血管紧张素Ⅱ对肾系膜细胞丝裂原活化蛋白激酶的作用

血管紧张素Ⅱ对肾系膜细胞丝裂原活化蛋白激酶的作用唐嘉薇李晓玫（北京医科大学第一医院肾内科肾脏病研究所，北京１０００３４）血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）是一类重要的血管活性物质，在体外研究中发现，它可引起肾小球系膜细胞（ＭＣ）收缩并调节肾小球血流量，还可调...

人机系统可靠性设计研究进展

目的研究人机系统可靠性设计理论。方法通过对可靠性概念的描述,进而对机械可靠性、人的可靠性、人机系统可靠性的研究现状、主要分析方法及应用等方面的文献进行梳理与综合分析。初步构建了人机系统可靠性设计研究框架。结论指出人机系统可靠性设计的未来发展趋势,为该领域进一步的研究提供参考。

马兜铃内酰胺-Ⅰ进入人肾小管上皮细胞及细胞内分布和蓄积的观察

目的:观察马兜铃内酰胺-Ⅰ(AL-Ⅰ)能否进入肾小管上皮细胞及其在细胞内的分布、蓄积情况。方法:以体外培养的人类近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,用不同质量浓度的AL-Ⅰ(5～20μg.mL-1)处理细胞,采用荧光倒置显微镜观察细胞内由AL-Ⅰ产生荧光的有无及其分布,并在洗去含AL-Ⅰ的培养液后继续培养HK-2细胞48h,观察细胞内AL-Ⅰ荧光的持续情况以判断其蓄积性。结果:不同质量浓度的AL-Ⅰ(5～20μg.mL-1)处理细胞0.5h内,均能在肾小管上皮细胞内观察到蓝绿色的AL-Ⅰ荧光,并且荧光仅分布于细胞浆中,而在细胞核内未观察到。在洗去含AL-Ⅰ培养液后继续培养时AL-Ⅰ的荧光可在细胞内持续存在48h以上,其持续存在部位仍为细胞浆。结论:AL-Ⅰ可以在短时间内迅速进入肾小管上皮细胞,其分布部位在细胞浆,不进入细胞核;AL-Ⅰ在细胞浆内的蓄积可能与其致肾损伤的毒性作用机制有关,即通过进入肾细胞并蓄积于细胞内在肾病过程中持续发挥毒性作用。

黄芪当归合剂抑制马兜铃酸Ⅰ导致的肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨黄芪当归合剂(astragalus and angelica m ixture,A&A)对外源性马兜铃酸Ⅰ(aristoloch ic ac idⅠ,AAⅠ-)所造成的肾小管上皮细胞损伤的干预作用。方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,在AA-I(2.5 mg/L)刺激细胞4 h后,给予A&A药物血清并使细胞继续生长至48 h,应用流式细胞仪分析细胞DNA含量了解细胞凋亡情况;采用ELISA法检测细胞培养上清液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及转化生长因子β1(transform ing growth factor-beta 1,TGFβ-1)分泌水平;比较A&A干预前后AA-I诱导的细胞凋亡、TGF-β1及FN分泌的改变。结果:正常HK-2细胞能够分泌少量TGFβ-1(7.05±1.98μg/L),正常血清与A&A均不能够诱导TGFβ-1的明显分泌(6.35±1.99μg/L and 6.57±2.19μg/L,vs.对照组,P>0.05),AAⅠ-能够诱导细胞分泌TGFβ-1(18.26±5.98μg/L,vs.对照组,P<0.05),与AA-I作用组相比,A&A能够抑制TGFβ-1分泌(6.66±0.70μg/L,vs.AA-I,P<0.05),抑制率达63.5%;A&A还能够阻断细胞凋亡,阻断率达93.7%(3.32%±0.41%vs.19.19±6.32%,A&A+AA-Ivs.AA-I,P<0.001),并能抑制AA-I诱导HK-2细胞分泌(1.64±1.11倍vs.2.93±0.87倍,P<0.05),抑制率达44%。结论:A&A能够减轻AAⅠ-诱导的肾小管上皮细胞损伤,其机制可能与抑制TGFβ-1的作用有关。

