湖南沙子岭猪SLA-DR基因克隆及生物信息学分析

为了克隆湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,分析SLA基因特性和抗原多态性,评价湖南沙子岭猪在异种移植中的应用前景奠定基础。应用RT-PCR分别扩增湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,鉴定后克隆到PUCm-T载体并进行测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY中相关软件进行生物信息学分析。得到的湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因特异性基因片段,大小分别为1 177 bp和909 bp。生物信息学分析发现,所扩增的SLA-DRA和SLA-DRB基因片段均包含完整的开放阅读框,分别编码252和266个氨基酸残基。将湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB基因在GenBank登录,登录号分别为EF143987和EF143988。同源性分析发现,湖南沙子岭猪SLA-DRA和SLA-DRB与人类相应的DRA、DRB相比,核苷酸序列同源性分别为83%和83%,编码氨基酸同源性分别为83%和79%。与GenBank登录的其他猪种相比,SLA-DRA基因同源性最高可达100%,而SLA-DRB基因具有多态性。

非酒精性脂肪肝肝脾CT值比值与肝功能及血脂关系的分析

目的探讨非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者肝脾CT值比值与肝功能及血脂的关系。资料与方法对132例NAFLD患者分别行CT平扫、肝功能及血脂检测,然后根据肝功能及血脂有无异常进行分组。结果 132例NAFLD患者,肝功能正常54例,肝功能异常78例;血脂正常45例,血脂异常87例。肝功能正常组与异常组其肝脾CT值比值有差异;血脂正常组与异常组其肝脾CT值比值亦有差异;肝脾CT值比值与甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)呈明显负相关(P<0.01),与高密度脂蛋白(HDL)呈正相关(P<0.01);而与丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)无相关性(P>0.05)。结论 NAFLD肝脾CT值比值与血脂密切相关,而与肝功能氨基转氨酶的变化无明显相关性。

CD4＋T细胞抗体标记超顺磁性氧化铁MR成像诊断异种胰岛移植免疫排斥反应的实验研究

目的探讨利用抗人分化抗原簇（CD）4＋T细胞抗体标记的纳米免疫超顺磁性氧化铁（SPIO）作为MRI生物探针，诊断胰岛细胞移植后免疫排斥反应的可行性。方法27只BALB／C裸鼠，每只左肾被膜下移植分离纯化后的猪胰岛细胞2000个，3周后MRI可观察到肾包膜下移植物大小，然后采用数字表法随机将实验动物分为实验组（21只）和对照组（6只）。将人T淋巴细胞注入实验组鼠腹腔内重建人的T淋巴细胞免疫系统，其中20只重建成功。实验组动物免疫系统重建前及重建后3、7和14d，经尾静脉注射纳米免疫SPIO，30min后行MRI T2WI，观察移植物的MRI信号改变。MRI结束后立即安乐死方法牺牲动物，取下左肾行移植物病理组织检查；对照组动物胰岛细胞移植后，不进行免疫处理，与实验组动物相同时间点给予相同检查。并以病理检查为金标准，用临床诊断一致性检验计算MRI对异种胰岛细胞移植后免疫排斥反应诊断的灵敏度、特异性、Youden指数和符合率。结果2组动物在移植胰岛细胞3周后MRI可显示移植物。实验组BALB／C裸鼠，重建免疫系统前及重建成功后3d注入纳米免疫SPIO，MRI移植物局部未见异常信号；免疫系统重建成功后7d，MRI显示移植物对应区域信号减低，苏木精-伊红及CD4＋T免疫组织化学染色显示移植物局部大量淋巴细胞浸润，提示免疫排斥反应发生。对照组动物移植物所有MRI均未见异常；病理组织学检查移植物局部未见炎性细胞浸润。MRI对免疫反应检测的灵敏度、特异度、Youden指数和符合率分别为：（72．96±0.24）％、100％、0．73±0．24、（88．46±0．13）％（Kappa值为0．76）。结论通过抗人CD4＋T细胞抗体标记的纳米免疫SPIO生物探针MRI，可以检查异种胰岛细胞移植后免疫排斥反应，并能早期、实时、无创性的对移植受体免疫排斥反应进行诊断。