实时荧光定量PCR技术在湖南油菜根肿病菌检测中的应用

为完善湖南油菜根肿病的监测预警体系,分析油菜根肿病的发生与芸薹根肿菌休眠孢子量的关系,防止湖南油菜根肿病进一步蔓延。本研究依据芸薹根肿菌ITS序列设计了一对特异性引物,通过制备标准质粒构建了快速、精准的实时荧光定量PCR检测方法。其检测灵敏度为3×10^(-10)μg/μL,比常规PCR高100倍;利用建立的方法检测了来自湖南各地土壤样品中芸薹根肿菌的休眠孢子数量,64份土样中的休眠孢子含量基本大于104个/g,所检测的土样中孢子含量最高为2.22×10^(7)个/g。据实地调查,当土壤中休眠孢子数量大于104个/g时,油菜发生根肿病的风险较大,休眠孢子含量较高的田块其发病程度也较为严重。结果表明,建立的实时荧光定量PCR检测方法能对油菜根肿病进行早期诊断,为湖南油菜根肿病发生的监测预警提供有效技术参考。

1株烟草青枯病拮抗内生细菌的分离及鉴定

为了筛选具有生防价值的拮抗烟草青枯雷尔氏菌的内生细菌,从湖南长沙、永州、郴州烟草青枯病发病区的健康烟株采集茎秆,采用稀释平板分离法获得150个内生菌株。抑菌结果表明,21个内生菌株对烟草青枯雷尔氏菌2316菌株有拮抗效果,占总菌株数的14.0%。拮抗菌株中,F1菌株24 h对烟草青枯雷尔氏菌株2316抑菌圈直径达6.5 mm,其抗菌谱研究表明,该菌株对辣椒白绢病菌等5种植物病原真菌和柑橘溃疡病菌等5种病原细菌的生长均有抑制作用。采用形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列系统发育分析,F1菌株为莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。

Motic数码显微互动系统在普通植物病理学实验教学中的应用

数码显微互动系统是近年来应用的先进现代化教学设备,可应用于多学科实验教学和科学研究。在普通植物病理实验教学过程中,采用Motic数码显微互动系统和多媒体技术相结合的方式将抽象难懂的植物病原学知识具体化、形象化,让课堂内容变得直观、生动,促进了普通植物病理学实验教学互动效果,调动了学生自主学习植物病理学的兴趣,提高了教学质量和教学效率。

水稻纹枯病菌拮抗菌CZB40的筛选、鉴定及其发酵条件优化

为获得对水稻纹枯病有生防效果的拮抗放线菌，以水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani ）为指示菌，从湖南郴州天鹅山风景区土样中分离筛选出5株拮抗放线菌株，其中菌株 CZB40无菌滤液的5倍稀释液对指示菌菌丝生长抑制率高达90.45%，能使菌核菌丝萌发指数降低56.30%，而且能显著抑制菌核的形成。经形态观察、培养性状、生理生化鉴定，并结合16S rDNA 序列分析，将 CZB40菌株鉴定为极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus ）。抗菌谱研究表明，该菌株对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea ）、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola ）、辣椒疫霉病菌（Phytoph-thora capsici ）、草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea ）和辣椒白绢病菌（Sclerotium rolfsii ）都有拮抗作用，抑菌率达27.94%～85.71%。通过单因子变量法和均匀设计法对菌株 CZB40进行发酵条件研究。结果表明，其最佳的发酵条件为：玉米粉25 g/L、酵母粉5 g/L、MgSO40.2 g/L、NaCl 0.8 g/L、K2 HPO40.4 g、水1000 mL、29℃、pH 6.0。经优化后，菌株 CZB40无菌滤液的10倍稀释液对水稻纹枯菌丝生长抑制率最高，达到94.85%，比优化前明显提高。该研究结果为水稻纹枯病的生物防治提供科学依据。

土壤放线菌生防活性物质的研究进展

放线菌是一类有着广泛实际用途的微生物资源,从土壤放线菌的杀菌活性、除草活性、杀虫、杀螨活性等方面对土壤放线菌生防活性物质研究进行了综述。

油菜菌核病菌拮抗放线菌HPS02的分离、鉴定及其代谢产物性质研究

为控制油菜菌核病在油菜生产上的扩散,挖掘该病的生防资源,以油菜菌核病菌为指示菌,从湖南怀化收集的土样中分离出4株拮抗放线菌株。其中菌株HPS02的抑菌效果最好,无菌发酵液对油菜菌核病菌的菌丝生长抑制率高达91.04%。经菌株培养性状、形态观察、生理生化鉴定,并结合16SrDNA序列分析,将该菌株鉴定为阿布拉链霉菌(Streptomyces aburaviensis)。抗菌谱研究表明,该菌株对多种植物病原菌都有拮抗作用。发酵液稳定性结果表明,该菌株发酵液对酸碱较为稳定,对温度、紫外线较为敏感。通过硫酸铵沉淀发酵液,其沉淀的抑菌活性与发酵原液一致。经4种不同有机试剂萃取后,萃余相的抑菌活性与原发酵液的抑菌活性相差很小。该研究结果为油菜菌核病的生物防治提供科学依据。

