淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核技术及其应用前景

淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核法是检测人及动物细胞在Cyt-B作用后形成的双核CB细胞中的微核,它克服了常规培养微核法在细胞动力学上存在的问题,确保检测第一次分裂后细胞中的微核.该法比常规培养微核法准确、敏感,预计不久将有可能取代常规培养微核法.

用损益指数综合评价大豆营养保健功效及安全性

目的:通过玉米低营养饲料建立动物模型系统,提出损益指数(BDI)的概念,并进行累积积分(GS),建立食品功效安全的BDI-GS新评价体系。方法:本体系以处于生长期正常ICR小鼠为研究对象,综合评价食物的营养、保健功效及安全性。以单纯普通玉米饲料喂食小鼠作空白对照组,大豆制成玉米掺和饲料为阳性受试物实验组,通过动物整体实验,取小鼠体质量、9项脏器组织质量、系数及其BDI和GS等指标,并进行血清生化指标分析测试,考察BDI-GS评价体系在食物营养、保健功效及安全性综合评价方面的合理性、科学性和可行性。结果:体质量变化趋势及体质量、脏器质量BDI大小,可初步判定大豆有一定的营养功效;脏器系数BDI和BDI累积积分说明大豆有保健功效,尤其是胸腺系数BDI,随着剂量的增加有增加趋势,且有显著性统计学差异(P<0.01)。结论:通过本研究建立一种直观、全面、简单、经济的综合评价不同类别食物及饮品功效安全的新评价体系和方法。

采用Gateway^(TM)系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体

目的采用GatewayTM技术构建人Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-hRb94)。方法从人类胚胎中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA,PCR扩增Rb94目的基因片段。设计含有attB侧翼序列的引物,用于重组片段的PCR扩增,在BP重组酶的作用下,将含attB位点的PCR产物与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与带attR1、at-tR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST体外重组形成表达克隆Ad-hRb94。经PCR和测序鉴定,将Ad-hRb94线性化后转入293A细胞进行病毒的包装、扩增及病毒滴度测定。结果经PCR和测序证实目的基因Rb94片段按正确方向重组入目的载体中,带Rb94基因的目的载体在293A细胞中包装成功,获得高滴度的病毒颗粒,滴度为9.41×1010pfu/ml。结论本实验利用GatewayTM技术成功构建了Ad-hRb94,为进一步进行肿瘤基因治疗研究奠定了实验基础。

单细胞凝胶电泳技术对离体和整体照射致细胞DNA断裂的一致性研究

目的探讨整体照射与离体照射导致小鼠淋巴细胞DNA双链断裂的一致性,作为单细胞凝胶电泳技术应用于辐射生物剂量学的前期研究。方法采用双层铺胶法进行中性单细胞凝胶电泳,观察小鼠淋巴细胞整体与离体照射后的DNA双链断裂,用CASP软件分析彗星图像,SPSS12.0进行数据的统计学分析。结果彗星头部DNA%(HDNA%)、尾部DNA%(TDNA%)、彗星全长(CL)、尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)在整体照射和离体照射组之间的差别均无显著性。结论离体血γ射线照后即刻进行中性单细胞凝胶电泳,可以客观准确地反映整体照射的淋巴细胞DNA双链断裂损伤。

用稳定性染色体畸变作为医用诊断X射线工作者生物剂量估算的研究

用Ｇ－显带法对不同时期从事医用诊断Ｘ射线男性工作者的稳定性染色体畸变进行了分析，估算其累积剂量。结果表明：４４例Ｘ射线组的４４１７个中期中，稳定性染色体畸变率和总畸变率分别为０．０２２和０．０３２畸变／中期相，均比对照组明显增加，稳定性畸变占总畸变的６９％，相互易位占稳定性畸变的５７％。若按放射工龄分组，看出易位率、稳定性畸变率均随工龄增加而增加，以１９７０年前的两组增加得更为明显（Ｐ＜０．００５）。根据Ｓｔｒａｕｍｅ等推荐的计算剂量公式，粗略估算出从事放射性工作年限１９６０年前，１９６０～１９６９和１９７０年后三个组的群体累积剂量分别为０．５８、０．３７和０．０７Ｇｙ。