白细胞介素1对肾系膜细胞分裂原活化蛋白激酶不同亚类的作用

为探讨白细胞介素１对肾小球系膜细胞作用的细胞内信号转导机制，采用３Ｈ胸腺嘧啶参入、免疫沉淀及激酶磷酸化反应等方法，检测了白细胞介素１对分裂原活化蛋白激酶不同亚类的作用，并与血小板衍生生长因子的作用进行比较。结果发现，与血小板衍生生长因子的作用相反，白细胞介素１可在短时间内激活ｃｊｕｎ氨基末端激酶，但对ｐ４２／４４分裂原活化蛋白激酶无刺激作用，表明白细胞介素１在肾小球系膜细胞的作用可通过ｃｊｕｎ氨基末端激酶介导。

外源性表皮生长因子对马兜铃酸-Ⅰ所致细胞增殖抑制作用的影响

目的:探讨加入外源性表皮生长因子(EGF)能否改善马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)引起的细胞增殖抑制作用。方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,在正常培养组(对照组)、AA-Ⅰ(10 mg.L-1)刺激组(AA组)和不同时机加入EGF处理组之间比较各项指标变化;用倒置显微镜对细胞形态进行观察;台盼蓝染色后细胞计数法观察细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化情况。结果:与对照组相比,AA-Ⅰ对细胞的毒性作用呈浓度和时间依赖性增强,AA-Ⅰ(10 mg.L-1)刺激24,48 h后对存活细胞的细胞周期分析可见G0/G1期细胞比例分别减少31.4%和87.4%,而G2/M期细胞比例逐渐增高达对照的1.32倍和3.73倍(均P<0.05)。EGF(20μg.L-1)刺激24 h后细胞数达对照组的1.36倍(P<0.05),细胞周期中G0/G1期细胞比例减少9.7%,S和G2/M期细胞比例分别增高2.9%和6.7%,表明EGF具有促进细胞周期的作用。与AA-Ⅰ组相比,无论预先(preEGF)、同时(EGF)或刺激后(postEGF)加入EGF,AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制现象并没有得到改善,也未能明显改善其导致的细胞周期异常。结论:AA-Ⅰ(10 mg.L-1)能够显著抑制损伤后存活HK-2细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期;外源性EGF(20μg.L-1)能够明显促进正常细胞增殖,但不同时机加入EGF均不能改善AA-Ⅰ所致的细胞增殖抑制作用。

政治中的隐喻——奥巴马2010年国情咨文的认知语言学分析

认知语言学中隐喻理论的发展让人们意识到这一语言现象在社会生活各个领域的重要性,隐喻在政治语言中的作用尤其不可忽视。本文将以奥巴马2010年国情咨文为例,从认知语言学的角度,分空间隐喻、本体隐喻和结构隐喻三种类型对文中的大量隐喻现象进行分析,以此探寻演讲者的动机,并透视美国社会文化。

苔丝的渴望与毁灭——论哈代的悲剧观

在小说《德伯家的苔丝》中,苔丝这一人物的悲剧集中体现了作者哈代的悲剧观,即人物的欲望会带来自身的毁灭。本文将有选择地对小说情节与人物描写进行细致分析,探索苔丝渴望萌生的原因和其带来的后果,以进一步解读哈代的悲剧创作理念。

传统实体书店新型发展模式的探究——用SWOT模型分析光合作用书房经营模式

以当当、卓越为代表的网上商城凭借其在成本领先战略中无可比拟的优势,给传统实体书店造成了强大的冲击,而光合作用书房却以独具特色的经营理念,发展的欣欣向荣。这一模式的大获成功为实体书店的发展指明了一个新的方向。本文具体分析了光合作用书房采取的差异化竞争战略,并利用SWOT模型分析其面临的战略环境,提出匹配的战略方案,以促进这一经营模式在实体书店中运用和发展。

