采用BS-Ⅱ大孔离子交换树脂分离低分子肝素

采用HNO2降解法,通过控制降解过程中的pH和时间裂解低分子肝素,并经大孔离子交换树脂BS-Ⅱ对其进行分离纯化,用质谱法对其相对分子质量进行分析。结果表明：在pH3.5、4 h的降解条件下,降解得到低分子肝素。在0.34 mol/L NaCl、pH8.5的条件下吸附,4 mol/L NaCl、pH8.5条件下洗脱,其吸附率达97.2%,纯化后的低分子肝素抗凝活性为34.41 U/mg,比纯化前提高1.36倍,效价回收率达到85.24%。质谱分析表明,纯化所得低分子肝素的平均相对分子质量为8 411,67.45%集中分布在7 000-9 000段。

基于分子指导的原发灶不明肿瘤临床诊治实践的中国专家共识(2023年版)

原发灶不明肿瘤(carcinoma of unknown primary,CUP)的诊断对其治疗及预后有重要意义。目前,常规病理诊断仅能确诊20%左右的CUP,分子溯源是诊断预后不良CUP的重要手段,但其临床检测标准和应用范围尚缺乏统一认识。中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会、重庆市医学会精准医疗与分子诊断分会和重庆抗癌协会肿瘤标志物专业委员会组织相关专家,结合国内临床实践,参考国内外文献,从CUP的概述、诊治现状、分子诊断的样本及技术选择、分子诊断的临床应用等方面进行评述,经专家组讨论并形成6条专家共识,为CUP的分子溯源诊断和临床应用提供参考,以促进其诊断技术发展。

G-CSF在结肠炎相关结直肠癌中的表达

目的探索粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-CSF)在结肠炎相关结直肠癌小鼠模型中的表达情况,并研究小鼠结直肠部位G-CSF的细胞来源。方法利用致癌剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)和致炎剂葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导小鼠的结直肠癌,通过免疫组化方法检测G-CSF在炎症向肿瘤发展各阶段小鼠结直肠组织中的表达情况,利用免疫荧光方法检测小鼠结直肠部位与GCSF共定位的细胞。结果 AOM/DSS小鼠模型能良好地模拟结肠炎相关结直肠癌病程特点:本研究将其分为3个阶段,即AD1、AD2、AD3阶段。其中AD1阶段小鼠结直肠部位存在大量淋巴细胞的浸润,AD2阶段小鼠有不典型增生和腺瘤,AD3阶段小鼠结直肠出现原位癌病变。与正常小鼠相比,AD1、AD2、AD3阶段小鼠结直肠部位G-CSF表达升高,且AD2阶段表达水平最高;G-CSF与小鼠结直肠部位的上皮细胞共定位最广泛,只有少量的肌成纤维细胞和巨噬细胞能跟G-CSF共定位。结论本研究中AOM/DSS小鼠模型经历了正常黏膜→不典型增生→腺瘤→腺癌的发展过程,能够较好地模拟人由炎症性肠病逐步发展成结肠炎相关结直肠癌的病程;AD小鼠与正常小鼠相比表达较高水平的G-CSF,且AD2阶段G-CSF表达最高;AOM/DSS小鼠模型中,G-CSF主要由小鼠结直肠部位的上皮细胞分泌,部分巨噬细胞和肌成纤维细胞也可以产生G-CSF。

高通量测序在非小细胞肺癌基因突变研究中的应用

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)精准化诊疗相关的28种肿瘤驱动基因进行高通量测序,分析多基因突变与疾病临床特征的关系。方法收集重庆大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年10月396例NSCLC患者标本,对EGFR、ALK、ROS1、KRAS、NRAS、HRAS、PIK3CA、TP53、PTEN、BRAF、HER2、RET、MET等28种基因进行高通量测序分析。结果EGFR基因突变占基因突变总检出例数的35.35%,且基因突变频率最高的前5个基因占总突变的63.89%,表现出明显的肿瘤主基因突变聚集现象。EGFR基因亚型同样呈明显的主次分布规律,其中最常见的突变亚型是19del、L858R,分别占45.00%、41.43%。EGFR基因的19del、L858R和20ins 3个亚型多为单突变,而T790M、G719X、S768I、L861Q等亚型则常表现为共突变。T790M伴随L858R突变常常是原发性突变,T790M与19del共突变则常常是获得性突变。EGFR突变标本发生其他多基因突变的检出率显著低于无EGFR突变标本,可能是因为EGFR基因突变抑制了其他基因发生突变。结论高通量测序可高效检测NSCLC患者与靶向治疗相关驱动基因的突变情况,可为研究多基因突变的内在关系及突变负荷提供有效工具,为临床医生制订NSCLC患者的精准诊疗方案提供有力支撑。

ctDNA高通量测序临床实践专家共识(2022年版)

