四生汤对电磁辐射所致大鼠海马神经元损伤的抑制作用

目的评价四生汤抑制电磁辐射所致大鼠海马神经元损伤的作用。方法利用电磁辐射源辐射大鼠4周,低、中、高辐射功率密度分别为10、20及40 mW/cm^(2),构建大鼠电磁辐射损伤模型。以生理盐水为空白对照,安多霖胶囊为阳性对照,通过Morris水迷宫实验评估四生汤对大鼠因电磁辐射所致的学习记忆力下降的影响。利用TUNEL试剂盒和流式细胞术检测大鼠海马神经元的凋亡水平,采用细胞活性氧(ROS)试剂盒和流式细胞术检测大鼠海马神经元中ROS含量。结果Morris水迷宫实验结果表明,高剂量辐射结束后第7天,空白对照组大鼠的平均逃避潜伏期(AEL)比四生汤组、安多霖组延长,安多霖组大鼠的AEL比四生汤组延长(均P<0.05)。中剂量辐射结束后第3天,空白对照组大鼠的AEL比四生汤组、安多霖组延长(均P<0.05);第14、28天时,空白对照组和安多霖组大鼠的AEL比四生汤组延长(均P<0.05)。低剂量辐射结束后,空白对照组大鼠的AEL则与四生汤组、安多霖组差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞凋亡检测结果证实,高剂量和中剂量比低剂量辐射的大鼠海马神经元凋亡率增大(均P<0.05)。高、中、低剂量辐射后,安多霖组和四生汤组大鼠的神经元凋亡率均低于空白对照组(均P<0.05)。高剂量辐射后,四生汤组大鼠的神经元凋亡率低于安多霖组(P<0.05)。ROS含量检测结果表明,高、中、低剂量辐射后大鼠的海马神经元ROS含量差异无统计学意义(P>0.05),但安多霖组和四生汤组大鼠海马神经元ROS含量均比空白对照组降低(均P<0.05)。中剂量辐射后,四生汤对大鼠海马神经元ROS的抑制作用比安多霖增强(P<0.05)。结论四生汤能抑制电磁辐射导致的大鼠海马神经元凋亡、降低其细胞中ROS含量,从而减轻电磁辐射对神经元的损伤,缓解大鼠学习记忆力的下降。

BOPPPS教学模式在温病学教学中的应用探索

温病学是中医“四大经典”之一,也是中医专业学生必修的临床基础课程。BOPPPS教学模式强调以学生为主体,重视实践技能的培养,通过学生参与和教师指导之间的互动,活跃课堂氛围,促进学生对相关理论的理解与应用。本文提出在温病学教学中引入BOPPPS教学模式,按照六大要素,以暑温为例探讨实际可行的教学设计,对可能出现的问题加以分析并提出对策,以期强化中医专业学生中医思维与临床实践能力,促进现代中医药人才培养。