用荧光原位杂交技术对医用诊断X射线工作者染色体畸变的研究

目的 用荧光原位杂交 (FISH)技术研究小剂量职业受照者的辐射损伤远期效应。方法 用 4号和 7号全染色体探针 ,分析 2 5名早期X射线工作者和 10名对照者外周血淋巴细胞染色体畸变 ,并用Giemsa染色验证。结果 X射线工作者的易位占其染色体总畸变的 84% ,其他各种畸变率分别为插入 (Ins) 2 % ,双着丝粒 (Dic) 5 %和无着丝粒断片(Ace) 10 % ;X射线工作者的染色体易位率和总畸变率均明显高于对照组 (P <0 0 1) ,染色体易位随着放射工龄增加而增加。 1965年前工作的X射线工作者的染色体易位与同期对照组相比 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1) ;1965年后工作的X射线工作者的染色体易位与同期对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。

腺病毒介导人Rb94基因对食管癌细胞的生长作用观察

目的观察含有视网膜母细胞瘤（Rb）94基因的重组腺病毒表达载体（Ad-Rb94）对人食管癌细胞生长的抑制作用。方法将Ad-Rb94于体外转染食管癌细胞EC-9706（Ad-Rb94组）,设对照腺病毒组（Ad-lacZ组）和空白对照组,用MTT比色法和流式细胞仪观察EC-9706细胞的生长曲线和细胞周期。结果Ad-Rb94组EC-9706细胞在转染后第3天开始生长缓慢,在转染后第5天本组细胞的生长与Ad-lacZ组和空白对照组相比明显受抑制（P〈0.05）。Ad-Rb94组G1期细胞比空白对照组增加14%-19%,G2期和S期细胞分别减少4%-6%和10%-13%。结论腺病毒介导的外源性Rb94基因可有效转染人食管癌细胞,并对其生长有抑制作用。

Rb94基因联合放射治疗对卵巢癌细胞生长的影响

目的:探讨外源性Rb94基因联合放疗对卵巢癌细胞生长的抑制作用,为肿瘤的Rb94基因-放射治疗提供实验依据。方法:应用携带Rb94基因的复制缺陷型腺病毒(Ad-Rb94)于体外转染卵巢癌细胞株ES-2,用MTT比色法和流式细胞术观察Rb94基因联合放疗后ES-2细胞的生长曲线和细胞周期的变化。结果:Ad-Rb94基因组、单纯放疗组和Ad-Rb94基因联合放疗组ES-2细胞生长均明显受到抑制,与Ad-lacZ组和空白对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。其中联合放疗组ES-2细胞生长最为缓慢,与Ad-Rb94基因组和单纯放疗组比较均有显著性差异(P<0.05)。Ad-Rb94组和放疗组大量的ES-2细胞停留在G1期,而G2期和S期细胞明显减少,联合治疗组细胞停留在G1期最多。结论:腺病毒介导的外源性Rb94基因可明显抑制ES-2细胞的生长,与放射治疗联合应用具有相加和协同效应。

一种快速、灵敏测定人体HPRT基因位点的改进方法

人体外周血淋巴细胞中抗6-硫代鸟嘌呤(6-TG^r)突变体是在HPRT基因位点上的突变细胞,具有稳定的6-TG^r表型。当胞体中HPRT基因改变时,通过检测人体外周血中6-TG^r出现的频度,就可确定体细胞的突变频度。该位点的控制基因定位于X染色体长臂末端。目前研究已表明某些肿瘤患者、接触过环境中各种诱变剂的人群(肿瘤病人化疗后)和电离辐射者等,其突变频度都可增高,且与剂量之间有一定的依赖关系。

低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后血清中抗氧化酶活性的影响

目的 观察低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后血清中抗氧化酶活性的影响。方法 采用化学比色法测定不同照射时相点血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 -S转移酶 (GST)和过氧化氢酶 (CAT)活性。结果 低剂量全身照射组血清中SOD、GST、CAT活力高于相应对照组 ;低剂量 +局部放疗组 (d3d5)血清中SOD、GST、CAT活力显著高于局部大剂量组 (c3,c5) ;尤以连续三天照射组明显。

