UHPLC-MS/MS测定人血浆中的阿普斯特浓度及生物等效性研究

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,建立快速、简单、灵敏的测定人血浆中阿普斯特浓度的方法并用于阿普斯特人体生物等效性试验研究。方法采用蛋白沉淀法处理,以阿普斯特-d5作为内标,色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,流速0.45 mL·min^(-1)梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式进行MRM检测,用时3 min。结果阿普斯特在2~600 ng·mL^(-1)(r^(2)=0.9977)范围内线性关系良好,准确度和精密度均小于15%。空腹和餐后条件下阿普斯特片受试制剂AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)和C_(max)的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

调味品中罗丹明B的HPLC-FLD-DAD测定方法研究

建立了高效液相色谱(HPLC)-荧光检测器(FLD)-二极管阵列检测器(DAD)测定调味品中罗丹明B的方法。不同基质样品采用适宜的提取液提取后,以甲醇和0.02mol/L的乙酸铵溶液(70∶30)为流动相,经C18色谱柱分离,用荧光-二极管阵列检测器串联测定,FLD激发波长为547nm,发射波长为573nm,DAD检测波长为550nm,外标法定量。实验结果表明:罗丹明B用FLD检测在1～2000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,定量限为0.005mg/kg;DAD检测在100～2000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,定量限为0.5mg/kg。方法回收率在83.1%～105.1%之间,RSD为1.64%～5.42%(n=6)。该方法准确、灵敏,前处理简单,适用于调味品中罗丹明B的定性、定量分析。

固相萃取-高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定饮料中10种合成着色剂

本文建立了固相萃取-高效液相色谱-二极管阵列检测法(SPE-HPLC-PDA)同时测定饮料中10种合成着色剂(新红、柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红、酸性橙Ⅱ)的含量。样品经Waters Oasis WAX固相萃取柱净化,采用Aglient TC-C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以甲醇和0.02 mol/L的乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,PDA检测波长为210 nm-650nm。以保留时间结合待测物的紫外吸收光谱进行定性分析,采用外标法进行定量分析。10种合成色素线性范围为1-20μg/mL(r>0.999);方法检出限为0.01-0.02 mg/kg;加标回收率为90.2-100.6%,RSDs为0.44-2.48%(n=6)。该方法简单、准确、灵敏,适用于饮料中合成着色剂的测定。

调味品中合成着色剂和糖精钠的测定

目的 建立了一种同时测定调味品中合成着色剂（诱惑红、胭脂红、日落黄）和糖精钠的高效液相色谱（HPLC）分析方法.方法 采用C18色谱柱,以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,光电二极管阵列（PDA）检测器检测,采用外标法定量分析.结果 4种成分的线性范围为0.5～20.0 μg/mL （r＞0.999）,回收率为94.3％～101.6％,RSD为0.42％～2.44％（n=6）.结论 此法准确、灵敏,前处理简单,适用于调味品中诱惑红、胭脂红、日落黄和糖精钠的定性、定量分析.

高效液相色谱法测定转化糖电解质注射液中转化糖含量

目的建立测定转化糖电解质注射液中转化糖含量的高效液相色谱法。方法采用Sugar SH1011色谱柱(8.0 mmID×300 mL),柱温为50℃,以0.04 mol/L的磷酸溶液为流动相,流速为0.5 mL/min,检测波长为195 nm,进样量为20μL。结果葡萄糖、果糖进样量分别在24.99～249.90μg和25.25～252.50μg范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为100.69%和100.58%,RSD分别为0.85%和0.78%(n=9)。结论所用方法简便、快速、结果准确,适用于该制剂的质量控制。

HPLC法测定转化糖注射液的含量

目的:采用高效液相色谱法测定转化糖注射液的含量。方法:采用SUGAR SH1011(8.0 mm×300 mm)柱,柱温为50℃,以0.04 mol.L-1的磷酸溶液为流动相,流量为0.5 mL.min-1,检测波长为195 nm。结果:葡萄糖、果糖分别在24.870～174.090μg,24.625～172.375μg范围内,进样量与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为98.97%、99.10%,RSD分别为0.77%、0.39%(n=9)。结论 :方法简便、快速,结果准确。