苓桂术甘汤促进星形胶质细胞内化降解β淀粉样蛋白机制

目的:通过观察苓桂术甘汤(LGZGT)含药血清对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导大鼠原代星形胶质细胞(AS)阿尔茨海默病(AD)病理模型的影响,探讨LGZGT对Aβ的吞噬及降解作用。方法:以Aβ_(1-42)诱导AS建立AD模型,实验分为正常组、模型组、LGZGT低、中、高剂量(LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H)含药血清组(1.2、2.4、4.8 g·kg^(-1))、盐酸多奈哌齐含药血清组(0.5 mg·kg^(-1)),模型组加入Aβ_(1-42),终浓度为10μmol·L-1,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组在模型组的基础上均加入10%的含药血清。通过细胞增殖活力检测(CCK-8)试剂盒检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH活力;用倒置显微镜观察各组细胞形态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Aβ相关降解酶胰岛素降解酶(IDE)、组织蛋白酶D(CTSD)的表达;采用免疫荧光法测定组织蛋白酶B(CTSB)的荧光强度;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞Aβ_(1-42)含量。结果:与空白组比较,各组AS活力下降,且不同浓度的Aβ_(1-42)对AS的增殖具有抑制作用;给药后,与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞存活率明显增加(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组的细胞的LDH活力明显升高(P<0.05),且细胞胞体肥大肿胀,突起增多且延长,细胞相互聚集成团,提示细胞损伤较为明显;与模型组比较,盐酸多奈哌齐、LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组细胞LDH活力显著降低(P<0.01);给药后,LGZGT-M组、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞体肿胀有所改善,细胞突起短,细胞聚集结团减少;与正常组比较,模型组IDE、CTSD的表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组能够明显上调IDE的表达(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组均能明显上调CTSD的表达(P<0.01);与正常组比较,模型组的CTSB的平均荧光强度明显降低(P<0.05),与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组CTSB平均荧光强度增强(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组的细胞胞内Aβ_(1-42)含量升高(P<0.05);给药后,与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞内Aβ_(1-42)含量显著降低(P<0.01),LGZGT含药血清以剂量依赖性的形式降低Aβ_(1-42)。结论:LGZGT对Aβ_(1-42)诱导的AS具有保护作用,还可促进Aβ的降解,其机制可能与减轻Aβ毒性,增强细胞活力,促进IDE、CTSD、CTSB的表达及恢复溶酶体的功能相关。

“补肾生髓”理念下龟鹿二仙胶干预AD患者VRS及炎症的临床研究

目的观察龟鹿二仙胶干预阿尔茨海默病(AD)Virchow-Robin腔(VRS)及炎症的效应机制。方法80例西医诊断为AD,中医诊断为肾虚髓空证的患者随机分成两组,每组40例。两组患者都睡前口服安理申,每次1片(5mg),在此基础上对照组给予安慰剂,治疗组采用龟鹿二仙胶治疗,疗程为60天。两组患者治疗前(第0天)、治疗后第31天及第61天分别进行头颅核磁共振成像(Nuclear Magnetic Resonance Imaging,MRI)检查,计数中脑、基底节区、岛叶深部白质、半卵圆中心VRS的数目,并测量其直径;此外,检测两组患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1(IL-1)。结果两组患者各项指标在第31天时候皆无变化,差异无统计学意义(P>0.05);第61天,两组患者各部位VRS数目较各自第0天无变化(P>0.05),组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05),而VRS直径、TNF-α、IL-6、IL-1,两组与治疗前比较皆有统计学差异(P<0.05,P<0.01),且组间差异亦有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论龟鹿二仙胶具有改善患者VRS直径及调节炎症的作用,此可能为其补肾生髓的作用机制之一。

