抗心肌肥大多肽GCIP表达载体的构建

目的 化学合成DNA片段后利用基因工程技术 ,克隆入含有T7启动子的原核表达质粒。方法 采用分二段化学合成G蛋白竞争性抑制肽 (G proteincompetedinhibitionofpeptide ,GCIP)基因的方法 ,酶切后先定向克隆到pEGFP N1质粒中 ,再用XhoⅠ和SmaⅠ切下含完整基因的片段 ,插入XhoⅠ和SmaⅠ处理的pIVEX2 3 MCS质粒 ,构建能在EcoliBL2 1(DE3 )pLysE和RTS5 0 0系统中表达的质粒。经转化DH5α大肠杆菌 ,筛选出阳性转化子 ,并用酶切及测序鉴定。结果通过基因工程技术 ,构建了pIVEX2 3MCS GCIP表达质粒 ,经测序鉴定结果与设计的完全相符。

Gq蛋白竟争性抑制肽GCIP-27质粒载体的构建及表达

目的化学合成寡核苷酸片段克隆入pIVEX2.3质粒中,构建GCIP-27的原核表达载体并进行原核表达。方法化学合成GCIP-27的全基因序列,定向克隆到pIVEX2.3质粒中构建含有T7启动子的pIVEX2.3-GCIP27原核表达载体并酶切及测序鉴定;pIVEX2.3-GCIP27质粒转染E coli BL21(DE3)pLysE细菌,用IPTG诱导GCIP-27多肽的表达。结果成功构建了pIVEX2.3-GCIP27表达质粒,经测序鉴定结果与设计的完全相符;成功用BL21细菌表达了GCIP-27多肽,GCIP-27占细菌总蛋白的4.96%。结论本实验构建并表达了GCIP-27的重组质粒,为GCIP-27的大量原核表达奠定了基础。

炎症免疫刺激对孕鼠胚胎基因表达谱影响的研究

目的:探讨妊娠期大鼠经炎症免疫刺激后对胚胎基因表达谱的影响。方法:选取6只孕鼠。分别腹腔注射LPS及Zymosan后,取胚胎抽提总RNA,经纯化反转录等过程合成生物素标记的cRNA,经片断化后与Rat Genome 230 2.0 Array芯片杂交,读取芯片结果并进行分析。结果:LPS组有183个基因上调、270个基因表达下调,Zymosan组有144个基因表达上调、417个基因表达下调。有50个基因在上述两组中均表达上调,其中已知功能的有9个;有173个基因在上述两组中表达均下调,已知功能的有85个。结论:应用全基因组芯片筛选了孕鼠经炎症刺激后胚胎差异表达的基因,为进一步研究孕鼠经炎症刺激后仔鼠血压升高的机制提供了新的思路。

RGS蛋白及其在心肌功能中的调节作用

RGS(Regulators of G-protein signaling)是一种G蛋白信号转导系统的负性调节因子 .目前共发现有二十余种,大都含有一段长约120氨基酸残基的保留区(RGS域),这一区域具有GTP酶活性,其在结构上与酿酒酵母sst2基因以及线虫的egl-10基因同源.RGS的作用是直接与Gi或Gq的α亚单位结合,使活化状态的Giα或Gqα中的GTP酶活性升高,促使GTP迅速水解而终止Giα或Gqα的活性,达到调节G蛋白偶联受体信号转导的强度和持续时间的作用.并且由于RGS与Gα亚单位的结合时间长,故G βγ的游离态时间较长,表现出较弱的促进Gβγ信号作用,从多个方面调节G蛋白的信号转导.尽管此RGS域对于结合Gα、刺激GTP酶活性已经足够,但在体内其功能的完整发挥仍然需要这些蛋白质上的非RGS域部分的参与.