刺激物洗脱对马兜铃酸-I所致肾小管上皮细胞增殖抑制作用的影响

目的以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,探讨刺激物马兜铃酸-I被洗脱(aristolochic acid-I,AA-I)后对HK-2细胞增殖抑制作用的影响。方法以AA-I分别刺激细胞12、24、48h后去除刺激物,加入Hank’s液对细胞进行重复3次洗涤,继续培养24h后测定各项指标。台盘兰染色后细胞计数法观察存活细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化情况。结果应用AA-I(10μg/ml)刺激HK-2细胞后,随着刺激时间的延长存活细胞数量逐渐减少,12、24、48h后存活细胞计数较对照组分别下降8%、25%和57%;细胞周期测定结果显示AA-I刺激HK-2细胞后,G2/M期细胞比例逐渐增高,到24h后G2/M期比例达对照组的1.28倍,48h后达正常对照组的3.8倍。以上情况在洗脱以后并没有得到改善,表现为洗脱后的12、24、48h组细胞数较相应时间点的刺激组分别下降45%、32%和30%;AA的G2/M阻滞作用在洗脱以后也没有好转,洗脱24h组G2/M比例达AA24h组的2.91倍,而与AA48h组差异无显著性。结论AA-I(10μg/ml)能够显著抑制HK-2细胞的增殖,表现为细胞数目减少,细胞周期阻滞于G2/M期。洗脱细胞外的AA-I后并未能改善AA-I刺激导致的细胞增殖抑制作用,提示细胞内蓄积的AA-I或其代谢物可能是导致细胞持续损伤的主要原因。

基于放射科平台信息化的多学科诊疗模式的价值探讨

随着医疗技术的发展,影像学信息在临床诊断中占的比重越来越大,特别是电子计算机断层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)等已成为当今临床医学诊断中放射学手段的主流。影像精准化能力不断提升,临床各专业学科诊治水平不断提高和临床各亚专科划分进一步细化,前往大型综合性医院就诊的患者病种复杂且病情也越趋危重,单一专科已不能满足患者精准、全面、及时的诊疗需求。

基于情感化设计中反思层面的产品设计研究

设计的过程中需要充分考虑情感化设计的作用,情感化设计中本能、行为和反思这三个设计的不同层面互相作用。其中,反思层的指导作用往往不易察觉,但作用重大。探讨并分析产品设计中情感化设计反思层面的应用,结合不同类型的具体产品可灵活延伸并运用至相关的工业产品设计。

电视机遥控器人机界面设计分析

本文通过人机工程学的相关知识,对电视机遥控器的人机界面进行了深入分析,从电视机遥控器的外形设计,尺寸大小,按键外观设置以及符号设计综合研究,推理出最合适的遥控器设计准则,从而为今后适于人使用的遥控器的相关设计提供理论参考。

黄芪当归合剂对间质纤维化肾脏中细胞外基质降解系统的调控作用

目的:深入研究黄芪当归合剂抑制肾脏纤维化的作用机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻模型组和黄芪当归合剂治疗组(14 g.kg-1.d-1)。在治疗后的第3,7,10天观察各组纤维化程度,测定纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及活性PAI-1,t-PA的表达,检测基质金属蛋白酶(MMP-9,MMP-2)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)活性。结果:黄芪当归合剂明显减轻输尿管梗阻导致的肾间质纤维化。在各时间点,模型组总PAI-1及活性PAI-1的表达较假手术组明显增高,而经黄芪当归合剂治疗后PAI-1表达及活性较模型组显著降低;模型组中t-PA仅在第3天时增高,同时黄芪当归合剂治疗组较模型组明显降低。整个观察期中模型组和黄芪当归合剂治疗组的MMP-2,9活性均较假手术组明显增高,但2组间无统计学差异;模型组的TIMP-1活性在第7天和第10天时显著增高,而黄芪当归合剂治疗组较模型组显著降低。结论:黄芪当归合剂可以改善肾组织PAs/PAIs及MMPs/TIMPs系统的失衡而减少细胞外基质的积聚,可能是其抑制肾间质纤维化的机制之一。

