基于自噬途径探讨银杏叶提取物对老年性聋大鼠的保护作用

目的探讨银杏叶提取物对老年性聋大鼠听功能、耳蜗组织形态学和自噬相关蛋白表达的作用。方法将45只大鼠随机分为对照组、模型组和银杏叶提取物低、中、高剂量组(10、20、30 mg/kg),每组9只,采用腹腔注射500 mg/kg D-半乳糖(D-gal)构建老年性聋模型。给药8周后,听性脑干诱发电位(ABR)检测大鼠听阈变化,HE染色观察耳蜗毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞形态变化,免疫荧光染色法检测耳蜗内外毛细胞数量变化,透射电子显微镜观察耳蜗毛细胞超微结构变化,Western blot法检测耳蜗组织中自噬相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组ABR阈值升高(P<0.01),耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹损伤严重,血管纹厚度、螺旋神经节细胞数、内外毛细胞数和自噬小体数均降低(P<0.01),耳蜗组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均降低(P<0.01),P62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,银杏叶提取物中、高剂量组ABR阈值均降低(P<0.01),耳蜗内外毛细胞及血管纹形态改善,螺旋神经节细胞形态趋向正常,血管纹厚度、螺旋神经节细胞数、内外毛细胞数和自噬小体数均增加(P<0.05,P<0.01),耳蜗组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高(P<0.01),P62蛋白表达降低(P<0.01)。结论银杏叶提取物对老年性聋大鼠的听功能和耳蜗细胞具有保护作用,其机制可能与上调耳蜗组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,下调P62蛋白表达有关。

银杏叶提取物通过Nrf2/HO-1信号通路减轻老年性聋大鼠耳蜗氧化应激损伤的机制

目的观察银杏叶提取物对老年性聋大鼠耳蜗核因子红系相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响,探讨银杏叶提取物对老年性聋的保护机制。方法将45只SD大鼠随机分为对照组、模型组和银杏叶提取物低、中、高剂量组,每组9只。采用听性脑干诱发电位(ABR)检测听功能;ELISA法检测血清丙二醛(MDA)和总-超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量;透射电镜观察螺旋神经节细胞超微结构;免疫荧光染色观察顶、中、底回毛细胞结构和数量变化;免疫组织化学法及蛋白印迹法检测大鼠耳蜗Nrf2和HO-1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,模型组ABR阈值明显升高,血清中MDA含量升高,T-SOD含量降低,螺旋神经节细胞超微结构明显破坏,内、外毛细胞形态紊乱,数量大量丢失,Nrf2和HO-1蛋白表达均下调。经不同剂量银杏叶提取物治疗后,与模型组比较,ABR阈值明显降低,MDA含量降低,T-SOD含量升高,螺旋神经节超微结构明显改善,内、外毛细胞形态清晰,数量逐渐增多,Nrf2和HO-1蛋白表达均上调。结论银杏叶提取物可减轻老年性聋大鼠耳蜗的氧化应激损伤,其机制可能与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。