中药药用成分β-谷甾醇的预测及其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分,并分析其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法通过Coremine Medical、TCMSP、Uniprot以及Cytoscape数据库查找宫颈癌差异基因靶向中药及其药用成分和对应靶点,并筛选出核心靶点和关键药用成分。通过STRING数据库分析关键药用成分对应靶点基因与宫颈癌差异基因的蛋白互作。采用MTT、细胞划痕实验和Western blotting实验检测关键药用成分对辐照前后宫颈癌HeLa、Siha细胞增殖、迁移和DNA断裂水平的影响。结果共预测出宫颈癌差异基因的有效靶向中药9种。共得到96种药用成分和252个靶点基因,其中关键药用成分为β-谷甾醇,并筛选出其对应的核心靶点基因10个。β-谷甾醇的相关核心靶点基因与宫颈癌差异基因表达蛋白存在互作。β-谷甾醇抑制辐照前后宫颈癌细胞的增殖与迁移,促进宫颈癌HeLa细胞以及Siha细胞的DNA断裂水平。结论预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分为β-谷甾醇,其可抑制辐照宫颈癌细胞的增殖与迁移。

分层次开放实验室 优化实验课程体系 提高医学生科研创新能力

分析传统病原生物学实验教学弊端,阐述了实验课程对医学生科研创新能力培养的重要性。以省级示范实验室建设为依托,充分利用现有实验教学资源,优化实验课程体系,分层次开放实验室,拓展实验教学内容,创新实验教学手段,促进医学生实验课程教学改革,培养学生创新意识和科研能力,积极探索新型科研创新型医学人才的培养模式。

CBL+TBL双轨制医学微生物学实验教学理念研究

医学微生物学实验课程是验证、巩固和补充课堂理论教学的必要环节,是培养医学生操作技能和创新能力的重要实践环节。文章在充分调研基础上提出了CBL+TBL双轨制医学微生物实验教学理念,构建了新型实验教学课程体系,对师生角色进行了深入探讨,分层次开放教学科研实验室,完善优化实验教学保障体系,为创新科研型医学人才培养进行了有益的探索。

Daxx与PML在HeLa和Caski细胞株中的定位观察

目的分析宫颈癌细胞内早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和死亡域相关蛋白(Daxx)的定位,为进一步研究高危型HPV16和HPV18的致癌机制奠定试验基础。方法培养HeLa细胞和Caski细胞,利用间接免疫荧光试验,在激光共聚焦显微镜下观察并分析PML和Daxx在细胞内的定位;分析Caski细胞中Daxx与HPV16 E6蛋白定位。结果在HeLa细胞和Caski细胞,PML红色信号和Daxx绿色信号在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;Daxx绿色信号与PML红色信号重叠时,依然显示各自的绿色信号与红色信号。在Caski细胞,HPV16 E6和Daxx在细胞中分布不均匀,呈区域性聚集;表达红色信号的HPV16 E6与表达绿色信号的Daxx重叠成黄色信号。结论在Caski细胞和HeLa细胞,PML定位于细胞核的PML-NBs;Daxx在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;两者未发生共定位。Daxx与HPV16 E6蛋白在Caski细胞共定位于胞浆与胞核。

抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合症(ATRX)蛋白C端的多克隆抗体,分析ATRX蛋白在宫颈组织中的表达和定位。方法将纯化后的6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;饱和硫酸铵盐析沉淀法以及亲和层析法纯化抗血清,制备抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价;并用Western blot法鉴定其特异性;利用免疫组织化学技术检测宫颈癌组织细胞中ATRX的表达与定位。结果制备的ATRX-C_(2193-2492)抗血清效价可达1∶12 800,该抗体能特异性识别ATRX-C_(2193-2492)蛋白;并检测出在宫颈癌癌旁组织中ATRX具有较高表达并主要定位在细胞核,而在宫颈癌组织细胞中虽仍主要表达于细胞核,但表达量明显减少。结论成功制备了抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体,能够应用于宫颈组织中的ATRX蛋白表达的检测。

改革医学微生物学实验教学 培养创新型医学人才

医学微生物学实验准备工作质量的高低与实验教学效果有密切的关系。本文对实验技术人员自身素质、实验准备计划的制定、实验预做、实验技术人员和实验带教教师的关系、实验方法改革、实验准备模式等方面进行了改革和探索，为提高实验教学质量，培养医学生创新能力提供参考和借鉴。