微小病变患者尿蛋白对肾小管上皮细胞的损伤作用及其机制研究

目的 探讨尿蛋白对肾小管损伤的途径及加重肾脏病变的相关机制。方法 用硫酸铵沉淀法提取肾小球微小病变患者尿液中的总蛋白成分。体外培养人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞。用3H-TdR掺入法测定细胞增殖水平,Western blot方法检测细胞合成单核细胞趋化因子(MCP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平,RT、PCR检测细胞TGF-βmRNA表达,间接竞争ELISA检测细胞上清的纤连蛋白(FN)水平。结果(1)提取的尿蛋白主要成分为白蛋白、转铁蛋白和IgG,分别是84.5％、8.0％和1.2％。(2)0.2～10mg/ml浓度的尿蛋白能刺激HK-2细胞增殖,为对照组的3.33～8.59倍(P<0.01～0.001)。(3)在0.5～5mg/ml浓度的尿蛋白作用下,HK-2细胞分泌FN也明显高于对照组(P<0.001),5mg/ml时的作用最强,为对照组的(2.908±0.544)倍。(4)尿蛋白还诱导HK-2细胞合成MCP-1、α-SMA蛋白及上调表达TGF-β mRNA,当浓度为5～10 mg/ml时其作用最强。(5)TGF-β1中和抗体在浓度为1～2μg/ml时可部分阻断尿蛋白(5mg/ml)对HK-2细胞FN分泌和MCP-1蛋白合成的刺激作用。结论 人类微小病变来源的尿蛋白可刺激人近端肾小管上皮细胞增殖、分泌细胞外基质蛋白、合成炎症趋化因子,诱导肾小管细胞发生以α-SMA为标志物的表型转化。这一效应部分通过TGF-β1的介导作用。这可?

丝裂素活化蛋白激酶信号转导途径对血小板源生长因子所致鼠肾系膜细胞表型转化的调控作用

目的 研究血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对肾小球系膜细胞（ＭＣ）表型转化的影响，并探讨丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号转导途径在其作用中的调控机制。方法 以体外培养的大鼠ＭＣ为对象，观察ＰＤＧＦ对细胞增殖、α－平滑肌肌动蛋白（ＳＭＡ）表达和细胞内ｃ－Ｊｕｎ氨基末端激酶（ＪＮＫ）活性的作用；观察细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）途径上游信号ＭＥＫ－１阻断剂ＰＤ９８０５９对ＰＤＧＦ所致上述作用的影响；应用ｒａｆ－１基因转染并稳定高表达的ＭＣ观察其对α－ＳＭＡ表达、细胞形态及其超微结构的影响。结果 ＰＤＧＦ可刺激ＭＣ持续增殖；刺激６～４８ ｈ可使α－ＳＭＡ表达增加，但持续刺激７２ ｈ以上则可导致其表达被抑制近５０％。ＰＤＧＦ对ＪＮＫ活性无明显影响，阻断ＥＲＫ活化不影响ＪＮＫ活性及ＰＤＧＦ对α－ＳＭＡ表达的短时刺激作用。Ｒａｆ－ｌ蛋白激酶稳定高表达的ＭＣ细胞内α－ＳＭＡ表达缺失，同时细胞内微丝、微管结构减少，细胞形态改变。结论ＰＤＧＦ对系膜细胞表型转化的影响表现为促进细胞持续增殖、短时作用刺激α－ＳＭＡ表达而持续作用则抑制α－ＳＭＡ表达，提示其为具有调控ＭＣ增殖和分化双重作用的细胞因子。

p38丝裂素活化蛋白激酶信号转录对IL-1β诱导肾小管细胞转分化的影响

目的 探讨 p38MAPK信号转导途径对IL 1β诱导肾小管上皮细胞转分化的影响及其导致的功能改变。方法 以培养的人近端肾小管上皮细胞 (HK 2 )为研究对象 ,给予IL 1β(10ng/ml)刺激 2 4h ,在阻断实验中加入SB2 0 35 80阻断 p38通路。采用蛋白印记杂交法检测 p38MAPK的磷酸化程度 ;细胞表型特征检测包括细胞形态变化、标志蛋白 (角蛋白、α SMA)的表达及分布、细胞增殖、黏附和移行能力。结果 (1)IL 1β刺激 6～ 4 8h可使α SMA表达上调 ,刺激 2 4h可使角蛋白表达减弱、α SMA分布紊乱 ,但细胞形态变化不明显 ;(2 )IL 1β在 5min时可使p38激活达高峰 ,较基础水平升高 2～ 3倍 (P <0 0 5 ) ;至 12 0min时 p38则呈持续激活状态 ;(3)p38阻断剂 (SB2 0 35 80 )对HK 2细胞α SMA的基础表达有抑制作用 ,抑制率 37 13% (P <0 0 1) ;同时可明显抑制IL 1β刺激的α SMA表达 ,抑制率 4 7 0 7% (P <0 0 0 1) ;(4)IL 1β及 p38阻断剂并不影响HK 2细胞之间的黏附能力 ,但IL 1β可使细胞的移行能力增强 (P <0 0 1) ,而 p38阻断剂可明显抑制其移行能力。IL 1β并不影响HK 2细胞增殖。结论 IL 1β可以激活肾小管上皮细胞p38/MAPK ,并可使其发生表型转化 ,这一作用部分通过 p38信号通路所介导。