一株朝鲜蓟内生菌降解苯酚初步研究

旨在筛选对苯酚耐受力较高的降解菌,获得降解苯酚的生物材料。本研究采用苯酚降解菌富集、分离技术从朝鲜蓟分离筛选到一株植物内生细菌菌株CXJ-1。经形态观察、生理生化鉴定及16SrDNA序列分析确定其种属,并采用4-氨基安替比林分光光度法,测定CXJ-1菌株对不同浓度苯酚的降解率。结果发现,CXJ-1与土生拉乌尔菌(Raoultellaterrigena)(AB680714.1)16SrDNA保守性片段有100%的同源性,可以将该菌株鉴定为土生拉乌尔菌(R.terrigena)。该菌株对苯酚的最高耐受浓度达2500mg/L,当苯酚浓度为1500mg/L时,菌株CXJ-1在42h内能完全降解。本研究结果表明:菌株CXJ-1对由于农药的大量使用而导致苯酚残留的土壤及污水的处理具有较好的应用前景。

《普通植物病理学》实践教学改革初探

本文介绍了动植物检疫专业普通植物病理学课程实验在内容设置、教学方法和实践环节等方面进行的改革,并对实验教学环节中存在的一些主要问题提出了相应对策及建议。

生物安全专业人才培养模式及课程体系设置的探讨

生物安全专业是2005年新增本科专业,该专业的建设尚处于起步阶段,湖南农业大学生物安全科技学院建立了生物安全专业人才培养模式及课程体系,并在实践过程中进行不断完善。

植物病虫害标本建设探讨——以湖南农业大学为例

植物病虫害标本建设对于提高实验教学效果具有不可或缺的作用。以湖南农业大学为例,从标本来源、标本制作、标本保存环境及保存方法等方面分析了实验室植物病虫害标本建设现状:近年来,由于病虫实验班次和人次增加,课堂病虫害标本损耗量加大,标本来源减少,标本制作、标本保存环境尚欠完善,导致标本易褪色、损坏和霉变虫蛀。提出应利用教学实习和科研机会,采集制作标本,以增加标本来源;采用硫酸铜亚硫酸浸泡法保存叶片标本,用铜离子液处理法保存绿色标本等新方法来改进保存方法和改善保存环境,并应尽量利用标本室资源,实现标本资源共享。

一株辣椒青枯病菌拮抗内生细菌的筛选鉴定与发酵条件优化

【目的】筛选对辣椒青枯病菌生防效果较好的内生细菌,丰富辣椒青枯病的生物防治菌种资源,为生防制剂的研发生产及进行大田生物防治提供理论依据。【方法】在湖南长沙青枯病发病区采集健康的辣椒植株样品,通过平板稀释分离和划线纯化方法获得内生细菌后采用琼脂扩散法进行拮抗作用测定,筛选出拮抗青枯病菌效果较好的内生细菌,然后通过菌体的形态结构观察、生理生化特性试验及16S r DNA序列同源性分析,对筛选出的细菌进行鉴定,采用正交试验对其发酵条件进行优化试验。【结果】筛选出一株对青枯病菌拮抗作用效果好的内生细菌L009,通过对其形态学、生理生化特性鉴定和16S r DNA序列的系统发育鉴定,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过正交试验,确定该菌株的最佳发酵条件为:玉米淀粉8%、豆饼粉6%、Na Cl 0.5%、Ca CO30.5%、K2HPO40.08%、p H 7.0、72h、28℃、180 r/min转速。【结论】L009菌株对辣椒青枯病菌具有较好的拮抗作用,具有作为生防制剂的潜力。

油菜菌核病生物防治研究进展

从利用生防细菌(根际促生菌、植物内生细菌、海洋细菌和土壤细菌)、生防放线菌、生防真菌及其他生防因子(植物提取产物、转基因植物)等方面对油菜菌核病的生物防治研究进行了综述。

湖南油菜根肿病发生情况与防治对策

为了有效防治油菜根肿病,采用询问、实地查看、随机五点取样等方法,对湖南油菜主栽区2017年至2021年的油菜根肿病发病情况进行了调查,对发病原因进行了分析并提出了综合防治对策。结果表明:油菜根肿病主要集中在怀化地区和常德地区大发生,以沅陵县、溆浦县和临澧县发病较严重;发病原因主要是土壤偏酸性、病区冬季气温高、河流导致病害蔓延、轮作方式有利于病原菌的积累和农机具跨区作业。综合防治对策主要是加强病害检疫,选育抗病品种,优化农艺措施以及物理、化学和生物防治。