三七叶皂苷抗炎作用机理的实验研究

目的:研究三七叶皂苷(PnGL)对大鼠气囊滑膜炎的抗炎作用机理。方法:皮下注射角叉菜胶(Car)25mg?kg复制大鼠气囊滑膜炎模型,气囊灌洗液中白细胞数、蛋白含量、NO及TNF含量分别用试管稀释法、Lowry法、Rivanol法及酶联免疫吸附分析法进行。采用放免分析法进行气囊灌洗液中性粒细胞(Neu)内环磷酸腺苷(cAMP)含量的测定。结果:PnGL60,120,240mg.kg-1能剂量依赖性地升高中性粒细胞(Neu)内cAMP含量,抑制炎症介质肿瘤坏死因子(TNF)及一氧化氮(NO)水平的升高,显著降低灌洗液中白细胞数量及蛋白含量。相关分析显示,PnGL升高Neu内cAMP水平的作用与其降低TNF、NO含量的能力呈显著负相关。结论:升高Neu内cAMP水平及其抑制NO及TNF含量升高是PnGL发挥抗炎作用的重要分子机制。

气虚血瘀大鼠炎症免疫相关基因差异表达的研究

目的探讨气虚血瘀证的炎症免疫分子机理。方法12只大鼠随机分为气虚血瘀模型组和正常对照组。应用全基因芯片对气虚血瘀大鼠和正常大鼠进行全基因表达谱检测,分析与炎症免疫相关的差异表达基因。结果气虚血瘀模型组较正常组大鼠表达上调的基因有831个,已知功能的基因563个;表达下调的基因782个,已知功能的基因544个。在已知功能基因中,与炎症免疫反应相关的表达上调的基因50个,表达下调的基因17个。结论炎症免疫相关基因的差异表达揭示出气虚血瘀证与异常的炎症免疫反应密切相关。

壳聚糖胶原生物敷料的安全性研究

目的研究壳聚糖胶原生物敷料(chitosan-collagenbiologicaldressing,CCBD)的生物安全性。方法通过CCBDA、B原液兔皮肤刺激实验、角结膜刺激实验、肌肉刺激实验和细胞毒性实验研究CCBDA、B的生物安全性。结果CCBDA、B原液无皮肤、角结膜和肌肉刺激性,对角质形成细胞和成纤维细胞无毒性。结论CCBDA、B具良好生物安全性。

壳聚糖胶原生物敷料对深Ⅱ度烧伤创面EGF和bFGF表达的影响

目的研究壳聚糖胶原生物敷料(chitosan-collagenbiologicaldressing,CCBD)对大鼠深Ⅱ度烧伤创面EGF和bFGF表达的影响及意义。方法壳聚糖与鼠尾胶原分别按1:9和1:1配成敷料原液并制成CCBDA和CCBDB。以单纯胶原敷料组和自然愈合组作对照,测定伤后3、7、14、21d的创面愈合率、创面组织蛋白和羟脯氨酸含量,创面组织EGF、bFGF免疫组化染色并进行图象分析。结果CCBDA、B组各时相点的创面愈合率较自然愈合组高,CCBDB组伤后3d和7d时EGF和bFGF的表达高于自然愈合组。结论CCBD对大鼠深Ⅱ度烧伤创面有促愈合作用并呈剂量相关性,其促愈机制与使用CCBD后创面EGF和bFGF表达增强有关。

三七总皂苷抗大鼠心肌肥大作用

目的研究三七总皂苷(PNS)对体外培养大鼠心肌细胞肥大及在体大鼠心肌肥大的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素(Ang)刺激制备心肌细胞肥大模型,分别采用Lowry法、3H-亮氨酸掺入法和激光共聚焦显微镜测定细胞内蛋白质的量、蛋白质合成速率和游离钙荧光强度。ip去甲肾上腺素法诱导大鼠心肌肥大,计算心脏指数和左心室指数。结果与模型组相比,0.05、0.10、0.15g/LPNS可显著降低细胞内蛋白质的量和3H-亮氨酸掺入量,减弱细胞内Ca2+荧光信号。25、50、75mg/kgPNS可显著降低心肌肥大大鼠左心室指数。结论PNS对Ang诱导的大鼠心肌细胞肥大和去甲肾上腺素诱导的在体大鼠心肌肥大均有明显的抑制作用。

