聚合草多肽的酶法制备及其免疫活性研究

为了提高聚合草利用价值,开发聚合草免疫活性肽,利用Box-Behnken设计原理,以多肽含量为响应值,用响应面法构建数学模型,确定制备聚合草多肽的最优工艺条件,并建立Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的体系(MTT法)和LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的体系(中性红法),探究所制备的聚合草多肽的免疫活性。结果表明,将聚合草以8%的料水比打浆,添加3%纤维素酶,调节pH值至6.0,45℃酶解2 h后,再添加4.57%的碱性蛋白酶,调节pH值至8.91,43.4℃酶解56 min,酶解液中的多肽含量达0.664 mg·m L^(-1)。用乙醇沉淀法收集酶解液中的多肽,制成多肽液,结果发现,66、0.66和0.066μg·m L^(-1)的聚合草多肽对小鼠脾淋巴细胞的增殖均具有显著促进作用;66、6.6和0.66μg·m L^(-1)的聚合草多肽对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能均具有显著增强作用。由此可见,本研究所制备的聚合草多肽具有免疫增强活性,这为聚合草的高值利用提供了理论依据。

弓形虫GT1虫株GRA15蛋白的表达及其反应原性分析

为了分析弓形虫GT1虫株GRA15(GRA15_(GT1))蛋白的反应原性,通过PCR扩增编码GRA15_(GT1)52～635氨基酸肽段的基因片段,构建pGEX-6P-1-GRA15_(GT1)载体,转化BL21菌诱导表达;通过SDS-PAGE和Western blot方法进行表达验证及反应原性分析。结果显示:SDS-PAGE及以GST标签抗体为一抗进行Western blot,均有目的条带,比理论值稍大;以猪弓形虫阳性血清为一抗的Western blot条带与GST抗体孵育后的条带大小一致。上述结果表明,GRA15_(GT1)蛋白具有较好的反应原性,这为下一步分段表达GRA15_(GT1)蛋白,研究其在弓形虫血清学分型中的应用奠定了基础。

弓形虫多态性GRA15蛋白的研究进展

龚地弓形虫(Toxoplasma gondii, T. gondii)是引起人兽共患弓形虫病的专性胞内寄生原虫,几乎能感染所有的温血动物[1 -2]。全球约有三分之一的人口感染弓形虫,我国平均人群弓形虫感染率为7. 88%[3 -4]。