hBcl-2基因转染对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究hBcl-2基因转染对大鼠肝脏抗缺血再灌注损伤的效应,并探讨其减轻移植肝缺血再灌注损伤的可行性。方法(1)同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Adv-EGFP、Adv-Bcl-2,转染293细胞并包装成腺病毒颗粒后大量扩增和纯化。同法构建空载体病毒质粒;(2)雄性SD大鼠,随机分为Adv-Bcl-2转染组、Adv-EGFP转染组、缺血再灌注组、假手术对照组,以两袖套法建立同种异体肝移植模型。转染组经门静脉灌注转染重组腺病毒Adv-Bcl-2或Adv-EGFP;缺血再灌注组、假手术对照组不予任何处理。实时定量PCR和Western blotting检测各组肝组织bcl-2mRNA和蛋白表达变化;门静脉血流恢复后第0、60及180min三个时间点测定受体血清AST、LDH、MDA含量。组织切片检测肝细胞形态改变。结果 Adv-Bcl-2转染组bcl-2mRNA和蛋白表达水平较Adv-EGFP转染组和对照组明显增高(P<0.01);Adv-Bcl-2转染组中血清AST、LDH含量明显低于Adv-EGFP转染组和缺血再灌注组。Adv-Bcl-2组血清MDA水平明显低于缺血再灌注组和Adv-EGFP组(P<0.01)。与假手术组比较,Adv-Bcl-2处理组HE染色见少量肝细胞水肿和空泡变性,未见片状或点状坏死等。缺血再灌注组和Adv-EGFP组HE染色镜下观察可见小叶结构破坏、肝细胞弥漫不同程度水样变性、体积明显增大、细胞间边界模糊,还可见大量细胞出现脂肪变性及少量碎片状坏死。结论 Adv-Bcl-2转染能通过诱导bcl-2基因表达减轻移植肝缺血再灌注损伤。