Calponin的研究进展

Ｃａｌｐｏｎｉｎ的研究进展卫生部呼吸系疾病重点实验室同济医科大学病理生理学教研室（武汉４３００３０）唐大椿槽圣卢中举柯丹王迪浔平滑肌收缩的细胞内信息传递包括肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）和蛋白激酶ｃ（ｐｒｏ...

一种新的平滑肌调控蛋白Calponin

Ｃａｌｐｏｎｉｎ为一种平滑肌特有的调控蛋白，分子克隆的证据表明，它具有两种亚型，α型和β型分别由２９２和２５２个氨基酸组成它能与肌动蛋白结合，抑制肌球蛋白ＡＴＰ酶活性和平滑肌收缩其与肌动蛋白结合域有３８个氨基酸残基（第１４５～１８２位），丝氨酸１７５在调宁蛋白与肌动蛋白的相互作用中起重要作用，它还能与钙调蛋白结合，呈钙依赖性。

四种宫内节育器引致兔子宫活动及前列腺素含量的动态变化

观察放置4种宫内节育器后,各组兔子宫机械与电活动的变化,并对各组兔宫腔冲洗液进行PGF_(2α)及PGE_2放射免疫测定。结果:带器早期子宫活动增强,随后逐渐趋于平稳,其强度为Cu-IUD>SS-IUD>LNG-Cu-IUD>LNG-IUD。PGF_(2α)及PGE_2水平:在早期,Cu-IUD>SS—IUD>LNG-Cu-IUD>LNG-IUD;带器后4月,各组水平均下降。提示:置器早期子宫收缩性增强可能与脱落等副作用相关,IUD所释铜离子能增强子宫活动及提高PGF_(2α)和PGE_2水平,LNG则减少之。此结果显示了发展LNG-Cu-IUD的可行性。

平滑肌收缩调节的信号转导

平滑肌细胞内信号转导主要有肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）途径。前者通过肌浆内Ｃａ２＋浓度升高，激活钙调蛋白（ＣａＭ）依赖性ＭＬＣＫ，催化肌球蛋白轻链丝氨酸（Ｓｅｒ）－１９磷酸化，肌球蛋白ＡＴＰ酶活性增加，肌丝滑行，肌肉收缩。肌浆内Ｃａ２＋浓度的恢复使ＭＬＣＫ失活，肌球蛋白轻链磷酸酶（ＭＬＣＰ）使肌球蛋白脱磷酸化，肌肉舒张。近来有证据表明ＰＫＣ信号转导途径通过影响细肌丝相关蛋白调宁蛋白（ｃａｌｐｏｎｉｎ）和钙介导蛋白（ｃａｌｄｅｓｍｏｎ）的功能来调节平滑肌的收缩状态。

调宁蛋白T184的定点突变、表达、纯化和鉴定

为增强调宁蛋白对平滑肌收缩的抑制作用，用ＰＣＲ重叠延长法使调宁蛋白基因中编码第１８４位苏氨酸的ＡＣＴ突变为编码丙氨酸的ＧＣＣ，将此ＰＣＲ的突变产物装入到质粒载体ｐＡＥＤ４后，转化至Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中，构建的重组转化子用酶切和测序鉴定．诱导含有重组转化子的Ｅ．ｃｏｌｉ获得高效表达，经ＳＤＳＰＡＧＥ和蛋白质印迹鉴定后，采用反复冻融法及葡聚糖凝胶层析柱分离，初步纯化出调宁蛋白突变体Ｔ１８４Ａ．

喉癌组织乳头状瘤病毒的检测

应用聚合酶链反应对成人型喉癌、喉癌旁组织及颈部淋巴结组织进行乳头状瘤病毒（HPV）检测,发现20例喉癌组织中有16例呈HPV-6、11型阳性,1例HPV-16、18型阳性;2例癌旁1cm内组织有1例HPV-6、11阳性;2例癌旁2cm外组织均呈HPV-6、11、16、18阴性;3例颈淋巴结病理检查有癌转移,均为HPV-6、 11型阳性。

The Study on the Relationship between the Expression ofCalponin and Gallstone Formation

In order to understand the molecular mechanisms of gallstone formation, the expression of calponin in animal model of gallstone disease was studiedHigh-cholesterol diet was given to the guinea pigs to induce gallstone formation.RT-PCR and Western-blotting were used to evaluate expression level of calponingene. Down-regulation of calponin gene expression was observed in animals withgallstone, while myosin expression was relatively stable. Our results indicatedthat the decrease of calponin could increase the pressure of Oddi's sphincter, ag-gravate the stasis of bi1e and promote the gallstone formation.

调宁蛋白在Oddi括约肌表达及在胆结石形成中的作用

目的研究平滑肌收缩调控蛋白－调宁蛋白在胆结石动物Ｏｄｄｉ括约肌中的表达，从分子水平上阐明胆结石形成的机制。方法饲予豚鼠高胆固醇饮食，分别在３０天和６０天取出Ｏｄｄｉ括约肌，应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和蛋白质免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）检测动物Ｏｄｄｉ括约肌调宁蛋白基因的表达水平。结果发现在结石形成过程中，调宁蛋白基因的表达水平逐渐下降，３０天组和６０天组的调宁蛋白含量和ｍＲＮＡ水平均比对照组低，且６０天组比３０天组低，而另一调控蛋白肌球蛋白的表达水平无明显变化。结论调宁蛋白表达水平的下降，可能使Ｏｄｄｉ括约肌的张力增加，加重胆汁淤滞，促使胆结石的形成。

p16基因突变与喉癌生物学行为的相关性

目的 :研究 p16基因突变与喉癌生物学行为及预后的关系。方法 :应用 PCR- SSCP对 2 4例喉癌组织及 10例喉部良性病变组织中 p16基因 (exon2 )进行检测。结果 :喉癌突变检出率为 6 2 .5 % (15 / 2 4) ,而且随着组织分化程度、浸润范围和淋巴结转移的不同而不同 ;喉部良性病变无一例突变。结论 :p16基因突变与喉癌的多种生物学行为有明显关系 (P≤ 0 .0 5 ) ;这种关系有助于判断喉癌的恶性程度及预后。 PCR- SSCP检测喉癌突变 ,具有敏感、简便、重复性好 ,快速而经济等优点 ,是一种适用于临床样本筛选的方法。