循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)高通量测序在肿瘤临床诊疗中发挥越来越重要的作用,但其临床检测标准和应用范围尚缺乏统一认识。中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会组织相关专家,结合国内临床实践,参考国内外文献,从ctDNA生物学特征、检测影响因素,ctDNA高通量测序检测结果的临床应用价值和范围,以及ctDNA高通量测序检测体系的标准化建设等方面进行评述,提出专家意见,经专家组讨论并形成7条专家共识,为ctDNA高通量测序的临床应用和检测提供参考,以促进ctDNA高通量测序的健康规范发展。

Sanger测序与ARMS-PCR在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的比较及应用评价

目的比较Sanger测序法与ARMS-PCR法检测肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的差异,评价两种基因突变检测方法用于目标人群的临床应用价值。方法收集2016年4-9月123例非小细胞肺癌(NSCLC)患者标本。用Sanger测序法与ARMS-PCR法检测EGFR基因第18～21号外显子基因突变,分析两种检测手段之间的方法学差异以及临床病理行为对基因突变的影响,随访并比较受检人群的生存状况。结果 Sanger测序法EGFR基因突变总检出率为36.6%(45/123),ARMS-PCR法基因突变总检出率为48.0%(59/123)。Sanger测序与ARMS-PCR两种方法在不同类型标本中的阳性率分别是手术标本:35.8%(19/53)与49.1%(26/53),穿刺标本:50.0%(11/22)与54.5%(12/22),纤维支气管镜标本:30.0%(3/10)与40.0%(4/10),胸水标本:31.6%(12/38)与44.7%(17/38)。EGFR基因突变多见于≤65岁(54.2%)、女性(61.0%)、非吸烟(60.6%)、腺癌(50.9%)人群。未接受靶向治疗组与接受靶向治疗的Sanger阳性患者组、ARMS-PCR阳性患者组的治疗效果差异均有统计学意义(X^2=4.797,P=0.029;X^2=7.270,P=0.007),Sanger组敏感突变患者与ARMS-PCR组敏感突变患者接受TKIs的疗效差异无统计学意义(X^2=0.141,P=0.708)。结论两种检测方法对NSCLC患者的靶向治疗决策均具有积极意义,但基于灵敏度更高、操作更简便的最优原则,ARMS-PCR法在临床实践中更具优势。

甲状腺癌分子标志物研究进展

近年来检出的甲状腺结节患者越来越多,多数甲状腺结节是良性的,可以采取保守治疗,但有5%~10%的甲状腺结节是恶性的,需要早期手术治疗,才能获得良好的预后。但是一般良、恶性结节的症状和体征无明显区别,极易误诊。目前甲状腺细针穿刺抽吸检查在一定程度上可以提高甲状腺癌诊断的准确性,但仍有部分不能明确诊断,存在一定的局限性。近年的研究发现大部分甲状腺癌存在一种或几种基因上的异常,而这些基因异常可作为潜在的标志物应用于甲状腺的诊断,也可以对患者的预后进行预测,还可以当作治疗靶点,对临床具有重要意义。本文主要对甲状腺癌新的潜在分子标志物研究进展展开综述。

miR-29b在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的检测结直肠癌组织和癌旁组织中miR．29b的表达水平，并分析其与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用实时定量PCR方法检测202例结直肠癌组织和癌旁组织中miR．29b的表达水平，分析其与结直肠癌患者临床病理特征和预后的关系。结果miR-29b在结直肠癌组织和相应癌旁组织中的相对表达量分别为-7．761±0．115和-7．150±0．137，其在结直肠癌组织中的表达量明显降低（P〈0．01）。miR-29b在有淋巴结转移的结直肠癌组织和无淋巴结转移的结直肠癌组织中的相对表达量分别为-7．528＋0．158和-7．988±0．164，其在有淋巴结转移的结直肠癌组织中的表达量明显升高（P〈0．05）。miR-29b在I～Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌组织中的相对表达量分别为-8．096±0．157、-7．592±0．165和-6．603±0．468，其表达量呈逐渐升高的趋势，且差异有统计学意义（P〈0．05）。单因素Cox回归分析显示，淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期与结直肠癌患者的预后有关（均P〈0．001）。多因素Cox回归分析显示，肿瘤分化程度和TNM分期是影响结直肠癌患者预后的独立因素（均P〈0．001）。结论结直肠癌组织中miR-29b的表达低于癌旁组织。miR-29b的表达与结直肠癌的淋巴结转移和TNM分期有关。miR-29b有可能作为提示结直肠癌淋巴结转移及恶性进展的潜在标志物。

