siRNA干扰p38α上调人血管eNOS基因启动子转录活性

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳作用时间和浓度,然后通过双荧光素酶报告基因技术检测转染siRNA-p38α后细胞裂解液的荧光强度,分析eNOS基因启动子的转录活性变化。结果:与对照组比较,siRNA-p38α干扰后p38α蛋白表达明显减弱,而相应的eNOS启动子转录活性上调,以100 nmol/L的siRNA-p38α作用48 h的效果最佳。结论:siRNA干扰p38α信号可上调人血管内皮细胞eNOS基因的转录活性。

Anisomycin诱导小鼠艾氏腹水癌细胞凋亡

目的:探讨Anisomycin诱导EAC细胞凋亡的机制。方法:利用MTT法观察Anisomycin对EAC细胞增殖的影响;应用AnnexinV-FITC和PI双染色检测Anisomycin作用下EAC细胞凋亡的变化;琼脂糖凝胶电泳检测Anisomycin作用下EAC细胞的DNA断裂片断;采用RT-PCR检测Anisomycin作用下Caspase-3 mRNA的转录水平;Western Blot分析Anisomycin处理的EAC细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:Anisomycin对EAC细胞增殖的抑制率随浓度的升高而增高,EAC细胞的凋亡水平也上升,随着Anisomycin浓度升高EAC细胞DNA断裂的寡核苷酸片段亦越趋明显,Caspase-3的mRNA和蛋白水平也上调,并明显高于阿霉素组结论:结果表明,Anisomycin能够抑制EAC细胞的增殖,在体外可能通过激活Caspase-3凋亡信号而诱导EAC细胞的凋亡。