运动对慢性疲劳综合症小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响

目的建立慢性疲劳综合症(CFS)小鼠模型,研究运动对CFS小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响。方法选取40只小鼠随机分为4组,每组10只。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为CFS对照组,Ⅲ组为CFS运动1组,Ⅳ组为CFS运动2组。用力竭性游泳试验建立CFS小鼠模型。不同强度运动后,计算脾脏指数,MTT法和ELISA分别检测小鼠脾脏中NK细胞活性与IL-2含量。结果脾脏指数试验组明显低于CFS对照组(P<0.05);每天运动两次可明显升高CFS小鼠NK细胞活性和增加脾脏IL-2诱生量,与CFS对照组比较,差异有显著性(P<0.05),且随运动量增加可增强NK细胞活性、提高IL-2水平。结论适当运动能提高CFS小鼠的NK细胞活性和IL-2含量。

GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位

目的研究GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。方法 PCR扩增HPV16E5基因片段,将其连接到真核表达载体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定,构建表达载体pEGFP-C1/HPV16 E5;将质粒pEGFP-C1/HPV16 E5和pEGFP-C1分别转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位。结果 GFP荧光均匀分布在细胞浆和细胞核;GFP-HPV16 E5融合蛋白组荧光分布在细胞浆。结论 GFP-HPV16 E5融合蛋白能在HeLa细胞内表达且定位于细胞浆。

分层次开放实验室,结合案例导入教学,提升独立学院医学生实践创新能力

独立学院医学人才培养模式应注重学生实践技能与创新能力的系统培养,这也是我国医学高等教育改革的重要发展趋势。通过分析我国独立学院医学生人才培养现状,进一步拓展省级示范实验室教学职能,分层次开放实验室,优化实验教学内容,改革传统实验教学方法,调动学生自主学习积极性,切实提升独立学院医学生实践创新能力。

Daxx对γ射线诱导HeLa细胞凋亡的影响

研究过表达死亡结构域相关蛋白(Daxx)对经γ射线照射过的细胞凋亡的影响,探讨Daxx与辐射诱导细胞凋亡之间的关系及其机制。通过转染将宫颈癌HeLa细胞分为正常对照组、空质粒转染阴性组与Daxx转染组,利用生物细胞辐照仪经γ射线照射至不同剂量;Western blot检测细胞中Daxx的表达;MTT检测细胞的增殖情况;ELISA检测细胞中Caspase-8的相对活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果发现:随着照射剂量增加,细胞数量逐渐减少,且其中变形细胞越来越多;Daxx表达水平随着照射剂量增加而升高;Daxx转染的辐照细胞组的细胞增殖抑制率、A 405值以及细胞凋亡率均明显高于未辐照细胞组,差异均有统计学意义(p<0.01,p<0.05,p<0.05)。过表达Daxx能通过上调经γ射线照射细胞的Caspase-8活性,促进辐射诱导的细胞凋亡。

人乳头瘤病毒l6型E6-E7融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的构建人乳头瘤病毒l6型(HPV16)E6-E7融合蛋白真核表达载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E6-E7基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,双酶切及测序鉴定。将质粒转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E6-E7基因在HeLa细胞中的表达。提取质粒免疫小鼠,利用免疫组化方法检测在其肌肉组织中的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7;在转染pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7的细胞中检测到HPV16 E6-E7基因。在免疫该质粒的小鼠肌肉组织中可以检测到该质粒的蛋白表达。结论成功的构建的了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,该载体能在HeLa细胞内以及小鼠骨骼肌细胞内有效表达。

健美操对机体补体活性的影响

研究目标:研究有氧健美操对女大学生机体免疫分子补体活性的影响,为进一步开展健美操运动提供医学免疫学实验依据。研究对象:南华大学护理学院2003级30名女生。研究内容:分别利用单向免疫扩散试验与50%溶血法(CH50)测定系统锻炼前后血清中C3、C4含量与补体活性。研究结果:每周参加3次锻炼者,从第8周起可提高机体总补体活性,并维持较高水平。研究结论:坚持运动量适中的有氧运动,能提高机体合成补体的能力,并增强补体的活性。