NorA多药耐药外排泵抑制剂研究进展

目的综述了NorA多药耐药外排泵的生物学特征及其抑制剂的研究进展。方法以近几年国内外有代表性的论文为依据,进行分析、整理和归纳。结果与结论NorA泵是由NorA蛋白介导的多药耐药外排泵,受多种调节因素的调控,可以外排多种化学结构不相关的底物,是金黄色葡萄球菌为代表的多种细菌耐药的主要原因之一。因此,研究NorA外排泵的外排机制,开发其有效抑制剂对克服细菌多药耐药性具有重要意义。

电感耦合等离子体发射光谱法同时测定除臭类化妆品中4种禁限用物质

建立了电感耦合等离子体发射光谱法同时测定除臭类化妆品中铅、砷、汞、锌4种禁限用物质的方法。通过试验确定了仪器参数及各元素的分析线，4种元素分别在0．5～6μg／mL、0．05～0．5／Lg／mL、0．02～0．2ug／mL、2～10μg／mL范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0．9997，样品中各元素的加标回收率在89．0％～103．0％之间。方法简便、准确、灵敏度高，为化妆品中禁限用物质的控制提供一种行之有效的分析方法。

基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量

蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究基于蛋白质组学技术,筛选出了具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLE特征肽,并建立了基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法。采用胰蛋白酶对纯化的矛头蝮蛇svTLE进行酶解,利用纳升液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-Q-Exactive-MS)和Proteome Discoverer^(2).2软件分别进行多肽的检测和鉴定,通过BLAST搜索与Uniprot数据库对比分析,筛选出具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLEs特征肽“EAYNGLPAK”。针对该特征肽对酶解温度、酶解时间和酶用量等样品前处理方法进行了优化,利用超高效液相色谱-串联质谱,以m/z 481.9>315.2和481.9>485.2作为检测离子对,采用ESI+模式进行了多反应监测(MRM)定性定量分析。结果显示,特征肽在2.5~30 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.9996,多水平加标回收率范围为95.5%~101.9%,各水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.1%~3.2%,完全能够满足实际样品检测需求。方法简便快捷,灵敏度高,专属性强,可用于矛头蝮蛇蛇毒种属鉴别及svTLE含量测定,从源头保证血凝酶类产品的质量,并可为其他蛇毒类产品的质量控制提供参考。

赖氨酸磷酸氢钙颗粒评价性抽验结果及质量评价

目的评价国产赖氨酸磷酸氢钙颗粒质量现状及存在问题,为提高质量标准及临床用药安全提供参考。方法对全国范围内抽取的167批样品采用法定标准检验与探索性研究结合的方法进项检验,并对检验结果进行统计分析,用于风险评估。结果按法定标准检验,167批样品结果均符合规定;探索性研究中,合格率为83.8%,不合格项目为干燥失重及未按批准处方投料。结论本次抽检的赖氨酸磷酸氢钙颗粒整体质量状况差,现行质量标准存在缺陷,需进一步完善。

UPLC-MS/MS检测长白山白眉蝮蛇蛇毒中的类凝血酶

目的基于具有种属特异性的长白山白眉蝮蛇类凝血酶特征肽,建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)检测蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法。方法样品经还原、烷基化、胰蛋白酶消化后,利用UPLC-MS/MS对类凝血酶特征肽进行检测。色谱柱:Waters ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7µm);流动相:0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸乙腈,梯度洗脱;流速:0.2 ml/min;以m/z 877.4(双电荷)→892.4,550.2作为检测离子,采用ESI+模式进行多反应监测(MRM)。结果特征肽在20~400 ng/ml范围内浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系(r=0.9990),3个水平的加标回收率为91.2%~107.8%,精密度和重复性均良好。结论本方法准确、可靠,可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的定性定量分析,为蛇毒血凝酶类药物的质量控制提供技术支持。

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定中药和保健食品中13种禁用壮阳类药物含量

固样(2.000 0g)加水10.0mL使其超声分散(液样取2.00mL,加水8.0mL),加甲醇稀释至50.0mL。取上清液2.00mL,用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至10.0 mL。所得溶液经Cleanert PCX混合型阳离子固相萃取柱净化、氨水-甲醇(5+95)混合液洗脱。洗出液进行色谱分离,用ZORBAX SB-C18色谱柱作固定相,并以不同体积比的乙腈和0.01 mol·L-1乙酸铵溶液(pH 3.5)的混合液为流动相进行梯度淋洗。质谱分析中,采用电喷雾正离子源和多反应监测模式检测。13种壮阳类化合物的质量浓度在1.0~1 000μg·L-1范围内呈线性,方法的检出限(3S/N)在3.0~40μg·kg-1之间。加标回收率为80.1%~111%,相对标准偏差(n=6)小于8%。

