用荧光光谱与高效液相色谱法研究广西血竭的α-葡萄糖苷酶抑制活性

采用冷浸法对广西血竭进行分离,测定各组分的α-葡萄糖苷酶的抑制活性.使用三维荧光指纹技术对其荧光指纹进行研究,发现抑制率与荧光指纹主峰强度的相关系数为0.9413.说明可用荧光指纹参数表征抑制剂的抑制活性.以三维荧光光谱信息为指导找出荧光强度最高处的激发发射波长对,作为高效液相色谱荧光检测器的检测波长,研究各组分色谱峰面积同其相应α-葡萄糖苷酶抑制率的相关关系,发现其中峰1、峰2、峰1+峰2与其抑制率的相关系数分别为0.9414、0.9678和0.9645.说明这两色谱峰所对应的抑制剂与α-葡萄糖苷酶的抑制活性直接相关,为血竭α-葡萄糖苷酶的抑制活性有效成分的筛选,找到了很好的指示方法和检测手段.

胃癌及癌旁组织定量比较蛋白质组学研究

为寻找胃癌特异的肿瘤标记物,用于胃癌临床诊断及药物治疗靶点的选择,采用荧光差异显示凝胶电泳(DIGE)技术分离并筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的胃癌及对应癌旁组织差异表达蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共筛选出33个差异表达蛋白质点,其中9个蛋白质点在胃癌组织中上调,24个蛋白质点下调。对22个蛋白质点采用质谱技术成功鉴定,突变结蛋白、锰超氧化物歧化酶、热休克蛋白60等在胃癌中高表达,热休克蛋白27、前列腺素F合酶、硒结合蛋白1、锌指蛋白160、微管蛋白α6、真核生物翻译延伸因子1α1等在胃癌组织中低表达,并筛选出5个未知蛋白。这些差异表达蛋白可望成为胃癌诊断的特异标记物,并与胃癌的发生、发展及预后等有关,为胃癌的诊断、发生机制的研究提供了新的思路。

脑深部电刺激治疗帕金森病作用机制的探讨

目的从蛋白组学的角度探索脑深部电刺激(DBS)与毁损术治疗帕金森病的机制是否类同。方法采用荧光差异凝胶电泳(DIGE)技术,测定3例行双侧丘脑底核DBS治疗的帕金森病病人脑脊液中蛋白,在手术前(未干预组)、手术7 d后但未刺激前(微毁损组)和刺激1周后(DBS组)的表达变化。另留取3例非中枢系统疾病病人的脑脊液蛋白作为正常对照组。结果未干预组和微毁损组、未干预组和DBS组、微毁损组和DBS组的组间比较分别发现14、18和13个明显差异蛋白点。除3个蛋白点外,未干预组和微毁损组与未干预组和DBS组的组间蛋白差异点完全不同;且在这3个相同的蛋白点中,两个蛋白点呈相反方向表达。结论结果初步提示DBS与毁损术治疗帕金森病的机制不相同。

四连接素在帕金森病脑脊液中的表达变化

目的探讨脑脊液中可能的帕金森病(PD)生物标记物。方法采用荧光差异凝胶电泳(DIGE)技术分离并筛选PD患者和正常对照者脑脊液中差异表达蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行鉴定并分析,应用Western blotting进行验证。结果 DIGE发现20个明显的差异蛋白点,共鉴定出8个蛋白质。DIGE分析和Western blotting验证均显示蛋白四连接素在PD患者脑脊液中发生显著下调。结论四连接素可能参与了PD发生,有可能成为PD的生物标记物。

应用DIGE测定帕金森病脑脊液中蛋白变化

目的测定帕金森病（PD）脑脊液中蛋白的变化，为进一步探索PD的生物标记物提供线索。方法采用荧光差异凝胶电泳技术分离并筛选PD和正常对照者脑脊液中差异表达蛋白质．用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共发现20个明显的差异蛋自点，其中11个点在PD中上调，9个点下调，共鉴定出8个蛋白质，其中有3个未知蛋白，均表现为下调。蛋白MYPTl出现明显下调，载脂蛋白原、脂蛋白发生明显上调，载脂蛋白A—I的一个异构体发生上调，一个异构体发生下调。结论MYPT1与突触功能有关，载脂蛋白原、脂蛋白、载脂蛋白A—I与胆固醇代谢有关，这些蛋白与PD发生有一定关联，有可能成为PD的生物标记物。

