黑曲霉泡腾片对烟草青枯病防效及烟株生长的影响

以云烟87为试材,研究黑曲霉(Aspergillus niger)泡腾片生防菌剂对烟草农艺性状的影响和对烟草青枯病的防治效果。盆栽试验表明,黑曲霉泡腾片稀释800倍时,对烟草青枯病的防治效果可达92.9%,显著高于稀释1 200倍的多粘类芽孢杆菌(Peanibacillus ploymyxa)(42.9%)的防效(P<0.05)。大田试验表明,黑曲霉泡腾片在提高烟草叶片数、叶长、叶宽、直径、株高等农艺性状方面优于清水对照,表现出良好的促生效果;对采收的烤烟进行送检,结果表明,施用泡腾片的烟叶呈现出良好的评吸效果。

黑曲霉泡腾片制备工艺优化

该研究采用粉末直接压片法制备黑曲霉(Aspergillus niger)泡腾片,以崩解时限、pH值、发泡量为评价指标,通过单因素试验和正交试验对黑曲霉泡腾片的工艺参数进行优化。结果表明,黑曲霉泡腾片的最佳制备工艺为酒石酸和碳酸氢钠比例1.00∶1.25、崩解剂添加量70%、黑曲霉孢子粉添加量15%、质量分数为10%的聚乙二醇6000乙醇溶液为润滑剂,添加量为3.15 g/m L,质量分数为2.5%为聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液为粘合剂,添加量为7 g/m L。在此优化条件下所得的黑曲霉泡腾片表面光滑,黏冲不明显,pH值为5.7,且崩解时限(23 s)、发泡量(40.79 m L/g)、硬度(4.3 kg)均符合2015版《中国药典》的规定,在水中可迅速崩解。

拮抗菌巨大芽孢杆菌L2发酵条件的响应面优化

为探明拮抗菌巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2的发酵条件,提高其抑菌活性,以链格孢菌(Alternaria alternaria)为指示菌,以抑菌圈直径为响应值,优化其发酵条件。在单因素试验的基础上,采用响应面法对发酵条件中各因素进行优化。结果表明:最优发酵条件为牛肉膏4.6 g/L,氯化钠3.0 g/L,初始p H值为7.0,葡萄糖15 g/L,接种量6%,装液量50 m L/250 m L。在此优化条件下,抗菌物质的抑菌圈直径大小从未优化前的(14.55±0.43)mm提高至(34.99±0.14)mm,抑菌圈直径增加了140.48%。

黑曲霉超临界萃取物抑制链格孢作用机制的初步研究

本试验对黑曲霉菌丝体超临界萃取物(SE)抑制链格孢的机制进行了初步研究。采用超临界萃取从黑曲霉菌丝体中获得样品SE,使用气相色谱-质谱(GC-MS)对其萃取物进行分离鉴定,并通过细胞膜渗透性测定、核酸和总蛋白含量测定、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色法、活性氧(ROS)含量测定、呼吸代谢途径等方法对SE的抑菌机制进行研究;电导率及核酸、蛋白结果显示,SE能影响链格孢细胞膜的完整性,SE处理菌体4.5 h,电导率比阴性对照增加了37.2%,胞外核酸蛋白含量显著增加。DAPI染色结果显示,DAPI可以和链格孢内的核酸结合,经SE作用30 min,SE可引起细胞核染色质异常弥散。ROS试验结果显示,SE可以激发菌体产生过多的活性氧,SE作用链格孢40 min时ROS含量比阴性对照增加了79.67%。呼吸代谢试验结果显示,SE能抑制三羧酸循环(TCA)中的琥珀酸脱氢酶的活性,其抑制率为35.4%。SE具有较强的抑菌活性,其抑菌机制是通过影响细胞膜的正常功能、损伤细胞结构和抑制真菌的呼吸代谢等方面实现的。

常压室温等离子体诱变选育高产微生物絮凝剂黑曲霉菌株

该研究采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对黑曲霉(Aspergillus niger)xj进行诱变,通过考察致死率与正突变率确定最佳诱变时间,通过发酵培养选育高产微生物絮凝剂菌株。结果表明,黑曲霉xj的最佳诱变照射时间为90 s;经初筛共得到416株诱变菌株;经复筛得到10株絮凝活性较高的诱变菌;再经同步发酵培养,比较突变菌的生长状态、絮凝活性及遗传稳定性,获得2株絮凝活性较高、稳定遗传的突变菌株A90-34与A90-37,其对高岭土悬液的絮凝率分别为94.12%和94.96%,与原始菌株相比,分别提高26.19%、27.03%,连续传代7次仍具有良好的遗传稳定性,絮凝率维持在92%~95%。

响应面法制备黑曲霉浸膏水分散片剂及抗病促生作用

以黑曲霉浸膏为试验材料,采用单因素试验筛选和响应面分析法优化制备黑曲霉浸膏水分散片剂,通过田间应用研究黑曲霉浸膏水分散片剂对烟草农艺性状和生理生化指标的影响。结果表明:黑曲霉浸膏水分散片剂最佳配方为10%黑曲霉浸膏,崩解剂比例(酸碱)0.45,36%崩解剂,6%聚乙二醇6000,2%聚乙烯吡咯烷酮K30,填料补足;在此条件下制备得到的黑曲霉浸膏水分散片剂表面光滑,颗粒强度适中,黏冲不明显,悬浮率80.56%,pH 5.71,崩解时间130.2 s,符合农药剂型质量技术指标。通过田间试验结果表明:与对照相比,两地区施用黑曲霉浸膏水分散片剂烟草叶片数增加68.35%~89.83%、叶长增长9.54%~30.18%、叶宽增宽23.37%~29.38%、茎粗增粗66.40%~97.36%、株高增高5.80%~16.30%;在黑曲霉浸膏水分散片剂的作用下,对烟草青枯病的大田防治效果达50%以上,提高烟草对外界不利环境的适应能力,促进植株生长及环境抗逆性,为微生物菌剂的开发与应用奠定基础。