β和γ射线放射性皮肤损伤动物模型的初步研究

采用直线加速器发射的β射线和60Co源γ射线分别照射动物局部组织,以建立放射性皮肤损伤动物模型。观察了局部组织生化代谢指标的改变及组织形态变化,论证两类放射性皮肤损伤动物模型的可行性并用其对放射性皮肤损伤产生的分子机制进行探讨。实验结果表明:(1)γ或β射线都能引起局部皮肤损伤,并在生化代谢指标方面有诸多相似之处;(2)初步建立的两类放射性皮肤损伤动物模型有一定的可行性。

高能电子线辐射损伤对TGF-β_1表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响

探讨了高能电子线辐射损伤后Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的改变情况及TGF - β1对其的调控作用。采用电子直线加速器照射制作动物的辐射损伤模型 ,对NIH 3T3细胞进行照射 ,观察胶原总量及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的改变 ;测定损伤后细胞因子TGF - β1表达的变化情况。结果显示 ,损伤后胶原总量变化不大 ,而Ⅰ型胶原含量下降 ,Ⅲ型胶原含量上升 ;损伤后TGF - β1表达量增加。结果提示 ,放射性皮肤损伤引起了胶原代谢的变化 ,损伤后胶原代谢的调控机制中 ,TGF -

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在SGC7901细胞中同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊(英文)

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)在高尔基体中催化粘蛋白型O-糖基化的第一步.首先进行了人ppGalNAcT2多克隆抗体的制备和鉴定,进一步通过对分离的亚细胞结构进行蛋白质印迹分析,免疫细胞化学后共聚焦显微镜观察此抗体和两个高尔基体标记GS28(顺面高尔基体的分子标志)和TGN38(反面高尔基体的分子标志)来研究ppGalNAcT2在SGC7901细胞株中的亚细胞定位.结果表明:约有60%的ppGalNAcT2信号和GS28共定位,大约36%的ppGalNAcT2信号和TGN38共定位.约有34%的TGN38和ppGalNAcT2信号重叠,而约38%的反面高尔基体标志和ppGalNAcT2重叠.结论是:在SGC7901中,ppGalNAcT2同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊中,实验证实了在高尔基体中进行粘蛋白型O-糖基化的起始反应.

卓越医师班生物化学教学改革探讨

总结卓越医师班教学中生物化学的教学改革,主要方法有:整合至新的模块教学课程体系,原教学内容基本整合进"医学基础Ⅰ"和"医学基础Ⅱ"模块,"肝胆生物化学"内容融入"消化系统"模块;变"总结性评价"为"形成性评价",采用"过程化"考核方式,大致分为平时考核和期终考试;坚持中英文双语教学;有效运用PBL教学手段,提出问题、查阅文献、小组内讨论思考、集体讨论思考、教师总结归纳;实验教学中减少验证性实验,综合性实验占主导地位。

电子射线局部辐照大鼠Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及基质金属蛋白酶改变的研究

目的探讨电子射线(模拟β射线)局部辐照大鼠致放射损伤后胶原表达及相关基质金属蛋白酶(MMPs)变化的情况。方法采用直线加速器局部照射制作SD大鼠的辐射损伤模型,观察Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及MMP1、MMP2、MMP9表达的变化情况。结果β射线照射引起的皮肤损伤可以引起胶原含量和分型的改变,MMP-1有不同程度的提高,MMP2与MMP9的表达随辐射剂量的增加,由强变弱再上升变强。结论β射线照射皮肤损伤引起的创面难愈合可能与胶原含量和结构的改变相关,其又与胶原的降解酶MMP1活性增强有关；MMP2与MMP9参加基底膜的溶解、血管形成和坏死组织的清除,有助于创面的重建,促进创面的愈合。

β射线放射损伤后胶原代谢的变化

目的 探讨 β射线放射损伤后胶原代谢的改变情况。 方法 采用直线加速器照射制作动物的β射线损伤模型 ,同时对NIH 3T3细胞进行β射线外照射 ,观察胶原总量及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的改变 ;观察胶原降解酶MMPs- 1活性变化 ;同时测定损伤后细胞因子TGF - β1、IL - 6的变化情况。结果 β射线损伤后胶原总量变化不大 ,而Ⅰ型胶原含量下降 ,Ⅲ型胶原含量上升 ;MMPs- 1活性上升 ;TGF - β1、IL - 6表达量增加。结论 胶原代谢的变化在放射性皮肤损伤中起关键作用 ,TGF - β1、IL -