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中盐酸氨溴索及其制剂的生物等效性评价

采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的测定人血浆中盐酸氨溴索含量的方法,并用于盐酸氨溴索人体生物等效性预试验研究。取50μL血浆样品,采用蛋白沉淀法处理,以盐酸氨溴索-d5为内标。采用Waters XBridge BEH C18色谱柱(50 mm×2. 1 mm,2. 5μm),以0. 1%(v/v)甲酸水-含0. 1%(v/v)甲酸的甲醇为流动相,在0. 4 mL/min流速下进行梯度洗脱。采用电喷雾电离(ESI)源以正离子模式进行MRM检测。结果显示,盐酸氨溴索在2～400 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0. 998,准确度为97. 1%～108. 7%,精密度为1. 0%～5. 6%。将该方法用于6名健康受试者口服盐酸氨溴索受试制剂和参比制剂30mg后血药浓度的测定,结果显示二者相对生物利用度为(102. 3±14. 8)%,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t、AUC0-∞)和最大血药浓度(Cmax)的90%置信区间均在80. 0%～125. 0%范围内,两种制剂生物等效。

分子对接技术结合LC-MS/MS筛选半夏厚朴汤抗PDE4有效成分

目的 采用分子对接技术筛选半夏厚朴汤方中抗磷酸二酯酶4(PDE4)潜在有效成分,结合高分辨质谱技术评价不同提取方法的有效成分含量变化.方法 采用TCMSP等数据库和文献检索方法搜集药味中所含化合物,采用Autodock分子对接软件计算化合物与蛋白质的对接结果,优选结合能较低的化合物作为潜在有效成分,采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS)检测不同提取方法样品中有效化合物分子含量.结果 1028个已报道化合物经对接筛选,得到25个对接结果较好的化合物分子.与高分辨质谱进行比对,对应得到5种化合物分子.考察不同方法的提取效率,以50%乙醇提取得到的baicalein、scutellarein、luteolin、orobol 4种成分的含量较高;以95%乙醇提取得到的apigenin含量较高.结论 半夏厚朴汤中某些分子有通过抑制PDE4作用发挥抗抑郁症作用的潜在作用.不同提取方法对半夏厚朴汤有效成分的含量影响较大,这可能对半夏厚朴汤治疗抑郁症的作用有较大影响.

吲达帕胺片在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究吲达帕胺受试制剂(片剂)和参比制剂(片剂)空腹给药的人体生物等效性。方法采用开放、随机、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的12名健康志愿者随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂2.5 mg,采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的的分析方法测定人全血中吲达帕胺浓度,用于吲达帕胺片人体生物等效性预试验研究。利用DAS软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果吲达帕胺受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:C_(max)分别为(128.7±19.4)ng/ml和(126.5±19.2)ng/ml;T_(max)分别为(1.5±0.6)h和(1.5±0.5)h;AUC_(0-t)分别为(2163.4±352.4)ng/ml和(2148.5±346.2)ng/ml;AUC_(0-∞)分别为(2241.1±383.8)ng/ml和(2228.4±371.5)ng/ml,相对生物利用度为99.5%±6.2%。结论受试制剂AUC_(0-t)、 AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试吲达帕胺缓释片与参比吲达帕胺缓释片具有生物等效性。

基于蛋白质组学技术的羚羊角的研究与分析

目的:基于蛋白质组学技术对羚羊角进行研究,为合理使用羚羊角提供参考。方法:将酶解后的羚羊角角壳和骨塞样品,通过Nano-LC-Orbitrap液质联用仪进行多肽分离及质谱数据采集,结合UniPortKB收录的CapraHircus蛋白质组数据库,采用PEAKSStudio软件进行数据处理。结果:发现两者主要功能蛋白质及多肽无论在数量上还是种类方面既有某些相似性也具有明显的差异性。结论:骨塞及角壳一起磨成羚羊角粉使用具有一定的合理性,但必须将角壳和骨塞的用量比例控制在合理范围内,以确保羚羊角临床用药的安全性和有效性。