壳聚糖胶原生物敷料对深Ⅱ度烧伤创面脂质过氧化反应的影响及意义

目的研究壳聚糖胶原生物敷料(CCBD)对大鼠深Ⅱ度烧伤创面脂质过氧化反应的影响及在创面愈合中的意义。方法壳聚糖与鼠尾胶原分别按1:9和1:1配成敷料原液并制成CCBDA和CCBDB。以单纯胶原敷料组和自然愈合组作对照。结果CCBDA、B组各时相点创面愈合率较自然愈合组高;CCBDB组伤后3、7d超氧化物歧化酶(SOD)活性降低程度和丙二醛(MDA)含量升高程度小于其他各组。结论CCBD对大鼠深Ⅱ度烧伤创面有促愈合作用并呈剂量相关性,其促愈机制与使用CCBD后创面脂质过氧化反应程度减轻有关。

抑白升血糖浆对化疗小鼠造血功能和免疫功能的影响

目的 观察抑白升血糖浆 (YBSX)对环磷酰胺 (CTX)处理的小鼠造血功能和免疫功能的影响并确定其最佳给药方式。方法 将 YBSX按照单纯预防、单纯治疗和预防 +治疗 3种给药方式 ig给药 ,常规方法计数小鼠白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数 ,测定脾脂数 ;鸡红细胞吞噬实验测定巨噬细胞 (MΦ)吞噬率和吞噬指数 ;EL ISA法测定血清中肿瘤坏死因子 (TNF- α)含量。结果 YBSX对白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数、脾指数、巨噬细胞吞噬指数和 TNF-α含量都有不同程度的改善。结论 YBSX可改善受 CTX抑制小鼠的造血功能和免疫功能 。

壳聚糖DCX-16对术后腹膜粘连的防治作用

目的:探讨壳聚糖DCX-16对术后腹膜粘连的防治作用。方法:采用盲肠浆膜擦伤的方法建立大鼠腹膜粘连的动物模型。分别在创伤局部给予5 mL·kg-1的生理盐水、透明质酸钠(50 mg·kg-1)和壳聚糖DCX- 16(15,50,150,500 mg·kg-1),观察术后d 14腹膜粘连和切口愈合情况。选用最有效浓度的壳聚糖DCX-16, 比较其与生理盐水、透明质酸钠对大鼠术后d 3,7,14,21腹膜粘连形成的影响。结果:术后d 14对照组(用生理盐水)粘连发生率100％。粘连程度壳聚糖DCX-16各剂量组与对照组差异非常显著(P<0．01),与透明质酸钠组无显著差异(P>0．05)。取150 mg·kg-1壳聚糖DCX-16为最佳有效剂量,其可明显减轻大鼠术后 d 3创面出血和术后d 7,14,21时的腹膜粘连。结论:壳聚糖DCX-16可明显减少术后腹膜粘连的发生及严重程度。

“双主教学模式”在药剂学教学中的应用

药剂学是药学类专业学生的主干课程。"双主教学模式"既可发挥教师的主导作用,又能充分体现学生主体地位。本文从"双主教学模式"的角度,探索教学模式设计、学习环境创设、信息资源设计、自主学习设计和协作学习设计在药剂学教学中的应用。

《新药研究与评价》课程体系构建和实践

随着现代社会的发展和人类疾病谱的改变，人们对新药的需求也不断地增加。药品的特殊性决定了新药研究的过程是一项需要多学科、多部门密切协作才能完成的复杂的系统工程，需要严格遵循国家相关的法律法规，为人民提供安全有效的新药。