微小RNA在胰腺癌患者血浆中的表达情况及临床意义

目的探讨微小RNA（miRNA）在胰腺癌患者血浆中的表达情况及临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测30例胰腺癌和26例健康志愿者血浆中miR-21、miR-210、miR-155、miR．20a、miR-25和miR-196a的表达水平，并分析miR-21、miR-210、miR-155、miR-20a、miR-25和miR-196a与CA19-9联合诊断胰腺癌的价值。结果miR-21、miR-210、miR-155、miR-20a、miR-25和miR-196a在胰腺癌患者血浆中的中位表达水平分别为1．65×10^6、5．98×10^4、2．83×10^3、3．47×10^6、2．76×10^6和1．03×10^3 copies／μl，正常对照者分别为4．08×10^5、2．54×10^4、8．55×10^2、1．79×10^6、9．32×10^5和4．67×10^2 copies／μl，差异有统计学意义（P〈0．05）。miR-21、miR-210、miR-155、miR-20a、miR-25和miR-196a的受试者工作特征曲线（ROC曲线）下面积分别为0．893、0．810、0．820、0．766、0．816和0．729，miR-21的诊断价值最高。miR-155与miR-25联合诊断胰腺癌的ROC曲线下面积为0．913（95％口为0．838～0．988），明显优于单独miR-155和miR-25的诊断价值。miR-210与CA19-9、miR-25与CA19-9联合诊断胰腺癌的ROC曲线下面积分别为0．960（95％凹为0～1．0）和0．942（95％CI为0．876～1．0），优于单独CA19-9的ROC曲线下面积（0．862，95％CI为0．748～0．975）。miR-210、miR-25分别与CA19-9联合时诊断的灵敏度和准确率均明显升高。结论miR-21、miR-155、miR-25和miR-210对胰腺癌的诊断价值值得进一步研究。

微小RNA-100表达与结直肠癌患者临床病理特征和预后的相关性

目的探讨微小RNA-100（miR-100）在结直肠癌组织中的表达情况及其与临床病理特征及预后的关系。方法采用实时定量PCR方法检测172例结直肠癌组织及癌旁组织中miR-100的表达水平，并分析其与临床病理特征及预后的关系。构建miR-100高表达结直肠癌HCT-8-miR-100细胞及对照HCT-8-NC细胞，采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖，采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况，采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果结直肠癌组织和癌旁组织中miR-100的相对表达水平分别为-6．185±1．921和-3．698±1．786，差异有统计学意义（P〈0．01）。有淋巴结转移和无淋巴结转移的结直肠癌组织中miR-100的相对表达水平分别为-5．706±1．809和-6．775±1．902，差异有统计学意义（P〈0．01）。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌组织中miR-100的相对表达水平分别为-7．267±1．888、-6．443±1．859、-5．923±1．796和-4．639±1．516，差异有统计学意义（P〈0．01）。高、中、低分化结直肠癌组织中miR-100的相对表达水平分别为-7．389±1．828、-6．095±1．843和-5．476±2．088，差异有统计学差异（P〈0．01）。生存分析显示，miR-100高表达组和低表达组患者术后随访41个月的生存率分别为78．0％和86．0％，差异无统计学意义（P=0．179）。细胞实验显示，miR-100高表达可抑制结直肠癌HCT-8细胞增殖，促进细胞凋亡和细胞迁移。结论miR-100表达与结直肠癌淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期有关。miR-100有可能作为提示结直肠癌淋巴结转移及恶性进展的潜在标志物。

