高三尖杉酯碱对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及机制研究

目的探究高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对人黑色素瘤A375增殖的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测HHT对A375细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察染色质凝集情况;细胞克隆形成实验检测HHT对A375细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测HHT对A375细胞凋亡和周期影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-PARP、CyclinB1和CDK1蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,随着药物的剂量(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μmol·L^-1)和作用时间(24、48、72 h)增加,HHT对A375细胞的抑制作用逐渐增强;Hoechst 33258染色和FCM结果显示,HHT可使A375细胞染色质呈凋亡形态改变,促进细胞凋亡,将A375的细胞周期阻滞于G2/M期;克隆形成实验显示,HTT可以抑制A375细胞的克隆形成能力;Western blot结果表明HHT可下调CyclinB1、CDK1和Bcl-2蛋白水平,上调Bax,Cleaved-caspase 3和Cleaved-PARP蛋白表达水平。结论HHT使A375细胞阻滞于G2/M期,抑制A375细胞增殖;HHT可激活线粒体凋亡信号通路,诱导黑色素瘤A375细胞凋亡。

高三尖杉酯碱对小鼠黑色素瘤细胞增殖和迁移的影响和机制探讨

本研究探讨了高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)对小鼠黑色素瘤细胞B16F10增殖和迁移的影响及可能的机制。不同浓度HHT处理体外培养的B16F10细胞,CCK-8法检测HHT对细胞活力的影响;细胞克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测HHT对细胞周期的影响;Transwell实验检测HHT对B16F10迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测周期及迁移关键蛋白的表达水平。

熊果酸联合HDAC2抑制剂抑制人肝癌细胞系HepG2的增殖

目的探讨熊果酸(UA)联合HDAC2抑制剂(SA)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及潜在作用机制。方法通过CCK-8法、光学显微镜观察、细胞克隆形成实验及流式细胞术检测UA和SA单用和联合作用于HepG2细胞后对细胞增殖的抑制作用,Western blot检测细胞内HDAC2、AC-α-tubulin、CDK2、CDK1、Bax、Bcl-2和cleaved-PARP的表达。结果UA对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);UA可以抑制HepG2细胞克隆形成能力,联合SA后抑制作用更为显著(P<0.01);UA联合SA可使HepG2细胞周期阻滞于G1期(P<0.01);HDAC2在肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和PLC5中高表达,UA联合SA可以明显下调HepG2细胞中HDAC2、Bcl-2、CDK2和cyclin E1蛋白的表达水平,同时上调AC-α-tubulin、Bax和cleaved-PARP蛋白表达水平。结论UA联合SA应用对HepG2细胞的增殖具有协同抑制作用。

高三尖杉酯碱激活ATM/p53通路抑制人肝癌细胞PLC5增殖

目的探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对肝癌细胞PLC5增殖的影响及其可能的机制。方法采用CCK-8以及EdU检测HHT对PLC5细胞增殖的影响;流式细胞术检测HHT对PLC5细胞周期的影响;Western blot检测周期相关蛋白CyclinA、CDK2、p21以及p53、ATM的表达。结果CCK-8结果显示,HHT(0、5、10、20、40、80μg·L^(-1))分别作用PLC5细胞24、48、72 h后,HHT对PLC5细胞的抑制率明显升高,且呈现浓度和时间依赖性;EdU结果显示,经HHT作用后,PLC5细胞增殖能力明显减弱;流式细胞结果显示,HHT可将PLC5细胞阻滞在S期;Western blot结果显示,HHT可上调PLC5细胞中p21、p53以及ATM的蛋白水平,并下调PLC5细胞中CyclinA、CDK2的蛋白水平。结论HHT可诱导PLC5细胞发生DNA损伤,激活DNA损伤修复信号通路,阻滞细胞周期,从而抑制细胞增殖。

