组织桥接整合因子1、Ⅰ型胶原蛋白基因、核转运蛋白基因2与三阴性乳腺癌术后复发关系

目的探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义。方法选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS)。结果复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织BIN1mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P<0.05),复发组组织COL1A1mRNA、KPNA2mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P<0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P<0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P<0.001),COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P<0.001);BIN1mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1mRNA、KPNA2mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P<0.05)。结论BIN1mRNA、COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息。

延伸车架多工况结构仿真分析及复合优化研究

为保证矿用无轨喷浆台车车架性能满足实际工况需求,本文针对自研的延伸车架进行结构力学分析与优化设计。利用Creo软件三维建模,HyperWorks软件完成有限元建模和材料载荷加载,分别计算其在满载、起吊和行驶工况下的结构强度和刚度。本文提出了一种基于应力/应变云图分析的多次迭代计算-验证-改进的复合优化方法,达到多工况力学性能满足要求的结构设计轻量化目的。结果表明,优化后的延伸车架不仅结构强度提高,而且车架整体质量减少29%,此方法可为类似结构的优化提供参考。

混合稀土含量对A356铝合金组织结构的影响

采用金相显微镜、SEM、EDS和差示扫描量热法(DSC)等手段研究混合稀土(RE)合金添加量对Ti-B-Sr联合细化变质的A356铝合金显微组织结构的影响。结果表明:当稀土添加量为0.1%～0.3%(质量分数)时,随着稀土含量的增加,初晶晶胞尺寸、硅相尺寸、二次枝晶臂间距减小,硅相圆整度提高(长径比降低);当稀土添加量为0.3%时,初始α(Al)相的平均枝晶胞尺寸为76μm,二次枝晶间距为11.3μm,Si相长径比为2.13;加入0.1%～0.3%的稀土降低了合金的共晶点温度和初晶α(Al)的形核温度,并减小组织熔化过程中共晶反应的放热量。

IL-6下调血管内皮细胞组织因子抑制物表达

目的:观察IL-6对脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物(TFPI)的影响.方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.同时应用CCK-8测定不同浓度的IL-6(0.125～2.0 ng/ml,实验组)刺激后细胞活性变化,对照组给予培养液;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TFPI mRNA水平.结果:与对照组相比,IL-6(0.125～0.5 ng/ml)对细胞活性没有显著影响(P>0.05);IL-6增加到1 ng/ml后,作用12 h后细胞活力开始下降.IL-6(0.5 ng/ml)作用6～24 h显著下调细胞TFPI mRNA表达(P<0.05),6 h时抑制效果最强(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值仅为0.191),以后抑制效应渐减弱,48 h达到正常水平(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值为0.399).结论:提示IL-6(0.5 ng/ml)对HUVECs的活性不造成直接的影响,同时IL-6(0.5 ng/ml)在6～24 h内可抑制HUVECs的TFPI mRNA表达而诱发凝血系统失衡,这可能与急性炎性反应时相的血液凝固和血栓形成有关.

丘陵山地地区永久性基本农田划定研究

研究目的是针对现有方法对区域差异考虑上的不足,合理确定丘陵山地地区永久性基本农田划定中的基本农田保护图斑.以重庆市南川区为例,结合GIS空间分析技术,对传统TOPSIS法进行改进基于联系度的改进,研究丘陵山地地区基本农田图斑的划定.研究结果表明:该方法分析所得基本农田图斑土壤质量高,坡度小,靠近交通线和居民点,空间布局上集中,符合永久性基本农田划定的要求和指导思想.说明该方法能够有效解决丘陵山地地区的永久性基本农田中图斑划定问题.