聚乙二醇修饰的柔红霉素脂质体治疗白血病的实验研究

目的 探讨聚乙二醇（PEG）修饰的柔红霉素（DNR）脂质体（PL-DNR）治疗白血病的疗效及其毒副作用.方法 采用薄层水化法和主动载药法制备PL-DNR,测定理化指标,进行体外细胞增殖抑制实验,分析PL-DNR对白血病细胞的杀伤作用.利用L1210荷瘤鼠白血病模型评价PL-DNR的体内抑瘤效果.采用原位末端转移酶标记法分析药物对小鼠的心肌毒性.结果 PL-DNR粒径大小为（110±10）nm,包封率为94.21％.体外增殖抑制实验显示,PL-DNR的抑瘤能力随实验时间延长逐渐增强.体内药效学实验显示,PL-DNR抑瘤效果明显,PL-DNR组和DNR组的肿瘤体积分别为（433.71±234.77） mm3和（1 293.77±381.26） mm3,差异有统计学意义（P＜0.05）.PL-DNR组和DNR组的瘤重分别为（0.66 ±0.29）g和（1.25 ±0.43）g,差异有统计学意义（P＜0.05）.心肌毒性实验显示,PL-DNR组和DNR组小鼠的心肌组织中位凋亡细胞阳性指数分别为13.83％和42.67％（P＜0.05）.结论 与柔红霉素相比,PEG修饰的柔红霉素脂质体可提高原药对白血病的治疗效果,同时降低对心肌的毒副作用.

微RNA-223与微RNA-29c在乳腺癌中的表达及意义

目的研究微RNA(miRNA)-223与miRNA-29c在乳腺癌组织、癌旁组织(距离肿瘤边缘2 cm的非癌组织)以及乳腺癌细胞株中的表达情况,探讨miRNA-223、miRNA-29c的表达水平与乳腺癌患者临床病理特征之间的相关性。方法采用回顾性横断面研究方法,收集2013年7月至2014年1月经重庆市肿瘤研究所初次确诊为乳腺癌的新鲜穿刺的癌组织标本125例(有81例具有完整的临床病理资料),其中12例同时取了癌旁组织,并选择不同分子亚型的乳腺癌细胞株MCF-7(ER阳性)、MDA-MB-231(三阴性)和SKBR3(HER-2阳性),利用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织及各乳腺癌细胞株中miRNA-223与miRNA-29c的表达水平。采用配对样本t检验分析12例乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-223与miRNA-29c表达水平的差异,采用Pearson相关分析乳腺癌组织中miRNA-223和miRNA-29c表达水平的相关性,并采用独立样本t检验分析其中81例临床病理资料完整者乳腺癌组织中miRNA-223与miRNA-29c表达水平与临床病理特征之间的关系,采用单因素方差分析比较3种乳腺癌细胞株之间miRNA-223和miRNA-29c表达水平的差异,组间两两比较采用LSD-t检验。结果乳腺癌组织中miRNA-223与miRNA-29c的表达水平均明显低于癌旁组织(miRNA-223:2.27±0.75比9.34±3.24,miRNA-29c:0.69±0.40比2.58±0.75,t=6.763、11.354,均P<0.001);miRNA-223与miRNA-29c在乳腺癌组织中呈正相关关系(r=0.737,P<0.001);乳腺癌组织中miRNA-223表达与肿瘤部位有关,左侧乳腺癌患者miRNA-223表达水平高于右侧乳腺癌患者(t=2.032,P=0.046),但miRNA-29c表达与乳腺癌患者肿瘤部位无关(t=-0.587,P=0.559);并且,乳腺癌组织中miRNA-223和miRNA-29c表达与患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期以及ER、PR、HER-2、Ki67、p53表达均无关系(t=-0.079、0.220,-0.227、0.899,-1.355、-0.544,-1.482、-0.338,-0.487、0.429,0.395、1.432,-1.432、-1.318,-0.049、-0.307,-0.330、1.234,P均>0.050)。miRNA-223在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7和SKBR3中的表达水平分别为2.16±0.28、0.93±0.24和0.57±0.15,3组间差异有统计学意义(F=39.224,P<0.001),其中,miRNA-223在高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达水平显著高于MCF-7和SKBR3(P均<0.050);并且,miRNA-29c在乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231和SKBR3中的表达水平分别为0.54±0.04、0.44±0.06和0.41±0.04,3组间差异也有统计学意义(F=6.652,P=0.030),其中,miRNA-29c在弱侵袭性乳腺癌细胞株MCF-7中的表达水平高于MDA-MB-231和SKBR3(P=0.034、0.013)。结论 miRNA-223和miRNA-29c可作为乳腺癌辅助诊断潜在的生物标志物,并且,两者与乳腺癌的分子分型相关。