新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌种分布、药物敏感性及耐药基因初步分析

目的了解新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌株分布、药敏特征,探讨菌株对唑类抗真菌药的耐药机制。方法对分离自临床诊断深部真菌病患者的125株菌行形态学和分子生物学鉴定,分析念珠菌菌种分布特点、对9种抗真菌药的体外敏感性以及对唑类药物耐药菌株行ERG11和PDR1基因测序分析。结果鉴定成功的111株酵母菌株中,分离率在前三位的菌种次为白念珠菌(50.45%)、光滑念珠菌(18.02%)和热带念珠菌(15.32%)。药敏结果显示多数菌株对两性霉素B、5-氟胞嘧啶和棘白菌素类药物敏感,2株光滑念珠菌菌株对棘白菌素类药物耐药。白念珠菌对唑类药物体外敏感性较好,泊沙康唑和伏立康唑对光滑念珠菌和热带念珠菌的体外抑菌活性较低(<60%)。33株唑类耐药念珠菌(6株白念珠菌、14株光滑念珠菌、11株热带念珠菌、1株克柔念珠菌和1株近平滑念珠菌)中有9株存在ERG11基因错义突变,所有唑类耐药光滑念珠菌均存在PDR1基因错义突变。结论侵袭性念珠菌感染的主要致病菌为白念珠菌;棘白菌素类、两性霉素B、5-氟胞嘧啶对念珠菌整体的体外抑菌活性较好,唑类药物对光滑念珠菌和热带念珠菌的抑菌活性较低;念珠菌ERG11和PDR1基因突变可能与唑类耐药相关。

球形孢子丝菌刺激小鼠树突状细胞表达前炎症细胞因子的研究

目的本研究旨在观察分离于新疆的球形孢子丝菌临床株刺激小鼠树突状细胞(Dendritic cells,DCs)后不同炎症因子分泌表达的特征,初步预测这些炎症因子的功能。方法菌株来源于淋巴管型孢子丝菌病患者。将该菌配置成不同浓度的菌悬液(1×10^4个/mL^1×10^7个/mL),刺激小鼠DC(细胞悬浮液浓度1×10^6细胞/mL),分别收集6 h、24 h、48 h、72 h时细胞培养上清液,采用酶免法检测IL-1β、IL-6、IL-4、TNF-α、IFN-γ的含量表达。结果以最低浓度菌液(1×10^4个/mL)刺激DC,被刺激后的DC分泌了IL-1β、IL-6和TNF-α,不同时间点分泌量分别为:IL-1β(6 h:21.26±3.03;24 h:24.04±4.25;48 h:24.90±4.31;72 h:27.29±6.09)、IL-6(6 h:44.38±3.73;24 h:101.72±12.28;48 h:133.10±8.67;72 h:180.38±13.84)、TNF-α(6 h:860.36±20.64;24 h:356.03±11.46;48 h:457.43±17.39;72 h:1454.53±19.46),但是IFN-γ和IL-4未见分泌表达。IL-1β和IL-6分泌水平有随时间和剂量依赖而逐渐增高,但是TNF-α释放量呈现不规律表达。结论 DC参与了球形孢子丝菌感染的天然免疫应答,分泌的关键炎症因子是IL-1β、IL-6、和TNF-α,表达量为TNF-α> IL-6> IL-1β。其中IL-1β和IL-6分泌表达量具有时间和剂量依赖性。

梅毒螺旋体TpF1蛋白的克隆表达及鉴定

目的构建梅毒螺旋体TpF1n基因原核表达载体,表达重组TpF1n,为梅毒螺旋体感染与宿主炎症反应研究提供候选蛋白。方法采用全基因合成法构建原核表达载体pET-28a-TPF1n,表达重组TpF1蛋白,用重组TpF1蛋白刺激人单核巨噬细胞系THP-1,通过ELISA方法检测IL-1β的分泌水平变化。结果成功构建了pET-28a-TPF1n原核表达载体,转染大肠埃希菌后稳定表达约25 ku大小的重组TpF1蛋白。与空白组相比,TpF1蛋白干预组的IL-1β分泌水平显著升高。结论重组TpF1蛋白可显著诱导THP-1细胞分泌IL-1β,提示TpF1蛋白可作为梅毒螺旋体感染引起的宿主炎症反应研究中的候选蛋白,具有重要的应用价值。