水稻三系及其杂种F_1的叶绿体同工酶研究

以二叶期水稻的两个不育系和相应保持系以及由三个恢复系产生的６个组合的杂种Ｆ＿１代共１３个品种的叶绿体为材料，采用聚丙烯酰胺薄层等电聚焦电泳法，分析了酯酶（Ｅｓｔ）、过氧化物酶ＰＯＤ、细胞色素氧化酶Ｃｙｔ的同工酶谱。结果如下：（１）酯酶同工酶出现１９条酶带，基本酶带６条，Ｆ＿１中出现了偏父本杂交型、完全互补型、父本显性型和父本部分显性型四种类型酶谱。（２）过氧化物酶同工酶显示３０余条酶带。Ａ区有５条酶带仅见于少数品种；Ｂ区有基本酶带６条；Ｃ区酶带变化较大。在Ｆ＿１中出现父本显性型、偏父本杂交型和偏父本部分酶带消失型，（３）细胞色素氧化酶同工酶共显示２０余条．Ａ区５条见于少数品种，Ｂ区为基本酶带区，Ｃ区酶带多变，Ｆ＿１中出现父本显性型、偏父本互补型和偏母本互补型三种类型酶谱。

水稻三系及其杂种F_1的核组蛋白研究

本文提取了杂交水稻(Oryza Sativa L.)的三系及其F_1代的组蛋白,采用聚丙烯酸胶凝胶电泳及SDS—聚丙烯酸胺凝胶电泳进行分析,并与小牛胸腺组蛋白进行了比较.水稻和小牛胸腺的H_3、H_4在两种凝胶电泳中都显示了相同的泳动率.水稻H_2a、H_2b比小牛胸腺中的相应组份在两种凝胶电泳中皆显示较低的泳动率,具较大的分子量.在我们的研究范围中,H_1表现出种的特异性,而且杂种F_1的H_1含量高于亲本,这提供了一种从分子遗传学角度来研究杂种优势的可能性.

水稻叶绿体基因文库的构建和精细限制图谱的制作

水稻幼叶在加有高浓度抗坏血酸的缓冲液中匀浆,以获得完整的叶绿体,从中分离到ctDNA得率高达100μg/100g叶,纯度足以用于限制性核酸内切酶分析。ctDNA经Mbo I部分酶解得到的片段克隆到载体pcos 2 EMBL的Bam HI位点,重组DNA经体外包装后感染宿主菌,筛选表型Tc^5Km^R的重组子,通过计数克隆有效率达5×10~4重组菌落/1微克插入DNA。用λ-末端酶对重组环状双链DNA在cos位点切成线性分子,产生两个(ON-L及ON-R)可供标记和杂交的末端,线性Cosmid DNA经限制酶部分消化,凝胶电泳分离,干燥凝胶放射自显影,得到了6种限制性核酸内切酶的限制图谱。水稻ctDNA全长为129.5kb,在ctDNA上Pvu Ⅱ、Sal Ⅰ、Pst Ⅰ、Hind Ⅲ、Eco RI及Bam HI的切点分别为11、12、17、37、67和44个,1R A和B为21.7kb,LSC为73.7kb,SSC为12.4kb。

含蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建

pVFB33为含蚕豆叶绿体核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法,提取、分离和纯化了pVFB33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解,构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱,同时,对实验结果进行了分析讨论.

快乐絮语

我喜欢一个人坐着,开着窗,品一杯香茗,看一本好书或是与自然交谈,在那种归真返璞,美不可言的时刻,给自己一些安逸,一些遐思,给自己一些恬静的快乐。你快乐吗?我时常问自己,在静坐的时候,思考的时候,学习的时候,可是却发现任何时候的心情往往都是一样,平平淡淡,谈不上快乐不快乐。于是,我便想着我不快乐。于是。

水稻叶绿体DNA的分离纯化及其限制酶切分析

通过在匀浆缓冲浪中添加抗坏血酸并结合蔗糖密度梯度离心和差速离心法等分离纯化了水稻叶绿体 DNA(ctDNA),得率高达100μg/100g叶,其纯度足以用于限制酶分析和分子生物学研究.环状水稻ctDNA总长度为129.5Kbp,PvuⅡ、SalⅠ、PstⅡ、Hind Ⅲ、EcoRⅠ和BamHⅠ在ctDNA上的切点分别为11、12、17、37、67和44.

含蚕豆叶绿体rRNA基因重组质粒物理图谱的构建

以 pBR322 DNA 为载体,Escherichia coli HB101为受体菌,克隆了含蚕豆叶绿体 rRNA基因的二个 BamHI 片段。应用几种限制性内切酶酶切以及 Southern 印迹法构建了这二个特异片段的物理图谱。重组质粒 pVFB16含有一个4.70kb 的 BamHI 片段,其上含有完整的16S rRNA 基因;重组质粒 pVFB32含有一个5.65kb 的 BamHI 片段,其上含有23S rRNA基因,23S—4.5S/5S rRNA 基因的间隔区及4.5S/5S rRNA 基因。