3种获得中性粒细胞方法的比较及应用的探讨

目的比较诱导髓系白血病细胞株分化法、外周血分离纯化法、诱导造血干细胞定向分化法3种获得中性粒细胞的方法。方法用1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化;用红细胞裂解法结合免疫磁珠法分离纯化外周血中性粒细胞;用Percoll密度梯度离心法结合免疫磁珠法分离纯化外周血干细胞,然后用GM-CSF和G-CSF诱导粒细胞的产生。3种方法获得的细胞通过MGG染色检测细胞形态及中性粒细胞纯度,利用免疫荧光技术检测CD18蛋白的表达及胞内分布特点。结果诱导NB4细胞分化可获得约40%的中性粒细胞,从外周血分离纯化的中性粒细胞纯度约为90%,通过诱导造血干细胞定向分化可获得70%以上的中性粒细胞。免疫荧光结果显示,3种方法获得的中性粒细胞,CD18蛋白的表达强度无明显不同,也都呈现点状分布。结论红细胞裂解法结合免疫磁珠法分离纯化外周血中性粒细胞,纯度高、活性好,有利于快速检测新鲜血液样本中的中性粒细胞;诱导造血干细胞定向分化获得的中性粒细胞,活性高,可在体外维持长达几天之久,可应用于中性粒细胞长时间的体外试验。

体外实验中缺氧对中性粒细胞凋亡的影响

目的:通过在缺氧条件下体外培养中性粒细胞,探讨缺氧对中性粒细胞凋亡的影响。方法:用全反式维甲酸诱导NB-4细胞分化获得中性粒细胞并建立缺氧模型,用流式细胞技术检测缺氧对中性粒细胞凋亡和坏死的影响以及缺氧后CD11b+细胞百分率的变化,用免疫荧光技术检测缺氧对中性粒细胞的细胞膜TNFR1表达强度的影响。结果:缺氧后中性粒细胞增殖减缓,凋亡和坏死受到抑制,细胞膜TNFR1表达下降,CD11b+细胞百分率稍有增高。结论:缺氧可以减缓中性粒细胞增殖,同时抑制中性粒细胞的凋亡。