接触镜储存盒不同处理方式对常见接触镜相关角膜炎病原菌生物被膜的清除作用

目的评价接触镜相关角膜炎不同病原菌形成生物被膜的能力,并比较角膜接触镜储存盒(CLC)不同处理方式对其生物被膜的清除作用。方法通过静态生物被膜形成实验,在聚丙烯材质的CLC中37℃孵育金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌24 h,建立生物被膜模型。根据处理方式分为对照组、室温干燥组、护理液浸泡组、加热干燥组和浸泡加热组,采用系列稀释微量计数法测定各组生物被膜生物量,并计算生物被膜杀灭率。结果4个实验菌株均可在CLC内壁形成生物被膜。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌形成生物被膜的生物量分别为(10.78±2.12)、(9.19±0.57)、(8.03±0.30)和(7.50±0.07)lg CFU/ml;其中金黄色葡萄球菌形成生物被膜的生物量明显高于其他菌株,差异均有统计学意义(均P<0.05)。加热干燥组和浸泡加热组各菌株生物被膜生物量均低于相应对照组,护理液浸泡组金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生物被膜生物量低于相应对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。加热干燥处理对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的杀灭率分别为(51.76±16.75)%、(68.63±4.43)%、(83.51±13.97)%和(97.13±5.19)%,总体比较差异有统计学意义(F=31.806,P<0.001);各菌杀灭率两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。室温干燥处理对各病原菌生物被膜的杀灭率总体比较差异无统计学意义(F=0.620,P=0.606)。浸泡加热处理对大肠埃希菌和白假丝酵母菌的杀灭率分别为(100.00±0.00)%和(97.79±7.67)%,均明显高于其对金黄色葡萄球菌的(81.13±14.86)%和对铜绿假单胞菌的(74.22±11.91)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论加热处理或者结合使用护理液浸泡处理CLC可显著提高对实验菌株生物被膜菌的杀灭作用,有效清除CLC中的细菌或真菌污染。

乙型肝炎小表面蛋白sC76Y和sI218L新突变的发现及体外研究

目的本研究旨在发现和研究具有潜在生物学或临床意义的乙型肝炎小表面蛋白(SHBs)新突变。方法SHBs氨基酸(AA)序列来自本课题组数据库227例患者,患者为未经抗病毒治疗、e抗原阳性的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者,均感染C2基因亚型乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)。通过SHBs的AA突变与血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平的关联分析,发现可能影响血清HBsAg水平的新突变。用重叠PCR法构建突变质粒,转染HepG2肝癌细胞系,用ELISA和Western Blot法检测HBsAg,荧光定量PCR检测胞内的HBV总RNA水平和细胞内外HBV DNA水平。结果SHBs序列突变检出率为78.4%(178/227),仅在高水平HBsAg组中检出的sC76Y(5/113,4.4%)和sI218L(3/113,2.7%)为新突变。与野生型相比,sC76Y突变株可使胞内HBsAg、胞内HBV总RNA和胞外HBV DNA明显升高(P<0.05),胞外HBsAg和胞内HBV DNA显著降低(P<0.05)。sI218L突变株可使胞内HBV总RNA显著增加(P<0.05),并使胞外HBsAg水平显著改变。结论新发现的sC76Y和sI218L突变可能通过不同机制影响HBV复制。前者倾向于使HBsAg滞留胞内,但可能促进病毒体分泌;后者则与胞内较高水平HBV RNA有关,还可能影响HBsAg的抗原性。