小反刍兽疫病毒非结构蛋白C和V基因突变的克隆与表达

反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV) C和V蛋白是P基因通过特殊编码方式产生的两种非结构蛋白,他们通过抑制干扰素产生在天然免疫中发挥重要作用。本研究将C基因起始密码子AUG突变为ACG,并在氨基酸序列的第9位、第12位引入终止密码子,在V基因编码氨基酸序列的第7位、第285位、第294位引入三个终止密码子,运用PCR技术扩增获得了表达沉默的突变基因ΔC和ΔV,构建了真核表达载体p3flag-CMV-14-ΔC和p3flag-CMV-14-ΔV。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测表明转染突变基因质粒HEK-293T细胞中C基因(P<0.001)和V基因(P<0.01)表达均极显著降低,蛋白质印迹(Western blot)检测表明转染突变基因质粒细胞中C蛋白和V蛋白均无表达。研究结果为进一步研究PPRV病毒C和V蛋白的功能提供了科学依据。

异源CD151蛋白在H9c2细胞中的表达对PRRSV感染的影响

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的以猪繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染的病毒性疾病。研究表明PRRSV可在表达CD151的一株鼠源细胞系中复制增殖,提示异源CD151可能与PRRSV复制增殖相关。为了进一步验证异源CD151本文运用是否参与病毒的复制增殖,本研究验证了表达CD151的大鼠来源的心肌细胞系H9c2对PRRSV的易感性。RT-PCR和间接免疫荧光分析(indirect immunofluorescence analysis,IFA)表明H9c2细胞系中表达CD151蛋白和波形蛋白。病毒吸附试验和攻毒试验提示该病毒可以与H9c2细胞结合,但接种病毒后细胞培养上清和细胞裂解液中均不能检测到病毒核衣壳N蛋白表达,表明病毒不能在该细胞中复制。这一结果提示H9c2细胞中表达的异源CD151不能支持PRRSV的复制增殖。

小反刍兽疫疫苗研究进展

小反刍兽疫是小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病,是导致家养和野生小反刍动物死亡的罪魁祸首.继牛瘟病毒减毒活疫苗之后,小反刍兽疫病毒减毒活疫苗被广泛用于预防控制小反刍兽疫的流行,但该疫苗存在无法区分自然感染动物和接种动物以及热稳定性低等缺陷,导致小反刍兽疫仍在很多地区相继出现并造成重大经济损失,因此开发高效耐热的新型疫苗成为近年来的研究热点.文章对小反刍兽疫病毒的分子结构、流行病学进行了概述,着重介绍了近年来在疫苗开发中取得的研究进展.

反向遗传学技术在麻疹病毒属病毒中的研究进展

RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传材料(感染性克隆),在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质的过程.该技术在麻疹病毒属病毒中研究应用较多,尤以牛瘟病毒的研究开创了消灭麻疹病毒属病毒的先例,小反刍兽疫病毒和犬瘟热病毒的研究与应用还在进一步完善中.本文综述了反向遗传学技术在麻疹病毒属病毒基因结构与功能、致病机制、感染性克隆构建及新型疫苗研制等方面的研究进展.