水貂阿留申病分子生物学及防控技术研究进展

水貂阿留申病是由阿留申病毒引起的慢性、持续性传染病,是危害水貂养殖业的重要疫病之一,在世界各养貂国家均有分布。近几年来,国内外、学者在阿留申病毒的分子生物学、诊断等方面做了大量研究工作,本文将着重介绍国内、外学者在这两方面对阿留申病的研究情况,并对该病的预防提出几点建议,以供进一步研究参考。

水貂阿留申病病毒VP2蛋白基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

为了得到结构和功能近似于天然的水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的衣壳蛋白VP2,将ADVG的VP2基因5′端添加His标签后克隆到杆状病毒转移载体(pFastBac1)后转化入大肠杆菌DH10Bac中重组,筛选重组成功的克隆进行菌液扩增,获得重组的杆粒(Bacmid),然后用重组杆粒转染昆虫细胞(sf9),获得重组的杆状病毒。用P3代病毒感染sf9细胞,接毒后第48小时进行免疫荧光试验,结果,检测到特异的绿色荧光,证实目的蛋白得到成功表达。Western-blot分析结果显示,表达的VP2蛋白能够与His标签单抗和ADV阳性血清产生特异性免疫印迹反应。经过对流免疫电泳(CIEP)验证,在敏感性、特异性、重复性、稳定性方面,表达的VP2蛋白与商业抗原有一致的表现。采用超速离心法对病毒液进行浓缩后,在电子显微镜下可见约为20nm的病毒样颗粒(VLPs)。以上试验结果表明,ADV VP2蛋白在昆虫杆状病毒中得到有效表达,并具有良好的反应原性。