人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U／kg体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80．0％。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为（3．81±0．69）μm，短径为（1．24±0．15）μm；尾部长度为（24．83±3．05）μm；精液pH为7．3～7．5，精子密度每毫升1．02×10^10尾。精子的适宜盐度为15～20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6．0～8．0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外，4种金属离子（Mg^2＋、Ca^2＋、Na^＋和K^＋）对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0．4～0．6g／mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41．0％～60．0％）。

人工诱导花鳗鲡卵巢发育成熟及相关激素和组织的作用

采用多次肌肉注射黄体生成素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH-A2)和鲤脑垂体匀浆(carp pituitary extract,CPE)的方法诱导花鳗鲡卵巢发育成熟。在任意挑选的15尾实验组鱼中,5尾卵巢发育完全成熟,平均性腺系数(gonadosomatic index,GSI)为(20.9±5.04)%(最大达到27.3%);5尾卵巢发育至成熟期,平均GSI为(7.2±2.86)%;5尾卵巢发育至卵黄生成期,平均GSI为(2.32±1.5)%;而对照组的性腺停留在未发育的Ⅱ期[GSI为(1.18±0.39)%],这表明注射的激素能诱导雌性花鳗鲡性腺发育直到完全成熟。检测卵巢发育过程中脑垂体GtH的mRNA水平,血清中类固醇激素水平以及肝脏和消化道组织学变化。结果表明,脑垂体中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA水平随着卵巢的发育而逐渐增加,在卵巢发育成熟后下降,其中GtHα和LHβ的含量在卵巢发育成熟时虽比发育时期略有下降,但仍然呈现高表达量,而FSHβ在卵巢发育成熟时的表达量极低,几乎检测不到。血清雌二醇的含量在卵巢开始发育和卵黄生成期时的含量较高,随着卵巢的发育成熟而下降;睾酮的含量在卵巢发育成熟过程中有所增加,在卵巢发育成熟时明显升高。肝糖原过碘酸希夫反应染色(periodic acid shiff,PAS)染色结果显示随着卵巢的发育成熟,肝细胞中糖原颗粒逐渐减少,脂肪含量有所增加,肝糖原参与卵巢生成过程中的物质与能量代谢活动。胃壁和肠壁的组织学显示,随着卵巢发育成熟而出现不同程度的退化。

激素诱导花鳗鲡精巢发育成熟期间性激素水平及相关细胞的超显微结构

通过注射人类绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,每7d注射一次(剂量为500U.(体重)kg-1),共注射6次。检测此期间血清中促性腺激素(GtH)和性类固醇激素(T、11-KT、E2)的水平,以及相关细胞超显微结构的变化。结果表明,对照组雄性花鳗鲡性腺发育处于Ⅰ―Ⅱ期,GS(IGonadosome Index)为0.17±0.06%,血清中GtH、T、11-KT水平较低,并且T浓度低于0.1ng(试剂盒测定范围为0.1―20ng.mL-1);注射第3次后,实验组鱼性腺发育处于Ⅲ期,GSI为7.0±0.03%,血清中GtH、T、11-KT的水平均明显上升;排精后的实验组鱼GSI为9.57±2.1%,GtH、T、11-KT的水平比注射第3次的实验组鱼有所下降,但仍然高于对照组;在整个催熟过程中,血清中E2水平持续降低,从对照组的2.36ng.mL-1下降到排精后的0.83ng.mL-1。超显微结构的观察证明,与对照组相比排精后的实验组鱼脑垂体中GtH细胞的小颗粒减少,内质网池扩大,出现分泌并释放促性腺激素后留下的空泡。对照组鱼肝细胞富含糖原,几乎没有脂肪泡的存在,细胞核位于细胞中间,排精后的实验组鱼肝细胞脂肪泡增多变大,脂肪泡的形成导致细胞核偏位。