联苯双酯对小鼠骨髓细胞辐射损伤的防护作用研究

目的探讨联苯双酯对辐射致小鼠骨髓细胞损伤的防护作用。方法体外无菌分离小鼠骨髓细胞,联苯双酯孵育30 min后给予1 Gy照射,18 h后观察对骨髓细胞的细胞活力、细胞凋亡以及活性氧水平的影响。体内实验C57小鼠分为四组,对照组、联苯双酯组、照射组和照射给药组。其中照射组和照射给药组给予4 Gy全身照射,对照组和联苯双酯组给予假照射(0Gy)。联苯双酯组和照射给药组在受照后灌胃联苯双酯(450 mg/kg),持续给药7 d,对照组和联苯双酯组给予相同体积的生理盐水。在照射第9天取骨髓细胞,计数单侧股骨骨髓细胞数量以及观察骨髓细胞的凋亡、活性氧水平以及克隆形成能力。结果体外实验中,联苯双酯在5μmol/L有一定的保护作用。在给予1 Gy照射后18 h,与对照组相比,照射组细胞活力显著下降、凋亡率以及活性氧水平显著升高(P<0.05);与照射组比较,照射给药组中联苯双酯可提高受照骨髓细胞的细胞活力,降低骨髓细胞凋亡率和活性氧水平(P<0.05)。体内实验中,与对照组比较,照射组可显著降低骨髓细胞计数和克隆形成能力,提高骨髓细胞活性氧水平(P<0.05);与照射组比较,照射给药组中联苯双酯可显著改善骨髓细胞克隆形成能力,降低骨髓细胞活性氧水平。结论联苯双酯可降低骨髓细胞活性氧水平,对骨髓细胞辐射损伤有一定的防护作用。

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯对辐射和化学损伤小鼠的防护作用及其雌活性的实验研究

采用我所自行合成的新型雌激素类化合物17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯,观察其对受致死剂量(8.0 Gy)137Csγ射线照射IRM-2小鼠30 d存活率的影响,以及药物对注射环磷酰胺(CY)所致的IRM-2小鼠造血系统损伤的保护作用,比较了其与炔雌二醇(EE2)对昆明种雌性小鼠的雌活性。结果表明,5 mg/kg7、.5 mg/kg、10 mg/kg三个不同剂量17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯药物注射组,30 d存活率分别比单纯照射对照组提高55%、85%、75%(p<0.01),保护指数分别为1.99、2.56、2.46;同时,药物可明显保护环磷酰胺所致的小鼠造血系统功能的损伤。与EE2相比,该药物雌活性约为其1/10000。因此,17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯对γ射线及化学药物损伤均有明显的保护作用,而且该药的雌活性低,毒副作用小。

低剂量γ射线照射诱导小鼠骨髓细胞染色体畸变的适应性反应

目的 探讨低剂量照射后不同攻击剂量对小鼠骨髓细胞染色体畸变的适应性反应。方法 小鼠预先用13 7 Csγ射线 0 0 5Gy(D1,预照射剂量 )低剂量全身照射 (低剂量照射组 )、剂量率 0 0 5 4Gy/min ,3h后再接受 0 7Gy或 1 0Gy(D2 ,攻击剂量 )全身照射、剂量率 0 87Gy/min ,同时设单纯较大剂量组为对照组 ,观察骨髓细胞染色体畸变率。结果 0 0 5Gy低剂量全身照射后 3h再接受 0 7Gy或 1 0Gy全身照射组 ,小鼠骨髓细胞染色体畸变率和单体断裂 (ctb)均明显低于其相应对照组 ,而与对照组相比 ,低剂量照射组断片 (ace)减少不明确。结论 预先的低剂量辐射能够诱导小鼠骨髓细胞染色体畸变的适应性反应 ,从而使随后较大剂量辐射所致的染色体损伤减轻。

G显带法验证FISH分析X射线工作者染色体易位畸变

目的 FISH是分析染色体畸变的有效方法 ,该方法的准确性受多种因素影响 ,用G显带方法验证FISH对早先X射线工作者染色体易位分析。方法 对X射线工作者同时采用两种方法分析染色体易位 ,进行统计学分析比较。结果 两种方法分析染色体易位率有很好相关性。结论 FISH方法是分析X射线工作者染色体易位率进行剂量重建的可行方法。

辐射诱发人淋巴细胞微核率的研究──方法学及剂量效应关系

本文用三水平正交试验设计对影响胞质分裂阻断微核法（ＣＢＭＮ）的三因素进行了研究。结果表明：细胞松弛素Ｂ（Ｃｙｔ－Ｂ）加入时间３６－４４小时，终浓度６μｇ／ｍｌ，７２小时收获细胞时为最佳组合方案。根据此方案，用￣（１３７）Ｃｓγ线０．１、０．２、０．３、０．４、１、２、３和４Ｇｙ照射人离体淋巴细胞，可以看出，微核率和细胞微核串均随剂量增加而明显增长，用微核率拟合回归方程分别为：在低剂量区段为Ｙ＿（ＭＮＦ）＝５．７３＋５７．３３Ｄ；而中高剂量则为Ｙ＿（ＭＮＦ）＝４．０６＋３６．２８Ｄ＋２０．００Ｄ￣２。