苓桂术甘汤对阿尔茨海默病血脑屏障损伤的影响

目的:通过观察苓桂术甘汤(LG)对体外阿尔茨海默病(AD)病理状态下血脑屏障模型的影响,探讨其对AD血脑屏障损伤后修复的具体机制。方法:将50只雄性SPF级大鼠,随机分为5组,分别灌胃7 d,2次/d,LG高、中、低剂量组以4.8,2.4,1.2 g·kg^(-1),西药组以盐酸多奈哌齐0.5 mg·kg^(-1),正常组以等体积生理盐水灌胃,末次灌胃1 h后经腹主动脉取含药血清;以细胞共培养法构建AD体外血脑屏障损伤模型,实验分为正常组,模型组,LG高、中、低剂量组和盐酸多奈哌齐组,模型组加入β淀粉样蛋白1-42(Aβ;)100μL,终浓度为5μmol·L^(-1),LG高、中、低剂量组以及盐酸多奈哌齐组在模型组基础上分别加入10%含药血清。通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞存活率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组血脑屏障相关骨架蛋白跨膜密蛋白-5(Claudin-5),外周支架蛋白-1(ZO-1),闭合蛋白(Occludin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和Western blot检测LG高、中、低剂量组血脑屏障不同时间点Aβ转运蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达。结果:MTT结果分析显示,与正常组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和LG高剂量组细胞存活率明显增强(P<0.05);Western blot结果分析显示,与正常组比较,模型组骨架蛋白显著下调,MMP-2,MMP-9蛋白明显上调(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和LG高剂量骨架蛋白含量明显上调(P<0.05),MMP-2,9水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,仅LG中剂量组Claudin-5蛋白水平明显上调(P<0.05),MMP-2水平明显下调(P<0.05);ELISA结果分析显示,与正常组比较,模型组IL-1β,IL-6,TNF-α含量明显上调(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和LG高、中剂量组IL-1β,IL-6,TNF-α表达明显下调(P<0.05);PCR结果分析显示,与0 h比较,3 h时LRP-1表达明显上调,RAGE表达明显下调(P<0.05),6,12,24,36 h后LRP-1,RAGE表达逐渐和缓;Western blot结果分析显示,3 h时,与正常组比较,模型组LRP-1含量明显下调,RAGE含量明显上调(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和LG高剂量组LRP-1含量显著上调,RAGE含量明显下调(P<0.05)。结论:LG对AD体外血脑屏障损伤具有修复作用,其机制可能与抑制炎症因子和MMP-2,MMP-9表达、促进骨架蛋白表达并调节转运蛋白平衡相关。

三物白散含药血清通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β_(1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化

目的:基于转化生长因子-β/Smad(TGF-β/Smad)信号通路,体外研究三物白散含药血清对TGF-β_(1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法:SPF级3月龄雄性SD大鼠28只,随机分为空白组及三物白散低、中、高剂量组,每组7只,三物白散低、中、高剂量组分别按0.031 25、0.062 5、0.125 g·kg^(-1)·d^(-1)的剂量灌胃,空白组以等体积超纯水灌胃。每日1次,连续7 d。末次给药后45 min经腹主动脉取含药血清;细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测三物白散高剂量组含药血清对SGC-7901细胞活性的影响;镜下观察经TGF-β_(1)和三物白散含药血清处理后的细胞形态变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测经TGF-β_(1)诱导和三物白散低、中、高剂量组含药血清处理后SGC-7901细胞的迁移率和侵袭率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Snail、TGF-β_(1)、Smad3、磷酸化(p)-Smad3、Smad7蛋白的表达。结果:与空白组比较,10%、15%、20%三物白散高剂量组含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制SGC-7901细胞活性;与空白组比较,模型组细胞失去梭形形态,多数细胞变圆、变长;与模型组比较,各药物组细胞伪足减少,细胞变小且形态恢复正常;与空白组比较,模型组细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.01);与模型组比较,三物白散中、高剂量组处理SGC-7901细胞24 h后能显著抑制其迁移能力(P<0.01);三物白散低、中、高剂量组处理SGC-7901细胞48 h后均能显著抑制其迁移能力(P<0.01);与模型组比较,三物白散低、中、高组剂量组均能显著抑制其侵袭能力(P<0.01);与空白组比较,模型组E-cadherin及Smad7蛋白的表达水平显著降低(P<0.01),Snail、p-Smad3、TGF-β_(1)蛋白的表达水平显著升高(P<0.01),Smad3总蛋白水平不变;与模型组比较,三物白散高剂量组E-cadherin蛋白显著增加(P<0.01)、三物白散中剂量组有明显上升(P<0.05);Smad7蛋白三物白散中、高剂量组表达水平显著增加(P<0.01);三物白散中、高剂量组Snail蛋白表达水平显著降低(P<0.01);三物白散低、中、高组TGF-β_(1)、p-Smad3蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。三物白散含药血清可以有效地逆转TGF-β_(1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT,并可能通过TGF-β/Smad信号通路发挥作用。结论:三物白散能抑制TGF-β_(1)诱导的SGC-7901细胞EMT的发生,其机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。