人信号调节蛋白α单克隆抗体的制备及初步应用

目的以合成的多肽制备人信号调节蛋白α(SIRPα)的单克隆抗体(mAb),并初步应用于免疫学检测,评价其应用效果。方法以合成多肽与载体KLH交联的偶联物为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立能稳定分泌抗人SIRPα的杂交瘤细胞株。采用分泌的mAb进行流式细胞术、蛋白质印迹及免疫组化检测,观察检测结果;采用分泌的mAb刺激经豆蔻佛波醇乙酯(PMA)处理的THP-1细胞,抗体芯片检测分泌细胞因子水平的变化,ELISA法验证其中TNF-α、IL-6的水平变化。结果成功获取可分泌抗人SIRPα的杂交瘤细胞,分泌的mAb应用于流式细胞术、蛋白质印迹及免疫组化检测,取得较好的效果;与阴性对照组和同型抗体对照组相比,制备的mAb能促进经PMA处理的THP-1细胞分泌TNF-α、IL-6等细胞因子(P<0.01)。结论利用合成多肽成功制备了高特异性抗人SIRPα的单克隆抗体。