油菜根肿病抗病资源研究进展

根肿病是原生动物界根肿菌门根肿菌属芸薹根肿菌侵染引起,并专门为害十字花科作物的一种传染性强的土传病害。近年来,我国油菜的安全生产受到根肿病的严重威胁。基于此,介绍了芸薹根肿菌的生物学特性、分类地位及国际上通用的一些生理小种鉴定方法,并在油菜根肿病防治、油菜抗根肿病资源与遗传育种等方面作了研究进展总结。

植物内生放线菌应用研究进展

内生放线菌指存在于健康植物体内,产生系列活性物质并能与宿主植物共同生活的放线菌菌落。介绍了植物内生放线菌在生物防治上的研究进展。

西方现代舞与中国原生态舞蹈比较——以舞蹈《前进吧,奴隶》和舞剧《云南映象》为例

西方表现派现代舞和我国的原生态舞蹈在产生的时代背景,人文思想,舞蹈形态等方面存在异同。二者在追求真、善、美的人文思想的同时,也使人们对现实舞蹈的发展提出了思考。"现代舞之母"伊莎多拉·邓肯创作灵感来自古希腊的文化,因她崇尚自由与自然的精神,注重对舞蹈生命的体现,创造了自己舞蹈形式,因反对模仿,所以在教学上要求学生能自创动作,从而表现出了一种注重个人感觉的自由舞蹈。而大型原生态舞剧《云南映象》中原汁原味的服装道具和原生态自在的舞技,是主创杨丽萍等人所一直推崇的。

蓝莓根腐病病原菌的分离鉴定与室内药剂毒力测定

为了解浙江蓝莓根部腐烂的原因及病原菌种类,从而控制该病在蓝莓生产上的扩散。本研究从浙江蓝莓种植区采集了蓝莓根腐病病样,通过分离纯化获得菌落形态相似的3个菌株,经柯赫氏法则验证、形态学观察、选取真菌通用引物ITS4/ITS5扩增菌株的rDNA-ITS序列并进行测序,确定分离到的菌株均为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。采用菌丝生长速率法研究7种不同的杀菌剂对F. oxysporum的毒力作用,测定各杀菌剂的有效中浓度(EC50),发现咪鲜胺和多菌灵的抑制作用显著,EC50分别为0.071 59 mg/L和2.832 9 mg/L。通过对蓝莓根腐病的病原菌的种类鉴定,明确了该病的病原菌,并进行了室内药剂毒力测定,本试验结果为研究蓝莓根腐病发病规律及病害综合防控提供了依据。

高良姜素通过调节Akt/MEF2D/Beclin-1信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆障碍的作用

研究高良姜素对APP/PS1小鼠学习记忆障碍及Akt/MEF2D/Beclin-1通路的影响。实验分为正常组、模型组、高良姜素低剂量组(25 mg·kg^(-1))、高良姜素中剂量组(50 mg·kg^(-1))、高良姜素高剂量组(100 mg·kg^(-1))、多奈哌齐组(3 mg·kg^(-1))、Akt抑制剂组(25 mg·kg^(-1))和自噬抑制剂组(30 mg·kg^(-1)),每组10只,持续给药30 d,待给药第24天进行水迷宫和避暗实验测试;ELISA检测海马中p-tau、β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(42))、乙酰胆碱酯酶(AChE)、淀粉样前体蛋白β位点裂解酶1(BACE1)和淀粉样前体蛋白(APP)水平,RT-PCR检测海马中Beclin-1 mRNA表达,免疫组化检测海马中Aβ_(42)和胶质纤维状酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光检测海马中肌细胞增强因子2D(MEF2D)的表达,HE染色观察海马病理学情况以及Western blot检测海马中Akt、MEF2D和Beclin-1表达。结果表明,与正常组比较,模型组游泳时间、错误次数、被电次数、p-tau、Aβ_(42)、APP、AChE、BACE1、GFAP和Beclin-1增加,避暗潜伏期、p-Akt和MEF2D减少,海马损伤明显。与模型组比较,多奈哌齐组和高良姜素组游泳时间、错误次数、被电次数、p-tau、Aβ_(42)、APP、AChE、BACE1、GFAP和Beclin-1减少,避暗潜伏期、p-Akt和MEF2D增加,海马组织病理情况改善。与自噬抑制剂组比较,高良姜素组游泳时间、错误次数、被电次数、p-tau、Aβ_(42)、APP、AChE、BACE1、GFAP和Beclin-1显著增加,避暗潜伏期、p-Akt和MEF2D显著减少。综上所述,高良姜素改善APP/PS1小鼠的学习记忆障碍和海马神经元损伤,其机制可能与调节Akt/MEF2D/Beclin-1通路有关。