H6亚型禽流感病毒套式 RT-PCR 检测方法的建立

为建立一种H6亚型禽流感病毒(AIV)的套式RT-PCR检测方法,根据GenBank中H6亚型AIV HA基因序列,设计了4条特异性引物,优化反应条件,并对所建立的方法进行特异性和敏感性的检验,用该法对154份活禽市场样品进行检测。结果表明,所建立的套式RT-PCR方法对其他常见禽病病原体无扩增;对H6亚型AIV的最小检测限为1×102拷贝/μL,灵敏度比常规RT-PCR方法高100倍;154份样品的检测结果与病毒分离一致。所建立的H6亚型AIV套式RT-PCR检测方法具有特异性强和灵敏度高的特点。

鸽瘟油乳剂灭活疫苗的研制

[目的]为了有效控制鸽瘟的发生。[方法]利用分离到的鸽I型副粘病毒研制了油乳剂灭活疫苗。[结果]该疫苗使用安全,无不良反应;疫苗注射后1周就可检测到HI抗体,3周后HI抗体水平达到高峰,并可持续6个月;从免疫保护试验看,免疫后14 d,用强毒攻击,保护率达100%,而对照组,10只鸽全部死亡。[结论]应用鸽瘟油乳剂灭活疫苗能有效预防鸽瘟,且比使用鸡新城疫疫苗效果更好。

H6亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性分析

为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集尿囊液进行HA和HI试验,结果显示这7株只与H6亚型AIV的阳性血清发生反应,产生血凝抑制现象,初步鉴定为H6亚型AIV。通过HA和NA基因的克隆与测序鉴定,进一步确定为H6亚型AIV,与NA基因存在5种组合,包括H6N1、H6N2、H6N5、H6N6和H6N8。鸡致病性试验表明分离株可感染但不致死SPF鸡,并通过咽喉和泄殖腔排毒,结合HA裂解位点附近的氨基酸序列,表明所分离到的7株H6亚型AIV符合LPAIV的特征。

GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究促性腺激素释放激素(GnRH)在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTureTM二步法检测5头青年摩杂一代水牛下丘脑、垂体和卵巢中GnRH的分布情况,研究GnRH在下丘脑、垂体及卵巢的分布上的联系,进而了解GnRH在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放的途径。[结果]GnRH存在于青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节。青年摩杂一代水牛下丘脑中各主要核团都有GnRH免疫阳性神经元的分布,尤其以视上核、视前核、室旁核分布较多。对于垂体,GnRH免疫阳性产物只存在于青年摩杂一代水牛的腺垂体中。青年摩杂一代水牛卵巢中生殖上皮细胞、颗粒细胞和黄体细胞发现有GnRH免疫阳性产物。[结论]为进一步研究GnRH在生殖中的生理和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到参考指导作用。

哺乳动物促性腺激素释放激素(GnRH)研究进展

从基因结构、合成代谢、神经元分布、生物学功能及生产应用等方面对哺乳动物促性腺激素释放激素(GnRH)进行简要综述。

南宁市某奶牛养殖场布鲁氏菌病感染情况调查与防控措施制定

布鲁氏菌病可广泛感染家畜、野生动物和人类,是一种广泛分布的人畜共患病,在全球造成巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。广西南宁市原来是非疫区,但2000年后由于引种不慎,造成布鲁氏菌病的传入。文章对南宁市某奶牛场布鲁氏菌病感染情况进行调查,同时提出针对性的防控措施。

笼养蛋鸡关节炎病的诊断

为探索引起广西某蛋鸡场的鸡只在产蛋前出现关节肿胀、跛行、不愿走动、卧地不起等症状的病因,本试验对该发病鸡群进行病原的分离鉴定、16S rRNA基因序列分析、分离株药物敏感性试验,对滑液囊支原体阳性样品进行vlhA基因序列测定、系统进化树分析。结果显示,病变主要发生在跗关节,可见关节腔内有黄色干酪样物及脓液;从病变关节处分离到葡萄球菌,经鉴定其为金黄色葡萄球菌;滑液囊支原体检测为阳性,其与参考株的vlhA基因核苷酸相似性为94%~98%,与疫苗株CP21129遗传距离远,不属于同一个分支。结果表明该鸡群发病原因为滑液囊支原体和葡萄球菌混合感染引起。