抑制NADPH氧化酶系统可减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的探讨NADPH氧化酶系统（NOXs）对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法雄性Wistar大鼠按随机区间法分为假手术组（Sham，n=8）、假手术＋夹竹桃麻素（apocynin）治疗组（SA，n=8）、UUO组（n=8）和UUO＋夹竹桃麻素治疗组（UA，n=8）。SA及UA组自手术日起每天给予夹竹桃麻素100mg／kg灌胃治疗，Sham组和UUO组给予等量清水灌胃。术后第7天处死取材，采用ELISA及Western印迹法分别检测肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性，8-异构前列腺素F2d（8-iso—PGF2α）浓度，NOX2、NOX4及α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、I型胶原（COL—I）的表达，ERK1／2激酶的活化。结果与Sham组相比，UUO大鼠第7天NOX2、NOX4表达及8-iso—PGF2α水平显著升高（P〈0．05），同时伴有肾组织COL—I和d—SMA表达升高、ERK1／2激酶活化增加（P〈0．05）。夹竹桃麻素治疗显著降低NOX2、NOX4的表达及8-iso-PGF2α水平（P〈0．05），同时大鼠肾组织α-SMA及COL—I表达显著下降、ERK1／2活化降低（P〈0．05）。夹竹桃麻素治疗对肾组织SOD及CAT活性无明显影响。结论NADPH氧化酶系统通过促氧化应激参与梗阻性肾病大鼠肾问质纤维化的进展，抑制该系统可能作为抑制。肾间质纤维化的治疗靶点。

增塑剂对人腹膜间皮细胞细胞外基质合成和分泌的影响

目的 探讨增塑剂邻苯二甲酸二辛酯（ＤＥＨＰ）与腹膜硬化的关系和可能机制。方法分离人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）作体外培养，选择３种不同浓度的 ＤＥＨＰ连续刺激５ｄ，同时设阴性对照．分别在第 １、５天迸行检测． 以３Ｈ－脯氨酸掺入法测定细胞总胶原的合成和分泌；ＥＬＩＳＡ法检测培养液中纤连蛋白（ＦＮ）的含量；ＦＮ－ｍＲＮＡ、Ｉ型胶原 ｍＲＮＡ（ＣｏＩ、ｍＲＮＡ）、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ（ＣｏⅢ－ｍＲＮＡ）和转化生长因子（ＴＧＦ）－β１ｍＲＮＡ的表达采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定。结果 （１）ＨｐＭＣ表达ＦＮ、层连蛋白（ＬＮ）、ＣｏⅢ和ＴＧＦ－β１；（２）ＨＰＭＣ在不同浓度ＤＥＨＰ刺激下第５天时培养液上清ＦＮ及胶原的分泌量明显增加，其中高浓度组与对照组相比差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；（３）不同浓度ＤＥＨＰ刺激ＨＰＡＭ下在第５天时ＦＮ－ｍＲＮＡ、ＣｏＩ－ｍＲＮＡ和ＣｏⅢ－ｍＲＮＡ的表达与对照组相比均明显增加，差异有显著性意义，但各浓度组之间差异无显著性意义；（４）不同浓度的ＤＥＨＰ刺激 ＨＰＭＣ２４ｈ均引起ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ表达增加，第５天时表达消失。结论

白细胞介素10抑制肾系膜细胞磷脂酶A_2及其介导的前列腺素E_2释放的实验研究

肾小球系膜细胞（ＭＣ）在病理状态下产生炎症效应并自分泌多种炎症介质，是导致肾小球炎症与硬化的重要发病机制。研究表明，炎症性细胞因子白细胞介素１（ＩＬ１）β可激活磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２），并介导ＭＣ释放脂类炎症介质前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２），后者进而参与...