药理学教学病例素材的筛选与应用研究

药理学作为一门"桥梁”学科,在医学教育中具有十分重要的地位,但由于学科自身的特点,其内容相当庞杂,各章节、各药物之间缺乏紧密的联系.现阶段各层次药理学教材大同小异,差别仅在于药物作用机理的深浅,基本上都包括了50余大类,近120小类,700多种药物,每种药物又分别与多种临床病症相联系,都有其自身的作用特点;而在教学安排上, 药理学一般又安排在临床课甚至病理、病生的前期,学生对药物所涉及到的疾病相当陌生, 缺乏感性认识,不利于理解和记忆.这样,教员在授课过程中,就必不可少地需要一些病例材料进行辅助教学.但是,不同的教员具有不同的背景,临床知识水平很不平衡,甚至具有较为悬殊的差异,在教学病例材料的选择上随意性大,很不规范,容易出现偏差甚至错误 ,影响教学质量,还可能影响后续临床课程的学习.目前,随着高校教学体制的改革,教学时间、教学内容、教学方式的调整,这方面的矛盾显得尤为突出.为此我们针对基础药理学教学的需要,以现行药理学教材上重点药物为导向,以药物的临床作用、应用及不良反应为重点,从文献材料、附属医院病例中筛选出一些适宜药理学教学用的典型病例,并根据具体情况编撰一些信息量大、深度适宜、切合药理学重点知识点、符合教学目标的"病例”.这些病例,并不是一般意义上的完整病例,而是针对药理学教学特点和特定知识点而摘抄或设计的一些病例片断,在此基础上加以整理,成为一部方便教学双方的实用辅助资料,并在教学试用中取得了良好效果.

药剂学虚拟多媒体仿真实验室构建刍议

计算机作为现代科技最重要的技术手段，已经渗透到每一个学科。如何最大限度地应用计算机和信息技术，使学生能够更加有效地学习和掌握知识，是我们需要认真研究的课题。

N-乙酰-5-甲氧色胺的抗氧化应激作用及其对阿片类镇痛药依赖性的影响

目的观察N-乙酰-5-甲氧色胺的抗氧化应激作用及其对哌替啶依赖动物催促戒断症状的影响。方法以大鼠截肢结合50℃热水刺激建立创伤痛模型,采用硫代巴比妥酸法及黄嘌呤氧化酶法,观察创伤后脑组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化以及N-乙酰-5-甲氧色胺对其的影响;以连续递增给药建立哌替啶依赖小鼠模型,观察N-乙酰-5-甲氧色胺对哌替啶依赖动物戒断反应的影响。结果大鼠创伤后第3天,脑组织中MDA含量明显升高,SOD活性则显著降低。N-乙酰-5-甲氧色胺(30,60,120 mg.kg-1)腹腔注射能剂量依赖性降低脑组织中MDA含量、升高SOD活性。连续腹腔注射哌替啶7次,用纳洛酮催促后小鼠跳跃反应百分率达90%,N-乙酰-5-甲氧色胺2 d 7次给药累加剂量达840 mg.kg-1,小鼠未出现跳跃反应;N-乙酰-5-甲氧色胺(5,15,20 mg.kg-1)与哌替啶合用,能明显地抑制哌替啶依赖小鼠戒断跳跃反应(P<0.01),使小鼠跳跃反应百分率分别减少61.4%,72.8%,84.8%,且N-乙酰-5-甲氧色胺抗哌替啶依赖作用强度均有剂量相关性。结论N-乙酰-5-甲氧色胺对创伤痛大鼠具有良好的抗氧化作用;N-乙酰-5-甲氧色胺无明显身体依赖性,且在一定的剂量范围内,具有良好的抗哌替啶依赖作用。

抑白生血糖浆对HL-60细胞增殖分化的影响

目的观察抑白升血糖浆(YBSX)含药血清对白血病HL-60细胞增殖分化的影响。方法正常大鼠ig给予YBSX后取血制备含药血清。体外传代培养HL-60细胞,观察测定细胞生长情况。通过NBT还原试验、酸性磷酸酶(ACP)和非特异性酯酶(α-NAE)活性测定观察细胞分化情况。利用同位素掺入方法检测细胞内DNA和蛋白质合成速率。结果YBSX含药血清对第一代HL-60细胞增殖影响不明显;对第二代、第三代细胞生长具有明显抑制作用,细胞增殖率呈进行性下降。YBSX含药血清明显升高HL-60细胞NBT还原率和α-NAE阳性细胞数,增强ACP活性(P<0.01);降低细胞内3H-TdR和3H-Leu掺入量。结论YBSX可抑制HL-60细胞增殖,诱导其向成熟细胞分化。