鸡源吉韦沙门菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为研究种鸡不同养殖环节中吉韦沙门菌(S.give)的流行情况及其生物学特性,本试验对某种鸡场内不同生产环节S.give进行了分离鉴定、耐药性与毒力基因的检测及菌株亲缘关系的分析。结果显示:在孵化后期死胚以及1日龄残次鸡的内脏器官中分离到8株S.give,并携带stn、fimA、virK、invA、sseL、mgtC、siiE、sopB等多种毒力基因;同时,它们对磺胺类、萘啶酸及氨苄西林等抗生素表现耐药,对头孢他啶、头孢曲松、四环素、环丙沙星等抗生素表现敏感,但均呈现为多重耐药表型;基因分型结果显示,8株分离株分属于5种不同的基因型,表明S.give污染来源的多样性。试验结果表明,应根据种鸡场具有多重耐药特点并携带大量毒力基因的S.give的流行特征,加强种鸡场的生物安全措施,防控S.give的污染,以降低动物源性沙门菌的感染而导致的食品安全风险。

食源性沙门氏菌分离株致病性研究和毒力相关基因检测

为研究零售鲜肉源沙门氏菌(Salmonella)优势血清型分离株的致病性及相关毒力基因的相关性,本研究分别取4种优势血清型S.derby、S.agona、S.enteritidis、S.typhimurium沙门氏菌分离株对SPF级昆明小鼠进行致病性实验,采用改良寇氏法计算半数致死量,判断4种血清型沙门氏菌的毒力,并通过聚合酶链式反应检测实验菌株中9种毒力相关基因的分布情况并分析其相关性。结果表明,4种不同血清型的沙门氏菌分离株对小鼠均有40%~70%的致死率,S.enteritidis、S.agona、S.derby对昆明小鼠的致病力相似,S.typhimurium较弱,且发现致病力的强弱与毒力岛SPI-2中的sse L基因密切相关。

H6亚型禽流感病毒RT-LAMP检测方法的建立

建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物,以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,对反应条件和反应体系进行优化。结果表明该方法的特异性良好,对其他呼吸道病原体均无扩增反应。该方法灵敏度高,最低可检测到H6亚型AIV RNA为0.01 pg,该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的H6亚型AIV检测方法。

H6亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本研究旨在建立一种快速、特异、敏感的H6亚型禽流感病毒(AIV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。针对H6亚型AIV的血凝素(HA)基因序列保守区设计1对引物,并优化反应条件。结果表明,该方法的最低检测限为1.07×101拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出1 000倍;扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(80.81±0.08)℃,组内变异系数为0.08%～0.99%,组间变异系数为1.85%,可重复性好;对H1、H3、H5、H7、H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒等其他呼吸道病原体无扩增;检测快速,从样本处理到报告结果仅需3.5 h。

利用RT-LAMP可视化检测技术检测H1亚型禽流感病毒及N1、N2亚型的分型

为直接根据颜色变化进行可视化检测H1亚型、N1亚型、N2亚型禽流感病毒(AIV),根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立针对H1亚型AIV及特异性鉴定N1、N2亚型的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中的AIV基因序列,设计了三套分别针对H1亚型AIV-HA基因及N1、N2亚型AIV-NA基因的特异性简并引物,并优化反应条件和体系。结果表明建立的检测方法对其它亚型AIV及禽呼吸道病原体无交叉扩增反应并能特异性地检测N1、N2亚型AIV,灵敏度优于传统的RT-PCR方法。整个反应在常规水浴中50min就可完成,反应结束后不需打开反应管盖,可根据反应液的颜色变化对结果直接进行判定。120份临床样品用建立的RT-LAMP方法检测到14份H1N1亚型AIV、8份H1N2亚型AIV,结果与病毒分离结果相符。本研究建立的三种RT-LAMP可视化检测技术特异、灵敏、快速、操作和结果判定简便,适合在基层进行H1亚型AIV的快速检测及N1、N2亚型AIV的分型。

新城疫病毒强弱毒株LAMP鉴别检测方法的建立

根据新城疫病毒(NDV)融合基因(F基因)的8个区域设计能区分强、弱毒株的3套特异性引物,以样品的cDNA为模板,利用Bst DNA聚合酶,在62℃恒温下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定结果,建立了能鉴别检测NDV强、弱毒株的环介导等温扩增方法。该方法可区别不同基因型的NDV强、弱毒株,而对常见鸡源病毒均无扩增反应。该方法对NDV RNA的最小检测限为0.01pg,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍。该方法无需特殊仪器,只需在常规水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的NDV强、弱毒株鉴别检测方法。