端粒酶催化亚基hTERT调控Hela细胞周期的实验研究

目的探讨hTERT基因与细胞周期因子之间的关系,从细胞周期调控的角度研究反义hTERT影响肿瘤细胞生长的机制。方法脂质体介导将hTERT反义寡核苷酸(hTERT-ASODN)转染到Hela细胞中,运用RT-PCR方法分析hTERT-ASODN对细胞周期相关基因表达水平的改变,流式细胞仪技术检测细胞周期分布的变化。结果hTERT-ASODN可在mRNA水平封闭Hela细胞中hTERT基因的表达,并使细胞周期相关基因如CyclinE1,CyclinB1,CyclinD1的表达水平出现明显变化。流式细胞仪的检测结果显示,hTERT-ASODN转染组的细胞数在G0/G1期增多,而在S期及G2/M期减少,但无特征性的凋亡峰出现。结论hTERT基因参与调控肿瘤细胞中相关细胞周期因子的表达。

靶向cyclin D1的脱氧核酶对肿瘤细胞周期的影响

应用RNAdraw和Mfold生物信息学软件进行细胞周期蛋白D1(cyclin D1)mRNA的二级结构预测,设计靶向cyclin D1的10-23型脱氧核酶(cyclin Dl-DRz),将其转染至肿瘤细胞u251和HeLa中。逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测发现,cyclin Dl-DRz能明显抑制u251、HeLa细胞中cyclin D1基因的表达,并使细胞周期蛋白E1、细胞周期蛋白A1和细胞周期蛋白B1等表达下降。流式细胞仪技术分析转染前后细胞周期的变化,显示肿瘤细胞阻滞在G0/Gl期的比例增加。本实验建立了脱氧核酶靶位点的筛选平台,并证实cyclin Dl-DRz能有效干扰肿瘤细胞在细胞周期中的进程。