某钴源事故受照者的早期生物剂量估算和细胞遗传学动态变化的追踪观察

目的 用染色体畸变分析法对某钴源事故受照者进行了生物剂量估算和细胞遗传学的动态观察。方法 用本室细胞培养制片法略加改进 ,用泊松分布检验受照者的照射状况。结果 根据照后 11d“双 +环”频率推算“天”和“旺”的生物剂量分别为 2 .41和 2 .17Gy ,该剂量与物理剂量和临床诊断是相吻合的。“双 +环”的变化 ,随时间推移而下降 ,到 2a时 ,仍高于本底水平。

SCGE作为辐射生物剂量计的可行性研究

单细胞凝胶电泳技术建立于20世纪80年代,用于检测单个细胞的DNA损伤。放射生物学研究表明,该技术可用于检测精子细胞、肿瘤细胞和淋巴细胞等哺乳动物细胞受照后的DNA损伤。近年来,随着科学技术的不断进步,各种有关软件的深层开发,使得这一技术增添了许多新的内涵。尤其在照后早期,较其他传统生物剂量学技术具有明显优势,用于放射生物剂量学研究将有良好前景。

对影响胞质分裂阻断微核自发率因素的探讨

微核测定是监测染色体损伤的一种简便的细胞遗传学方法。它见于已进行核分裂的细胞中。若以微核计数准确地反映染色体损伤,所计数的微核应限于第一细胞周期中的微核。传统应用的常规微核法(Conventional Micronucleus Method简称CMN法)不能区分已经过几次核分裂的细胞,往往低估微核的实际值,使结果欠准确。

复方JH-07抗肿瘤作用的研究

目的研究复方JH-07体外和体内抗肿瘤活性作用,筛选抗肿瘤新复方。方法体外采用噻唑蓝(MTT)法检测JH-07对体外培养的人食管癌细胞EC9706、人白血病细胞K562耐药株及敏感株,人成纤维瘤细胞L929,人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长抑制作用,计算生长抑制率及半数抑制浓度(IC50)。体内JH-07对H22肝癌荷瘤小鼠实体瘤的抗瘤实验采用常规抗肿瘤实验方法,用昆明种小鼠,雌雄各半,设立空白对照组、顺铂(0.005g·kg-1)及3个剂量JH-07给药组,每组10只小鼠;比较各组瘤重、肝、脾、胸腺指数,计算抑瘤率。结果JH-07可以显著抑制人白血病细胞K562耐药株及敏感株,人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长,IC50分别为9.55,15.40,15.02μg·mL-1;JH-07小、中、高剂量组的肿瘤抑制率分别为48.7%,36.5%,46.7%。与对照组比较,均P<0.01。脏器指数及重量与空白对照组比较差异均无显著性(P>0.05),而与顺铂组比较差异有极显著性(P<0.01)。结论JH-07对体外培养的肿瘤细胞有较强的细胞毒性作用,可显著抑制细胞生长;体内可以明显抑制实体瘤生长。JH-07是值得深入研究的抗癌复方新药。

应用FISH技术对我国早期从事医用X线工作者的细胞遗传学评价

目的 :对受到长期、低剂量率照射的我国早期从事医用X线工作者辐射损伤的远期效应进行细胞遗传学观察和评价。方法 :用 4号和 7号全染色体探针和荧光原位杂交技术 ,分析 2 5名早期X线工作者和 10名对照者外周血淋巴细胞染色体畸变 ,并用Giemsa染色验证。结果 :直观地表现出正常靶染色体和多种畸变。X线工作者的易位占其染色体总畸变的 84%;其他各种畸变率分别为插入 (Ins) 1.9%、双着丝粒 (Dic) 4 .5 %、无着丝粒断片 (Ace) 9.7%;X线工作者的染色体易位率和总畸变率均明显高于对照组 (P <0 .0 0 5 )。结论 :早期医用X线工作者外周血淋巴细胞的染色体畸变以易位为主。