电子直线加速器照射对NIH3T3细胞的细胞周期及凋亡的影响

目的 探讨电子直线加速器照射对细胞周期及细胞凋亡的影响。方法 采用直线加速器对NIH 3T3细胞进行照射 ,观察细胞周期及细胞凋亡的改变情况 ;同时测定损伤前后p5 3蛋白的表达情况。结果 照射后细胞凋亡数增加 ,p5 3蛋白表达量上升。 结论 电子直线加速器照射损伤可诱导细胞凋亡。

β射线对NIH3T3成纤维细胞细胞周期的影响及牛磺酸的干预作用

目的:观察β射线对NIH3T3成纤维细胞周期的影响,探讨β放射损伤的机制及牛磺酸(taurine)的辐射防护作用.方法:以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,加药组分别为(50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)选择15 Gy照射剂量,采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期率.结果:β辐射后细胞发生G2期阻滞,且与照射剂量呈正相关(P≤0.01).在0～15 Gy剂量范围内,β辐照12 h后未观察到细胞发生凋亡.加入牛磺酸后,G2期受阻现象得到缓和,G2/M期百分率与药物剂量呈负相关(P≤0.01).结论:β辐射后NIH3T3细胞属于G2期延迟细胞,牛磺酸可通过一定机制使受损的细胞不能通过G1期,从而有助于加强对细胞受损DNA的修复,起到辐射防护的作用.

B7-H3单抗交联作用对Mo-DC体外生物学功能的影响

探讨B7-H3分子对人外周血单核细胞来源树突状细胞(Mo-DC)体外成熟和生物学功能的影响。采用常规方法从健康人外周血单核细胞诱导DC,在诱导过程中,加入B7-H3单抗21D4共培养,经流式细胞术检测Mo-DC上B7-H3分子和其他共刺激分子的表达,ELISA试剂盒检测培养上清中细胞因子IL-10和IFN-γ的分泌量,并采用3H-TdR掺入法测定T细胞的增殖。结果:B7-H3分子在未成熟和成熟Mo-DC上均有高水平表达,抗人B7-H3单抗21D4能上调Mo-DC表面CD80、CD86和CD83的表达,提高Mo-DC的共刺激能力,促进T细胞的体外增殖,并能显著促进T细胞分泌IL-10。由此表明,B7-H3单抗21D4交联作用可以促进Mo-DC体外成熟,上调其共刺激T细胞的能力。

人共信号分子HVEM在外周血PBMC表达特性及其对T细胞的生物学作用

HVEM既可作为受体与LIGHT作用传递正性共刺激信号,又能作为配体作用于BTLA介导负性共抑制信号。为深入探讨HVEM对T细胞复杂而又独特的调控作用,本文研究了HVEM在免疫细胞上的表达特性,初步探讨了T细胞表达的HVEM分子所介导的生物学作用。采用LPS刺激人新鲜PBMC,以及PHA或PMA/IM刺激活化T细胞;间接免疫荧光标记和流式细胞术检测HVEM表达;MTT法分析T细胞增殖作用。结果显示,HVEM在不同条件刺激活化的T细胞表面均呈现先上调后下调表达;T细胞增殖试验表明,基因转染细胞L929/LIGHT能够明显促进T细胞的增殖及IL-2和IFN-γ的分泌,而以抗人BTLA单抗在一定程度上模拟HVEM所介导的BTLA/HVEM信号能够明显抑制T细胞增殖作用及细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-10的产生。