PDX1联合NKX6.1促进骨髓间充质干细胞分化为胰岛β样细胞

目的:为提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰腺β样细胞的分化效率,以产生足够用于移植的胰岛样细胞。方法:构建含PDX1与NKX6.1双基因的重组腺病毒载体,用重组腺病毒感染并联合多种细胞因子分步诱导BMSCs。用RT-PCR、Western blotting等多种方法分别检测PDX1、NKX6.1、胰岛素及C-肽表达情况;观测植入鼠肾包膜下的细胞形态与胰岛素、C-肽等相应分子表达情况以及检测植入细胞对糖尿病模型大鼠的血糖水平的调节能力。结果:BMSCs经重组腺病毒pAdxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1联合相应细胞因子分步诱导,双硫腙染色细胞质呈亮红色,RT-PCR显示诱导后的细胞持续稳定表达胰岛素、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)等β细胞相关分子;Western blotting、免疫细胞化学与间接荧光结果亦相似。所诱导的实验组细胞经5.5和25mmol/L葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平分别为(1240.4±109.3)mU/L和(3539.8±245.1)mU/L,并显著高于对照组的分泌量。移植实验组细胞可恢复STZ糖尿病小鼠血糖正常水平。结论:PDX1与NKX6.1联合细胞因子在体外能有效地诱导BMSCs分化为胰岛β样细胞;这种胰岛β样细胞移植能有效恢复STZ糖尿病小鼠的血糖正常水平,维持小鼠良好的生存状态,这将为治疗糖尿病带来新的希望。

IL-6诱导血管内皮细胞纤溶相关蛋白的表达

目的:观察IL-6对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响.方法:用生长良好的第2、3代HUVECs细胞进行实验,用CCK-8测定IL-6(0.125、0.25、0.5、1.2 ng/ml)作用前后细胞活性;用发色底物法测定0.5 ng/ml IL-6组和对照组(不加IL-6)培养上清液中tPA、PAI-1活性;进一步用RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平.结果:与对照组相比, IL-6(≤0.5 ng/ml)对细胞增殖活性的影响无差异性.0.5 ng/ml IL-6组tPA活性在12～72 h显著升高(P<0.05),且显著上调tPA mRNA,12 h达到峰值,以后渐降,48 h mRNA达正常水平.而IL-6组PAI-1活性与PAI-1 mRNA表达与对照组无差异性.结论: IL-6可活化内皮细胞,显著上调HUVECs的tPA mRNA的转录和tPA分泌,诱发纤溶系统活化,而对PAI-1 mRNA或PAI-1活性无影响.IL-6的这种效应在炎症反应的病理生理过程中可能发挥重要作用.

IL-6对血管内皮细胞活性及TFmRNA表达的影响

目的研究IL-6对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)的mRNA水平的影响。方法应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用第二、三代细胞进行试验。测定IL-6(0.5ng/mL)处理前后细胞活性,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TFmRNA水平。结果72h内,IL-6对HUVECs的活性的影响与正常对照组相比差异无统计学意义。IL-6作用HUVECs6h即诱导TFmRNA表达,12h达到高峰,以后表达减弱,72h不能检测到mRNA;对照组TFmRNA不表达或表达极弱。结论IL-6(0.5ng/mL)对HUVECs的活性不造成直接的影响,同时在24～48h内IL-6(0.5ng/mL)可诱导HUVECsTF表达,这可能与IL-6作为前炎症因子诱导急性炎症反应时相的血液循环障碍相关。

肾癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的活化

目的:探索体外诱导DCs活化的方法和制备肾癌树突状细胞(DCs)瘤苗。方法:制备肾癌细胞冻融抗原;取健康人新鲜血分离外周血单个核细胞(PBMC),应用GM-CSF+IL-4刺激,诱导PBMC为iDCs,然后进行分组,采用不同因子刺激iDCs转化为mDCs,其中A组:冻融抗原负载;B组:TNF-α+冻融抗原负载;C组:IL-1β+冻融抗原负载;D组:TNF-α+IL-1β+冻融抗原负载。结果:各组均可诱导iDCs的成熟,并高表达CD86、CD80和HLA-DR;相对于其它组,D组DCs更显著上调CD83和CD54表达(P<0.05)和IL-12分泌(P<0.01),且D组mDCs更有效地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05)。结论:TNF-α+IL-1β与肾癌细胞冻融抗原协同可有效促进DCs成熟、增强诱导淋巴细胞活化的能力。