研究型教学模式下医学微生物学实验教学改革

为推进高校研究型医学微生物学实验教学的发展,对高校医学微生物学实验教学中存在的问题进行了分析,提出了一系列研究型医学微生物学实验教学改革措施。实践证明,研究型医学微生物学实验教学可极大提高学生的学习兴趣,激发学生主动探索的热情,培养学生的创新意识、创新思维和创新能力,为培养高素质的应用型医学人才打下基础。

NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用。方法将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量。结果与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重。NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高。结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路。

太极拳运动增强高年级女大学生体液免疫应答实验研究

从南华大学护理学院2001级随机抽取40名女生,随机分成对照组、实验1、2、3组。实验组每周分别进行1、2、3次简化太极拳训练,测定训练前后血清中IgG、IgM、IgA含量。结果显示每周参加3次简化太极拳训练者,血清IgG含量比对照组及每周锻炼1或2次者高,且在第10周与第12周差异有显著性(P<0.05),说明坚持运动量适中的简化太极拳有氧运动,能提高高年级女大学生机体合成IgG,增强体液免疫应答,提高免疫力。

以学科优势促进实验教学示范中心建设

论述了如何从科研、人才、成果转化及仪器设备条件等方面发掘和利用学科优势,探讨了将学科发展优势与示范实验室建设有机地结合起来,全方位地促进实验教学示范中心建设的可能性。

某高校大学生抑郁症影响因素和预防途径分析

目的了解大学生群体的抑郁症流行现状,探讨其影响因素及预防途径,为防治该病提供科学依据。方法以该校17～25岁的大学1～5年级学生共428人为研究对象,以班为单位整群抽样,采用SDS自评抑郁量表(SDS)和自编的“心理健康影响因素”调查表进行调查。结果该高校在校大学生抑郁率达50．24%,其中男生为50．00%,女生为50．54%；医学专业学生为53．29%,非医学专业学生为47．39%。结论抑郁症受人际关系、就业形势、网络等因素影响；轻松娱乐节目和自我心理调试有利于抑郁症的预防。

穿透支原体LAMPs诱导NF-κB激活介导小鼠巨噬细胞凋亡

研究穿透支原体(Mpe)脂质相关膜蛋白(LAMPs)能否诱导小鼠巨噬细胞凋亡,并阐明其可能的分子机制,以了解Mpe潜在的致病性。用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒和DNA Ladder方法检测Mpe LAMPs诱导体外培养的小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞的凋亡。以间接免疫荧光和Western blotting方法检测经Mpe LAMPs处理的小鼠巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)对细胞凋亡的影响。结果表明:Mpe LAMPs能诱导小鼠巨噬细胞发生早期或晚期凋亡;Mpe LAMPs能诱导激活小鼠巨噬细胞的NF-κB,使其从细胞浆中转位到细胞核内;PDTC能显著地抑制经处理的小鼠巨噬细胞的NF-κB的激活,且能抑制Mpe LAMPs诱导的巨噬细胞发生凋亡。因此,Mpe LAMPs诱导小鼠巨噬细胞凋亡可能与NF-κB的激活有关,因而Mpe可能是一个重要的致病因素。

IL-2增强肺炎支原体P1C核酸疫苗的肌注免疫效果

目的:研究IL-2对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1C核酸疫苗经肌注免疫BALB/c小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用。方法:将P1C-IL-2核酸疫苗肌注免疫BALB/c鼠,ELISA检测疫苗免疫后56天小鼠血清IgG和IgG亚类、支气管灌洗液中SIgA、IFN-γ和IL-4的水平;用2×107 Mp菌落形成单位鼻饲感染BALB/c鼠,建立感染小鼠模型,病理切片检测Mp感染后小鼠肺部炎症病理改变;将系列10倍稀释的支气管灌洗液接种于SP4固体平板,并进行菌落计数。结果:P1C-IL-2核酸疫苗免疫组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a、IFN-γ和IL-4水平均较P1C单基因疫苗组显著增高(P<0.05),但两组支气管灌洗液中SIgA差异无显著性(P>0.05)。Mp感染后第1、3、6天P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠肺组织病理评分(HPS)较P1C单基因疫苗免疫组显著增高,但支气管灌洗液中的Mp菌落数明显减少;第9天后两组HPS和Mp菌落数差异无显著性。结论:IL-2能显著增强P1C疫苗肌注的免疫保护作用和免疫应答水平,但同时在Mp感染早期激发了较重的肺组织炎症。