超高效液相色谱-串联质谱法测定叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒性杂质

硫酸二甲酯被广泛用于药品的有机合成中,具有很强的毒性及腐蚀性,因此应严格控制其在药品中的残留量。现有传统检测方法在样品制备过程中不允许使用水,且存在专属性低、灵敏度差等缺陷,严重制约了检测方法的通用性和准确度。研究采用超高效液相色谱-串联质谱技术(UHPLC-MS/MS),建立了氨基比林等叔胺类药品中残留的硫酸二甲酯的测定方法。检测方法以氨基比林作为衍生剂,40℃条件下氨基比林和硫酸二甲酯在水溶液中能够快速反应生成甲基化氨基比林,通过检测甲基化氨基比林间接计算硫酸二甲酯的残留含量。采用Waters Atlantis HILIC C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,3.0μm),以10 mmol/L乙酸铵水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液(50∶50,v/v)为流动相进行等度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量1μL;在电喷雾电离、正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式下测定硫酸二甲酯的含量。硫酸二甲酯在0.9935~7.9480 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.9997,方法的检出限为0.50 ng/mL,定量限为1.15 ng/mL,加标回收率为94.9%~106.4%。建立的检测方法用于氨基比林、咖啡因、替加氟等9批样品中,均未检出硫酸二甲酯,说明各药品生产企业注重了该基因毒杂质残留量的控制。该方法专属性强,灵敏度高,操作简单,定量准确,适用于氨基比林等药品中硫酸二甲酯基因毒杂质的测定。

超高效液相色谱-串联质谱法测定阿胶中的驴皮源成分

近年来由于驴皮资源短缺,阿胶价格大幅度上涨,市场上出现了大量以马、骡、猪、牛皮等熬制而成的假胶,导致阿胶质量的参差不齐,严重扰乱了市场,急需高效准确的检测方法提升阿胶品质。该研究采用超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了阿胶中驴皮源成分的检测方法。样品加水溶解后,于37℃下经胰蛋白酶酶解,产生驴源性特征肽段,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,单次分析时间10 min,在电喷雾正离子(ESI+)模式下进行多反应监测(MRM),同位素内标法定量。驴源多肽A1、A2在50~1250μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.996,方法定量限(S/N=10)为20 mg/kg,在300、600、900 mg/kg 3个添加水平上驴源多肽A1、A2的回收率范围为103.2%~108.3%,各加标水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.0%~3.0%,完全能够满足实际样品检测需求。对29批不同生产企业的阿胶进行测定,结果表明,不同企业生产的阿胶中驴源多肽A1、A2的含量之和存在差异,含量为0.096%~0.180%,平均值为0.151%,提示驴源多肽A1、A2含量较低的阿胶生产厂家应注重皮源质量,改进生产工艺,以提升产品质量。该方法操作简便,结果可靠,重现性好,可用于阿胶中驴皮源成分的测定。

基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法测定复方胃蛋白酶颗粒的溶出度

建立以特征肽为指标的自身对照法测定复方胃蛋白酶颗粒中胃蛋白酶溶出度的方法。选择多肽GTIGIGTPAQDF作为胃蛋白酶的特征肽,建立超高效液相色谱-串联质谱多反应监测测定胃蛋白酶含量的方法。以水作为溶出介质,浆法,转速为50 r/min,采用自身对照法计算溶出度。特征肽在0.010 5~0.525μg/mL内线性关系良好(R2=0.998),精密度和重复性均良好,回收率101.2%。7个厂家产品的溶出度均大于80%,溶出度相似度f2因子值除1家企业外均大于50%,溶出行为基本相似。方法准确、可靠,可用于测定该制剂的溶出度。

气相色谱法测定破壁灵芝孢子粉类保健食品中8种残留溶剂

目的：建立直接进样气相色谱法测定破壁灵芝孢子粉类保健食品中8种有机溶剂残留量。方法采用Agilent DB-624（30 m ×0.53 mm，0.3μm）毛细管柱，氢火焰离子化检测器，柱温箱程序升温，对破壁灵芝孢子粉类保健食品中甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯的残留量进行检测。结果8种残留溶剂在19 min内得到较好分离。各残留溶剂在0.0034~4.5050 mg·mL-1范围内线性良好，相关系数均大于0.9997。各残留溶剂的回收率在93.00%~117.91%。结论该方法简便、快速、准确，适用于检测破壁灵芝孢子粉中8种有机溶剂的残留。