可溶性B7-H3(sB7-H3)在急性白血病中的检测及临床意义

目的:检测sB7-H3在急性白血病病人脑脊液中的不同表达,以及分析该分子的表达与急性白血病的亚型的相关性。方法:采用ELISA的方法来检测sB7-H3在176位白血病病人脑脊液中的表达。依据国际公认的FAB(French-Amer-ican-British)分类系统将急性白血病病人分型。结果:sB7-H3在急性淋系白血病与急性髓系白血病中的表达差异显著(P=0.0381),这与人白血病细胞株的检测结果一致;在急性淋系白血病的亚型中,sB7-H3的表达没有显著性差异;在急性髓系白血病的亚型中,sB7-H3的表达在M3与M5和M4与M5之间存在显著性差异(分别为P=0.024 3和P=0.022 3)。结论:sB7-H3的表达与白血病的分型具有一定的相关性,同时也进一步证实B7-H3参与了人体免疫平衡的调节,可能会为今后急性白血病的临床诊断提供依据。

医学院生物化学双语教学的初探

生物化学是一门前沿学科,发展迅速。生物化学课程的双语教学已成为新世纪医学教育改革的重要内容。论文结合生物化学课程的特点,提出双语教学的三个决定因素:一支高质量的双语教师队伍、一本合适的国外原版教材和一套灵活多变的双语教学模式。

糖基化与病毒

糖类作为一类重要的生物分子其功能多种多样。而病毒这类微生物的感染大多数是由糖链介导的。以HIV、SARS、HBV、流感病毒为实例,介绍了糖基化在病毒蛋白的折叠运输、病毒的感染中的作用。

南亚班医学生物化学教学的体会

在承担南亚班留学生生物化学教学中,积极探索教学模式的建立。通过认真进行课前准备、采用灵活多样的课堂教学、加强和留学生的交流及探索有效的复习考试制度等,使留学生生物化学教学收到良好的效果。

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

形成性评价对医学生物化学理论教学的启示

生物化学是医学教育中一门重要的专业基础课程,其内容相对枯燥,且考核形式多采用期末集中考试为主。提高学生的学习兴趣和生物化学的教学效果迫在眉睫,而形成性评价的发展为生物化学的理论教学改革提供了一个新的方向,采用了"平时理论知识考核+期末理论知识考核"相结合的综合评价体系,充分调动了教师教学中的主动性、创造性和学生学习的主动性、积极性,有效提高了医学生物化学的教学效果。

人4IgB7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

为获得人4IgB7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用,采用PCR技术分别从pMD18-T/4IgB7-H3和pMD18-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出人4IgB7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因,通过RT-PCR技术插入逆转录病毒载体pGEZ-Term,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体经脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清反复感染L929细胞,利用Zeocin筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞经无血清培养后,收集的上清用Dot blot检测,超滤浓缩并经Protein G柱纯化,再用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以4IgB7-H3-Fc蛋白检测活化T细胞表面未知受体的表达,通过MTT方法分析4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用。结果显示,成功地构建了pEGZ-Term/4IgB7-H3-Fc重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc蛋白的L929基因转染细胞株;纯化后的4IgB7-H3-Fc蛋白能够与活化T细胞表面结合,并对T细胞有显著的促增殖作用。为探讨人4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用和寻找其未知受体奠定良好的物质基础。

灵芝多糖对γ射线照射后NIH3T3成纤维细胞细胞周期及细胞增殖的影响

目的 探讨γ射线对成纤维细胞细胞周期及增殖的影响 ,以及从细胞水平探讨灵芝多糖的抗辐射作用。方法 加不同剂量灵芝多糖的NIH3T3细胞在60 Coγ射线 15Gy照射 12h后收集 ,以流式细胞仪检测细胞各周期百分率及凋亡率。结果 照射剂量为 15Gy阳性对照细胞组G0 ～G1期细胞数占细胞总数的 5 2 .76 % ,与阴性对照组(90 .0 9% )对比 ,P <0 .0 1;加药剂量 5 0mg/L组、10 0mg/L组、15 0mg/L组的G0 ～G1期细胞数分别占细胞总数6 6 .17%、71.73 %、76 .1% ,与阳性对照组对比 ,5 0mg/L组为P <0 .0 5 ,10 0mg/L组和 15 0mg/L组P <0 .0 1有很显著性差异。阴性对照组细胞凋亡率 0 .4% ,照射后各组细胞凋亡率均为 0。结论 15Gy60 Coγ射线照射促进NIH3T3细胞增殖 ,0～ 15Gy照射后 12h内不能促进细胞凋亡 ;加不同剂量灵芝多糖后均对细胞增殖有抑制作用 ,从而使受损细胞不能增殖 。