miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用qRT-PCR法检测肝癌组织中miR-424-5p,ATG14的表达。培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组(n=3):干扰miR-424-5p表达阴性对照组(in-NC组),干扰miR-424-5p表达组(in-miR-424-5p组);HCCLM3细胞实验分组(n=3):过表达miR-424-5p组(mi-miR-424-5p组),另设过表达miR-424-5p阴性对照组(mi-NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组(mi-NC+NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组(mi-NC+ATG14组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14阴性对照组(mi-miR-424-5p+NC组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14组(mi-miR-424-5p+ATG14组)。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡(P<0.05);干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡(P<0.05);miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),降低自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05);过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),提高自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05)。结论miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。