌BP23celB、短小芽孢杆菌内切葡聚糖酶和多粘芽孢杆菌β 1,4 内切葡聚糖酶的编码基因的同源性只有27%。虽然同源性较低,但酶活性表达较强,认为该基因是编码内切葡聚糖酶的一个新基因片段。

巨大芽孢杆菌AP25内切葡聚糖酶基因的克隆及序列测定

从土壤中分离到一株产纤维素酶的巨大芽孢杆菌AP25,经羧甲基纤维素平板检测,该菌可产生葡聚糖内切酶。根据GenBank登录的-β1,4内切葡聚糖酶基因(DQ782954.1,M28332.1,AY859492.1)的同源性序列,利用PCR方法克隆到该酶的基因,并对其进行测序。测序结果显示其全长为1500bp,推测其含499个氨基酸。与GenBank中的已知葡聚糖内切酶相比较,发现该酶的氨基酸序列与Bacillus subtilis的β-1,4内切葡聚糖酶基因同源性达到达94%。

盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定

从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudomonas),黄杆菌属(Flavobacterium),盐单胞菌属(Halomonas),微球菌属(Micrococcus)和芽孢杆菌(Bacillus)。各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。

利用双亲灭活原生质体融合技术选育高效苏云金芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌融合菌株

苏云金芽胞杆菌B7发酵液在药后96 h对小菜蛾2龄幼虫致死率高达85.06%;枯草芽胞杆菌TL2对黄瓜枯萎病和辣椒疫霉病有显著拮抗活性(对峙培养5 d对病原菌的平均抑制率在60%以上)。本文对菌株B7和TL2的原生质体形成、完全灭活及融合的最佳条件分别进行了筛选,研究结果表明菌株B7在溶菌酶1.0 mg/m L、酶解70 min的条件下,原生质体形成率和再生率最佳,分别为85.0%和29.41%;菌株TL2在溶菌酶1.25 mg/m L、酶解50 min的条件下,原生质体形成率和再生率最佳,分别为80.00%和25.00%。菌株TL2原生质体完全灭活的最佳条件为60℃水浴35 min,菌株B7原生质体完全灭活的最佳条件为紫外照射25 min。灭活后的两亲本融合最佳条件为30℃水浴融合20 min后涂布再生培养基,用影印法连续传代10次以上,最后筛选出17株稳定的融合子,经过杀虫防病检测最后筛选到一株兼具两亲本特性的高效融合子TLB15。TLB15发酵液在药后96 h对小菜蛾2龄幼虫校正死亡率为93.44%,TLB15发酵液对黄瓜枯萎病和辣椒疫霉病(对峙培养5 d)的平均抑制率分别为60.00%和62.79%。

TL_2的鉴定及其对植物病原菌的抑制作用

对枯草芽孢杆菌TL2进行了16SrDNA序列分析,结合菌落形态、生理生化特征研究,将其鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。通过对峙培养法测定TL2对10种植物病原菌的抑制作用,结果表明,对峙培养5d后,TL2对10种病原菌均有不同程度的抑制作用,其中枯草芽孢杆菌TL2对辣椒疫霉菌的平均抑制率最高(65.12%),对苹果轮纹病菌的平均抑制率最低(24.14%)。

根癌农杆菌介导的木霉插入转化及其应用

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)已广泛地应用于真菌的转化研究,该方法具有操作简单、转化效率高和转化子遗传稳定等特点。木霉作为土传植物病原菌的重要生防真菌,对其生防分子作用机制方面的研究也越来越受到关注,目前所面临的问题是如何基因突变和基因替换。ATMT法为木霉(Trichodermaspp.)的分子生物学研究提供了一个强有力的工具,在木霉的插入突变、遗传转化以及基因标记和克隆方面起着重要的作用。本文综述了根癌农杆菌介导木霉遗传转化的原理、特点、转化方法和应用,并且对有关发展趋势进行了展望。