噬菌体抗体库中筛选抗GST单链抗体及其活性鉴定

从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选获得了特异性抗GST蛋白的单链抗体(scFv),并在E.coliHB2151进行表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,scFv可在细菌周质腔中进行可溶性表达,其分子量约为30 kD,与理论预期值相符;ELISA鉴定结果显示,周质腔中的scFv具有抗原结合功能,而且这种结合可以被GST纯蛋白所抑制,其IC50值约为3.07 ng/ml,证明该scFv具有特异性结合GST蛋白的活性。本研究表明,利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫就能获得高特异性的人源化抗GST蛋白的scFv。

抗苏丹红单链Fab抗体的构建、表达及功能鉴定

从分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株SU211中克隆抗体轻链Lc基因和重链Fd基因,将Lc、Fd基因以及Linker克隆到载体pET24a(+)中,构建scFab表达载体并在E.coli BL21(DE3)获得表达,SDSPAGE和Westernblot分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为57 kD,与理论预期值相符。经复性后,ELISA鉴定结果表明复性抗体对苏丹红Ⅰ具有很高的结合特异性。本研究为新型基因工程抗体的构建以及苏丹红新型免疫检测技术的建立奠定基础。

Glypican-3的原核表达及其单克隆抗体的制备和初步应用

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3)是一类主要表达在原发性肝细胞癌表面的硫酸乙酰肝素聚糖蛋白,是一种重要的肝癌标志物。本实验通过构建含有Glypican-3C端原核载体pIGH3-GPC3并诱导表达,以之免疫BALB/c小鼠后筛选到两株分泌特异性抗Glypican-3抗体的杂交瘤细胞株GPC3-9和GPC3-11,抗体亲和力常数分别达到1.24×109 mol/L和1.668×109 mol/L;经ELISA、Western blot以及免疫荧光试验进一步验证了GPC3-9和GPC3-11均能特异性识别原核表达或肝癌细胞内源性Glypican-3分子,具有潜在的开发及应用前景。