脂多糖诱导血管内皮细胞凝血途径相关因子基因表达变化

目的:观察脂多糖(LPS)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和凝血酶调节蛋白(TM)的影响。方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行实验。同时应用CCK-8测定细胞在不同浓度的LPS(1-100 mg/L)处理前后细胞活性;应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TM、TF和TFPImRNA水平。结果:浓度为10 mg/L的LPS对细胞活力与对照组相比没有显著差异。浓度为10 mg/L的LPS作用使HUVECs显著上调TF mRNA表达,6-24 h可以使细胞TFPI mR-NA表达下调,以后渐恢复正常表达,72 h达到正常对照组水平,同时下调TM mRNA表达。结论:LPS(10 mg/L)对HUVECs的活性不造成直接的影响,可显著上调HUVECs的TF mRNA转录,抑制TFPI mRNA的转录,而不改变TMmRNA的转录,这可能与LPS在感染过程中诱导血栓形成,血液凝固和D IC发生相关。

HPLC-DAD法同时测定附子中5种水溶性成分

目的用HPLC-DAD同时测定附子中5种水溶性成分的方法。方法采用Phenomenex Luna 5u PFP(2)100R(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为0.1%磷酸-甲醇,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃;检测波长为260 nm(尿嘧啶,尿苷,鸟苷),280 nm(盐酸多巴胺,去甲猪毛菜碱)。结果尿嘧啶、盐酸多巴胺、去甲猪毛菜碱、尿苷、鸟苷进样量分别在0.004 4～0.44μg(r=0.999 9),0.005 2～0.52μg(r=0.999 9),0.005 2～0.52μg(r=0.999 9),0.010 9～1.09μg(r=0.999 9)和0.007 3～0.73μg(r=0.999 9)范围内有良好的线性关系;平均回收率分别为98.76%(RSD=1.86),102.59%(RSD=1.37%),101.68%(RSD=0.80%),100.06%(RSD=0.51%),102.24%(RSD=0.78%)。结论建立的测定方法准确、快速,为附子质量控制提供新的参考方法。

SARS相关冠状病毒的基因组和主要蛋白酶的研究进展

严重急性呼吸综合征 (severe acute respiratory syndrome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方暴发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注。在 SARS病原体被确证为一类新的冠状病毒并被命名为 SARS coronavirus(SARS- Co V)之后 ,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究。至目前 ,SARS- Co V的基因组已在多个实验室被测定 ,并通过多种途径分析了其基因结构特征 ,研究了基因复制与翻译中相关的蛋白酶特性。SARS- Co V具有复杂的基因复制和翻译调节机制 ,如 sg m RNA的不连续转录、核糖体的框移、翻译后的水解过程等等。其中 SARS- Co V的 3种蛋白酶 (解旋酶和另外 2种半胱氨酸蛋白酶 )在病毒的复制、转录、翻译和翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用。本文综述了 SARS- Co

神经元素3与成对盒基因4促进胰腺十二指肠同源框蛋白1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化

目的:探索神经元素3(neurogenin 3,NGN3)与成对盒基因4(paired box gene 4,PAX4)对胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,PDX1)驱动间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向胰腺β细胞分化过程中的作用。方法:构建PDX1基因及NGN3与PAX4双基因表达腺病毒,重组腺病毒Adxsi-CMV-PDX1感染诱导MSCs1周后,再行重组腺病毒Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4感染诱导MSCs;分别检测PDX1、PAX4、NGN3、NK转录因子相关的2.2(NK transcription factor related,gene family 2,locus2,NKX2.2)、v-maf muscu-loaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B(MafB)、胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon)多种胰腺分泌细胞相关分子表达情况。结果:成功构建腺病毒Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4;MSCs经Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4分步诱导后,免疫细胞化学与间接荧光检测显示PDX1、NGN3与PAX4因子在细胞核内稳定表达;重组腺病毒稳定转染5 d后,细胞开始变圆并集聚成团,用双硫腙(dithizone,DTZ)染色细胞质呈亮红色;细胞经诱导1周后,用RT-PCR检测到神经源分化因子1(neurogenic differentiation 1,NruroD1)与NKX2.2表达,2周后可检测胰岛素/胰岛素原分子;间接荧光检测显示诱导后的细胞先后开始表达NKX2.2、MafB等转录因子与胰岛素/胰岛素原、胰高血糖等胰岛分泌细胞相关分子,但未能检测到v-maf musculoaponeurotic fibro-sarcoma oncogene homolog A(MafA)与C肽分子表达。结论:NGN3与PAX4对PDX1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化具有促进作用。

