以PBP2a为靶点应用生物传感器技术筛选拮抗MRSA中药

目的应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌PBP2a活性的中药并进行活性物质含量的排序。方法将可溶性PBP2 a包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定115种中药水煎液去鞣质后与PBP2a的亲和力;选择亲和力较高的25种药物水提液和醇提液与定量PBP2a(50ng.ml-1)37℃混合孵育30min,再测定其与PBP2a的亲和力,以评价中药里活性物质的含量。结果115种中药中,毛冬青、金荞麦、雷公藤等25种中药与PBP2a具有较高亲和力(大于100RU);黄药子、五倍子、半枝莲、山豆根、黄连、草果、核桃根等7种中药中与PBP2 a特异性结合的活性物质含量较高。结论应用生物传感器跟踪技术筛选具有结合PBP2a作用的中药具有可行性,筛选出的7种中药均含有非鞣质类能与PBP2 a发生特异性结合作用的活性物质,该7种中药能不同程度抑制MRSA的生长。

应用生物传感器技术筛选拮抗细菌肽聚糖的中药

目的应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌肽聚糖(peptidoglycan,PGN)活性的中药并对其进行活性物质含量的排序。方法将可溶性PGN包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定114种中药水提液去鞣质后与PGN的亲和力;选择亲和力较高的26种药物与定量PGN(50ng/ml)37℃混合孵育30min,再测定其与PGN的亲和力,以评价药物水提液中活性物质的含量。结果114种中药中,侧柏叶、黄连、牡丹皮等26种中药与PGN具有较高亲和力(>100RU);侧柏叶、地骨皮、毛冬青等9种中药中与PGN特异性结合的活性物质含量较高。结论生物传感器跟踪技术快速、高效、客观,应用其筛选具有结合PGN作用的中药具有可行性,筛选出的9种中药均含有非鞣质类能与PGN发生特异性结合作用的活性物质。

青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定

目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol／L的IPTG进行诱导表达。应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39．7kDa的蛋白;Western blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础。

CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究

目的探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞(CHG-5)放射敏感性的作用及可能机制。方法用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经放射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/mL)联合放射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强(0.52±0.76)。CpG ODN107(10μg/mL)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合照射后作用更加显著(193±0.58)pg/mL。结论CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。

CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究

目的:探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞CHG-5放射敏感性的作用及可能机制。方法:用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经β射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果:CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/ml)联合β射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强。CpG ODN107(10μg/ml)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合β射线照射后作用更加显著。结论:CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。

青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。

青蒿琥酯对热灭活金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用

目的明确青蒿琥酯(artesunate,AS)对热灭活金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)攻击小鼠的保护作用,以及对亚致死剂量热灭活SA攻击小鼠血清释放细胞因子TNF-α的影响。方法尾静脉注射LD90剂量的热灭活SA攻击小鼠,于注射热灭活SA后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;尾静脉注射亚致死剂量热灭活SA,肌肉注射AS,4h后眼眶取血,离心取上清,观察AS对亚致死剂量热灭活SA攻击小鼠血清释放TNF-α的影响。结果AS可明显推迟热灭活SA攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由80%降低至40%(P<0.01);AS能明显抑制亚致死剂量热灭活SA攻击小鼠血清释放细胞因子TNF-α,并呈明显量效关系(P<0.01)。结论AS对热灭活SA攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。

贲门处静脉破裂出血致腹腔内大量积血一例

患者：男性，29岁。因饮酒后恶心、呕吐，下腹部胀痛不适2d于2012年12月2日人院。人院前患者曾先后两次在某医院门诊就诊，诊断为“急性胃肠炎”，给予口服药物（具体不详）治疗，患者下腹部胀痛没有缓解，并逐渐加重，遂来我医院求治。急诊科医师体检发现腹腔移动性浊音（＋），急行腹腔穿刺术，抽出暗红色不凝固血液2ml。

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定

目的 应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）临床分离株青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的mecA基因片段进行克隆、表达。方法 从临床样本巾分离鉴定出MRSA，根据基因文库收录的mecA基因编码序列，针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物，扩增目的基因片段，克隆至pQE30载体，经酶切鉴定、测序后，再转化E．coliM15（pREP4）。采用1mmol／L的异丙硫半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达及鉴定。结果重组表达质粒pQE30-mecA构建成功，基因测序结果显示，扩增的mecA基因DNA片段全长为1932bp，其巾有9个碱基突变。IPTG诱导后6h，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，M15（pQE30-mecA）出现一条相对分子质量约74×10^3的蛋白条带，且一部分以可溶性形式存在；M15（pQE30）未出现特异性蛋白条带。经诱导表达和鉴定证实，表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a。结论 利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a。