鸦胆子苦醇通过RhoA/ROCK1信号通路抑制人结直肠癌细胞HCT-116的侵袭和迁移

目的探讨鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对结直肠癌细胞HCT-116侵袭和迁移的影响和可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的BRU对HCT-116细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测BRU对HCT-116细胞迁移能力和侵袭能力的影响;Western blot检测BRU和ROCK抑制剂(Y27632)对HCT-116细胞中迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9和RhoA、ROCK1表达的影响。结果CCK-8结果显示,经过BRU(0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 nmol·L^(-1))处理HCT-116细胞24、48、72 h后,BRU对HCT-116细胞的抑制率明显升高,并且呈浓度和时间依赖性;划痕和Transwell实验结果显示,BRU能明显抑制HCT-116细胞的迁移和侵袭能力;Western blot结果表明,BRU和Y27632都能够明显减少HCT-116细胞中的MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1蛋白的表达。结论BRU可能通过RhoA/ROCK1通路抑制结直肠癌细胞HCT-116的迁移和侵袭。

二甲双胍激活AMPK/p53调节尿素循环抑制结肠癌HCT116细胞增殖

目的探讨二甲双胍(metformin,Met)对HCT116细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成的能力;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和凋亡率;免疫荧光染色观察磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(p-AMPK)的定位情况,Western blot检测p-AMPK、AMPK、p53、p-p53、精氨酸酶1(ARG1)、鸟氨酸转氨甲酰酶(OTC)和鸟氨酸脱羧酶(ODC)的表达情况。结果 CCK-8结果显示:Met呈浓度和时间依赖性抑制细胞的增殖;FCM结果显示:Met能诱导细胞发生凋亡,将细胞周期阻滞于G1期;克隆形成实验显示:Met可以抑制细胞的克隆形成能力;经免疫荧光染色可知:Met处理组细胞胞质及胞核内p-AMPK的表达增加;Western blot结果显示:p-AMPK、p53、p-p53蛋白的表达上调,ARG1、OTC、ODC蛋白的表达下调。结论 Met可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,诱导G1期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡;其可能的机制与激活AMPK、p53信号,抑制尿素循环ARG1、OTC和多胺生成限速酶ODC的表达有关。

鸦胆子苦醇抑制H1299非小细胞肺癌细胞增殖和促进其凋亡的机制

目的研究鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对H1299非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法使用CCK-8法与EdU实验检测BRU对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测BRU对细胞克隆形成的影响;Hoechst33258染色实验与流式细胞仪观察细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2、Bcl-xL、cleaved-caspase-3、caspase-3、Gadd45α、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、细胞核与胞质中NF-κB-p65的蛋白质水平。结果CCK-8实验发现,随着BRU浓度与作用时间的增加,H1299细胞受到的抑制作用逐渐增强;EdU实验显示,BRU处理组的EdU掺入率明显下降;克隆形成实验结果显示,BRU能抑制H1299细胞的克隆形成能力;Hoechst33258实验与流式细胞仪检测发现,BRU能使H1299细胞胞核呈现凋亡状态并增加其凋亡率;Western blot显示BRU可上调Bax、cleaved-caspase-3、Gadd45α,下调Bcl-xL、Bcl-2、caspase-3、p-PI3K、p-Akt与胞核中p65的蛋白质水平。结论BRU以浓度和时间依赖抑制H1299细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活并抑制NF-κB-p65的核转运有关。

高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖

黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC50)分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC50分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G0/G1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。

二甲双胍激活AMPK/p53调节尿素循环抑制结肠癌细胞增殖

本研究探讨二甲双胍(metformin,Met)对结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用及可能的机制。不同浓度Met处理体外培养的结肠癌细胞HCT116,CCK-8法检测Met对细胞活力的影响;细胞克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;免疫荧光观察磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(p-AMPK)的表达分布,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测AMPK/p53及尿素循环关键酶的表达水平。结果表明:10~80mmol/L浓度的Met对HCT116细胞有明显的生长抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;10~40mmol/L浓度的Met能不同程度诱导细胞发生凋亡,并诱导肿瘤细胞G1期周期阻滞;Met处理组HCT116细胞胞浆及胞核内p-AMPK的表达增加;Met使细胞p-AMPK、p53蛋白表达水平上调,尿素循环酶精氨酸酶1(ARG1)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白的表达下调。

提升核心竞争力促进我国公路交通监理企业的发展

在开展交通基础建设的过程中,公路交通监理在占据着重要位置。当前,公路交通监理企业的核心竞争力会直接影响其实际发展情况,管理人员应认识到提升企业竞争力的价值,以促进企业可持续发展。基于此,本文首先分析传统公路工程监理中存在的问题,然后探讨核心竞争力的特点,最后提出促进发展的策略,以供参考。