通过肿瘤致敏的DCs活化的CD8^+ T细胞可有效地杀死肿瘤细胞(英文)

目的:探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF +IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组,应用相应的细胞因子等刺激iDCs转化为mDCs,其中肿瘤裂解物冲击DCs组:冻融抗原负载+TNF-α+IL-1β;无肿瘤裂解物冲击组: TNF-α+IL-1β。再分别用上述DCs与淋巴细胞进行混合培养以刺激混合淋巴细胞中的T细胞转化为细胞毒性T细胞,并进行分组,肿瘤裂解物冲击DCs组:肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;无肿瘤裂解物冲击DCs组:无肿瘤裂解物冲击DCs +IL-2 +IL-7;对照组: IL-2 +IL-7。结果:成功获得iDCs,并高表达CD86、CD80和HLA-DR;相对于其它组,肿瘤裂解物冲击DCs组mDCs更显著上调CD83,且更有效地刺激淋巴细胞增殖;肿瘤裂解物冲击DCs组的CTLs也高表达CD95(Fas)且TNF -α和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.05)。结论:肿瘤裂解物冲击DCs可有效促进T细胞活化、增殖;并显著增强相应CTLs的杀死靶细胞的能力,这为发展DCs +CTLs的免疫治疗肿瘤提供了一种新而且简便的生物治疗模式。

2型糖尿病患者中血浆sTM变化与凝血和纤溶系统相关性研究

目的 为评价血浆可溶性凝血酶调节蛋白(sTM)与2型糖尿病患者凝血和纤溶系统之间的关系。方 法 我们检测了50例2型糖尿病患者和50名年龄与患者相匹配的健康者血浆中sTM、蛋白C(PC)、凝血酶原 片段F1+2、纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物(PAP)、组织纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)和D 二聚体(DD)含量。结果 患者血浆中的sTM(P<0.01)、t PA(P<0.05)、PAP(P<0.01)、PC(P<0.05)和F1+2 (P<0.05)较50名正常对照组明显增高,糖尿病肾病患者的sTM和PAP升高更加显著。在糖尿病患者中,sTM 与PC呈负相关(r=-0.50,P<0.001),而与PAP呈正相关(r=0.47,P<0.001);PAI 1和DD与正常对照组相 比差异无显著性。结论 2型糖尿病者的凝血和纤溶系统均是活化的,高浓度sTM是血管内皮细胞受损或功能 活化标志,其能否当作为2型糖尿病患者继发血栓症或冠心病的一个早期预测指标有待进一步研究。

NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达

目的:运用pADxsi系统构建带人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体。方法:采用基因克隆技术,将目的基因NGN3从pEGFP-N1-NGN3质粒上切下连到pShuttle-GFP-CMV上,替换GFP,得到pShuttle-CMV-NGN3;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上切下连到系统pShuttle-CMV-NGN3上,得到pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4穿梭质粒;最后将CMV-NGN3/CMV-PAX4从pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4病毒质粒,然后在293细胞中进行包装与扩增活性病毒,并进行病毒滴度测定。体外感染人脐带间充质干细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫印迹(Western blotting)检测目的基因在细胞内的表达情况,免疫细胞化学与间接荧光法检测目的分子在细胞内的定位。结果:酶切鉴定和PCR证明重组人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;RT-PCR与Western blotting结果显示目的基因在细胞持续稳定表达;间接荧光与免疫化学表明重组腺病毒可高效感染人脐带间充质干细胞,且目的基因特异性地定位于细胞核内。结论:应用重组技术成功构建人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体,且在间充质干细胞内持续而稳定表达。