脑脊液蛋白四连接素在脑深部电刺激治疗前后的表达变化

目的研究帕金森病(PD)患者脑脊液蛋白四连接素在脑深部电刺激(DBS)治疗前后的表达变化,了解四连接素有无可能成为DBS治疗PD的生物标记物。方法采用荧光差异凝胶电泳(DIGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)鉴定技术分析PD患者脑脊液中四连接素和载脂蛋白A-Ⅰ在DBS治疗围手术期的表达变化,应用Westernblotting验证围手术期的变化及随访期的表达变化。结果在围手术期,DIGE分析和Westernblotting验证均显示DBS后四连接素和载脂蛋白A-Ⅰ未出现明显改变,而随访期,四连接素的表达水平显著增高,载脂蛋白A-Ⅰ的表达水平基本平稳。当DBS治疗停止后,四连接素的表达水平显著下降,载脂蛋白A-Ⅰ却无此现象。结论四连接素的表达变化与DBS治疗有关,有可能成为DBS治疗PD的生物标记物。

胎儿和成人椎间盘的shotgun蛋白质组学分析

目的在整体水平上揭示椎间盘生长期和发育成熟期蛋白的表达及差异。方法对24周胎儿，25和30岁人椎间盘组织进行shotgun蛋白质组学技术分析。提取椎间盘组织蛋白，十二烷基磺酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳结合反向高效液相色谱串联质谱shotgun蛋白质组学技术分析。使用IPI蛋白数据库与基因本体论（GOA）进行蛋白识别及生物信息分析。结果24周胎儿，25和30岁共识别的非冗余蛋白分别为524，181和172种；仅在胎儿中识别的高质量蛋白有174种，25和30岁共有但胎儿中未识别的高质量蛋白有20种。3个样品的生物化学特性趋势相似。结论使用shotgun蛋白质组学技术可展示胎儿和成人椎间盘的蛋白质表达谱，揭示生长期和发育成熟期蛋白表达的数量、种类及其差异。

皮质发育不良大鼠差异蛋白的筛选及其致痫作用的探讨

目的寻找皮质发育不良大鼠脑组织（皮质和海马）与正常对照组织在不同发育阶段的差异表达蛋白质，探讨这些蛋白质在皮质发育不良所致癫痫发生机制中的作用。方法妊娠晚期（孕17d）Sprague—Dawley大鼠腹腔注射卡莫司汀（15mg／kg）诱导仔鼠皮质发育不良。提取新生期（出生后7d，记作fy7）及成年仔鼠（P60）新皮质及海马组织蛋白，运用双向凝胶电泳技术构建卡莫司汀诱导皮质发育不良鼠和正常鼠皮质及海马组织在新生期及成年期的蛋白质表达谱，通过比对分析筛选出差异表达的蛋白质斑点。应用MALDI—TOF—MS技术平台对差异最为显著的部分蛋白进行鉴定。结果在模型组和对照组之间共筛选出57个差异表达蛋白质斑点（P〈0．05，35个来自新生期，22个来自成年期），其中35个在模型组表达上调，22个在模型组表达下调。12个蛋白质斑点得以成功鉴定，包括微管蛋白、肌动蛋白、胶质纤维酸性蛋白、生长相关蛋白-43、广泛型线粒体肌酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶和脑型原肌球蛋白等蛋白或其亚单位线粒体肌酸激酶广泛型亚型。结论鉴定的蛋白质参与细胞骨架构成、突触形成和线粒体功能活动等多种生理过程，它们的表达改变可能在皮质发育不良致癫痫发牛的机制中发挥重要作用。