人兽共患华支睾吸虫病诊断方法概述

华支睾吸虫寄生于人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内,造成肝胆的一系列疾病,是一种重要的人兽共患寄生虫病。传统的病原学、免疫学诊断方法,以及其它新方法都有各自的优缺点,选择快速、准确的诊断方法对防治本病十分重要。本文对华支睾吸虫病的诊断方法作一概述。

棕熊蛔虫ITS rDNA的PCR扩增与序列分析

目的以核糖体DNA（rDNA）的第一与第二内转录间隔区序列（ITS-1及ITS-2）鉴定从广州动物园棕熊分离的蛔虫种类。方法应用PCR方法以保守引物NC5和NC2扩增蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA序列，将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-TEsay载体，用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落，对阳性菌落进行测序，并与Gen．Bank“公布的人蛔虫（Ascaris lumbricoides）、猪蛔虫（Ascariis suum）、浣熊贝利斯蛔虫（Baylisascaris procyonh）及狮弓蛔虫（Toxascaris leonina）ITS序列比较。结果从棕熊分离的2个蛔虫样本的ITS及5．8SrDNA总长为859—861bp，种内相似性为99．7％，与GenBank^TM公布的人蛔虫、猪蛔虫、浣熊贝利斯蛔虫及狮弓蛔虫的相似性分别为84．6％、84．5％、89．3％及72．3％，序列差异明显。结论棕熊蛔虫不同于上述种类蛔虫，可能为Baylisacaris transfuga.

猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

将猫的心、脑、舌用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种小白鼠,经连续传代分离弓形虫虫株,用特异PCR方法对所分离的虫株进行了鉴定。分别从24只猫的样品中分离出8株弓形虫虫株,用弓形虫种特异的PCR方法对8个虫株进行鉴定,均得到弓形虫的特异条带;测序证明所扩增出的DNA片段确为弓形虫的核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS-1)部分序列。研究结果表明,将动物组织用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种小白鼠是一种分离弓形虫虫株较为理想的方法,特异PCR方法能准确、快速地鉴定弓形虫虫株。

长颈鹿血矛线虫ITS的PCR扩增与序列分析

目的利用分子生物学方法对来自长颈鹿皱胃的血矛线虫进行虫种鉴定。方法对样品XM9和XM11的核糖体DNA内转录间隔区(ITS-1、5.8 S、ITS-2)进行PCR扩增及序列分析,并与GenBank公布的血矛线虫(Hae-monchus)相应序列进行比较。结果来自长颈鹿皱胃的2条血矛线虫具有相同的ITS序列,5.8 S与ITS-1分别为153 bp、404 bp,与GenBank分布的捻转血矛线虫序列是一致的。ITS-2序列为231 bp,第753位是一个多态位点,该序列与来自国外的H.contortus,H.placei,H.longistipes存在0-18个碱基差异。结论来自长颈鹿的血矛线虫是捻转血矛线虫。

绒山羊和绵羊源东毕吸虫ITS rDNA的PCR扩增及序列分析

目的扩增绒山羊和绵羊源东毕吸虫的ITS rDNA序列并进行分析比较。方法运用PCR方法,以保守引物BD1和BD2扩增从黑龙江绒山羊和绵羊体内分离的东毕吸虫(Orientobilharzia spp.)rDNA的内转录间隔区(ITS-1及ITS-2)。PCR产物经测序后进行序列分析。结果黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列总长均为875bp,其中ITS-1序列长为384bp,5.8S序列长为159bp,ITS-2序列长为332bp。黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列相似性为99.9%,只有一个碱基差异,存在于ITS-2序列中。结论本研究在国际上首次报道了绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列,证实绒山羊和绵羊源东毕吸虫代表同一个种。这些结果为东毕吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础,并为寄生虫分子系统学研究提供了新资料。

玉米根尖微粒体脱落酸结合蛋白的分离纯化与鉴定(简报)

以玉米根尖为材料,经匀浆,分级离心得到微粒体,用丙酮、Triton X-100分步抽提得到富含脱落酸(ABA)结合蛋白的粗制品,再过ABA-BSA-Sepharose 4B亲和层析柱,用7mol/L尿素解脱得到纯化的ABA结合蛋白。ELISA阻断试验结果表明,玉米根尖微粒体ABA结合蛋白粗制品能部分阻断抗体对ABA-OA的结合,而经亲和层析得到的ABA结合蛋白高浓度能完全阻断抗体对ABA-OA的结合反应。

黄瓜根尖微粒体吲哚乙酸结合蛋白的分离纯化与鉴定

用黄化黄瓜苗根尖为材料,经匀浆、分级离心得到微粒体,然后经丙酮分步抽提得到含有吲哚乙酸(IAA)结合蛋白粗制品,再经IAA-BSA-Sepharose 4B亲和层析,用3mol/L KCNS解脱,得到纯化的IAA结合蛋白。ELISA试验结果表明,该结合蛋白能完全阻断IAA多克隆抗体对IAA-OA的结合反应,并且能竞争抑制IAA多克隆抗体与游离IAA的结合。

脱落酸抗体的抗独特型抗体的制备与鉴定

用ABA多克隆抗体(Ab_1)以金黄色葡萄球菌菌体(SPA)作为载体,免疫家兔,制备的抗独特型抗体(Ab_2)初步纯化后用ELISA试验鉴定其特异性的结果表明,该抗独特型抗体具有良好的特异性,能阻断ABA抗体对ABA的结合反应,并与ABA结合蛋白结合,暗示其有模拟抗原的作用。 Jerne的免疫网络学说认为,特异性抗体(Ab_1)可变区中的独特型决定簇(Id)可诱导抗独特型抗体(Ab_2)的产生,Ab_2中的一部分可以模拟抗原的作用。Sege和Peterson提出,

用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒（ｒａｂｂｉｔｈａｅｍｏｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，简称，ＲＨＤＶ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的，从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中，不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体（Ａｂ１）的细胞克隆，同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａｂ２）的杂交瘤细胞，用抗原而不用单克隆抗体（Ａｂ１）免疫。