Pdx1与NeuroD1联合诱导L02细胞Nkx6.1和GLUT2的表达

目的:应用分子生物学技术,构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)和神经分化因子1(NeuroD1)转录因子真核表达质粒,检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力。方法:以人胚胎胰腺组织mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1和NeuroD1基因,分别克隆到真核双表达载体pIRES质粒的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pI/Pdx1/NeuroD1真核表达质粒,并转染L02细胞。用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western blotting检测目的基因及NK转录因子相关的Nkx6.1(Nkx6.1)和葡萄糖运载体2(GLUT2)的表达情况。结果:目的基因克隆正确且在真核细胞中有效表达;并可诱导肝细胞表达胰腺β细胞功能相关的Nkx6.1和GLUT2因子。结论:pI/Pdx1/NeuroD1质粒成功构建和在人真核细胞表达,并诱导人肝细胞表达β细胞功能相关的Nkx6.1转录因子和GLUT2,提示Pdx1与NeuroD1可诱导肝细胞向胰腺内分泌细胞分化。

STC1在胃癌组织与外周血液中表达的意义

目的:研究外周血液与胃癌组织中斯钙素1(STC1)的表达情况。方法:分别在I-IV型的胃癌74例患者中,应用RT-PCR法检测外周血和肿瘤组织中STC1mRNA表达情况,应用免疫组化法检测肿瘤组织中STC1蛋白表达情况。结果:74例胃癌患者,48例外周血液中STC1mRNA阳性;肿瘤组织STC1mRNA与STC1蛋白全部表达。外周血中STC1mRNA与肿瘤淋巴结转移数、肿瘤大小和病理TNM分期有(r分别为0.637、0.519、0.541,P<0.05、P<0.01、P<0.05)显著正相关。结论:STC1在胃癌的发生发展过程中具有抑制免疫系统功能等重要作用;外周血中STC1mRNA检测可试用作为肿瘤微转移的1个新指标。

NKX6.1协同PDX1诱导人胎肝间充质干细胞分化为胰岛B样细胞

目的探讨NKX6.1对PDX1诱导人胎肝间充质干细胞(fetal liver-derived mesenchymal stem cells,FL-MSCs)向胰岛B细胞分化的协同作用及可能机制,以获取足够用于移植的胰岛B样细胞。方法构建含PDX1与NKX6.1双基因的重组腺病毒载体,用该载体感染FL-MSCs并联合相应的细胞因子分步诱导,检测诱导后的细胞中PDX1和NKX6.1基因以及NGN3、NeuroD1/Beta2、MafA因子和胰岛素等多种胰腺B细胞相关分子的表达情况。结果腺病毒载体转染24h后FL-MSCs细胞即开始表达PDX1与NKX6.1基因,检测显示诱导后的细胞先后开始表达NGN3、NeuroD1和MafA等因子,持续稳定表达胰岛素等B细胞相关分子;且这些分子表达存在时序性。结论PDX1与NKX6.1联合细胞因子在体外能有效诱导FL-MSCs分化为胰岛B样细胞;可能是通过先后活化的NGN3、NeuroD1和MafA等转录因子,限定细胞向内分泌前体细胞、进一步向B内分泌前体细胞、B细胞分化发育。

SARS相关冠状病毒刺突糖蛋白的研究(综述)

概述了SARS -CoV的S蛋白的结构及功能相关研究。严重急性呼吸综合症相关的冠状病毒 (SARS -CoV)引起 2 0 0 3年我国南方非典型肺炎爆发流行 ,波及多个国家和地区。目前全球许多学者对SARS -CoV进行了广泛的研究 ,发现S蛋白是病毒表面的主要蛋白 ,它构成冠状病毒科特征性的冠状样结构 ,在严重急性呼吸综合症的发病机制起着关键性作用 ,可介导表达相关受体的宿主细胞感染。现已鉴定出SARS -CoV的S蛋白相关受体 。