CRISPR/Cas9技术用于清除乙型肝炎病毒的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染作为中国乃至全球的重大健康问题,使乙肝患者长期处于肝硬化及肝癌的巨大威胁中。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV在肝细胞内复制中必不可少的一环,是乙肝彻底治愈的关键。然而,目前针对乙肝的治疗药物尚无法彻底清除肝细胞内的ccc DNA,且服药周期长、副作用大。利用新兴的基因编辑技术CRISPR/Cas9,人工设计靶向HBV系统可高效清除潜藏在胞内的ccc DNA,为乙肝的彻底治愈带来希望。文章就CRISPR/Cas9技术用于清除HBV的研究进行综述。

基于UHPLC技术的补骨脂指纹图谱研究

目的:建立补骨脂药材的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱。方法:以Shim-pack XR-ODSⅢ(50 mm×2.0 mm,1.6μm)为色谱柱,乙腈-0.2%冰醋酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.1 mL·min-1,检测波长为246 nm,柱温45℃。结果:建立了补骨脂药材的UHPLC指纹图谱,标定10个共有色谱峰,并通过对照品比对指认了其中6个色谱峰。结论:该方法快速、可靠、重复性好,可为补骨脂药材的物质基础和质量控制方法的研究提供参考。

重症科室培训护士现实性休克的现状分析与对策

目的探讨改善和降低重症科室培训护士现实性休克发生率的管理策略。方法回顾性分析2012年7月-2015年5月我院的40名培训护士发生现实性休克的现状,制定相应的管理策略并进行干预后效果评估。结果实施对策管理后,培训护士在现实性休克发生率、护理不良事件发生率、工作质量及效率等各方面较前均有改善,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论对策管理使培训护士的现实性休克得到明显改善,个人综合素质得到很大提高,提升了自我效能感,并使辞职率明显下降。

乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测法的建立

目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。

2型猪链球菌SSU05_0736基因敲除株的构建及其特性分析

目的 2型猪链球菌是重要的人畜共患病病原菌,鉴定现有的和发掘新的毒力因子依然是该领域的研究热点。探讨SSU05_0736编码的c AMP受体蛋白在2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)中国强毒株05ZYH33中的作用机制,初步分析SSU05_0736基因敲除株的生物学特性,为进一步研究猪链球菌可能的毒力因子及其致病机制提供研究基础。方法利用同源重组原理构建并筛选由壮观霉素抗性基因(Spcr)替换S.suis 2中SSU05_0736的基因敲除株Δ0736,系统比较分析野毒株与敲除株的生物学特性,同时将BALB/c小鼠作为动物感染模型来探究敲除株的毒力。结果通过组合PCR、反转录PCR(RT-PCR)等方法鉴定并成功构建基因敲除株Δ0736,其在菌落形态、溶血活性及对小鼠致病力等方面与野毒株无显著差异;两者生长速率相比,敲除株的生长较野毒株迟缓但其在对数期增长速率较大。结论 SSU05_0736基因的缺失并未使猪链球菌2型强毒株05ZYH33的毒力发生显著改变,推测SSU05_0736基因并非毒力决定因子,但与野毒株相比敲除株在生长速率尤其对数期增长速率较大这一方面的改变,提示可对其代谢调控能力作进一步分析。

2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶基因的克隆表达及酶活性测定

目的:克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶(NagA)的编码基因,并测定其酶活性。方法:根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA(SSU05_1259)基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a:NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性。结果:在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的Nag A相对分子质量约为43×10~3,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13mmol/L。2型猪链球菌NagA的体外酶活为124U/mL,酶比活为78U/mg。结论:在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性。

HBV X基因突变促进肝癌发生的生物学机制

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)羧基末端四个突变位点C1653T、T1753C及A1762T/G1764A致癌的生物学机制。方法利用体外基因合成和定点突变构建野生型和复合突变型HBx重组质粒,转染至人肝癌细胞HepG2筛选稳定表达细胞株。通过绘制细胞生长曲线(CCK8法)、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验比较转染空载体(Vector)、野生型HBx(WT)和突变型HBx(Combo)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果细胞生长曲线结果显示WT和Combo细胞的生长速率明显快于Vector(P<0.01),但WT和Combo之间差异无统计学意义(P>0.05)。平板克隆形成实验结果提示Combo细胞的克隆形成率显著高于WT(31.90%vs16.00%,P<0.01),而WT略高于Vector(12.46%,P<0.05)。划痕实验结果显示Combo细胞48h迁移距离显著高于WT细胞(P<0.01),而WT细胞显著高于Vector细胞(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示Combo细胞穿过小室的细胞数最多([227.80±17.85)个],其次为WT细胞([181.75±10.06)个],Vector细胞最少([85.72±3.19)个],三者两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论野生型和突变型HBx均可显著增强HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且突变型HBx促进细胞恶性生物学行为的能力显著强于野生型HBx,这为明确HBV致癌机制提供了一定的依据。

全程健康教育模式应用在糖尿病护理干预当中的效果探究

分析探究全程健康教育模式在糖尿病护理干预中的临床应用效果。方法:选取本院 2017 年 9 月至 2019 年 9 月收治的 94 例糖尿病患者为研究对象,以随机分组形式将其分为对照组与实验组,每组各 47 例。结果:全程健康教育模式实施 6 个月以后,实验组患者空腹血糖数值明显低于对照组患者空腹血糖数值,且实验组血糖控制达标率(89.36%)明显高于对照组血糖控制达标率(48.94%);干预护理后,实验组患者急慢性并发症均明显低于对照组,且实验组低血糖发生率(2.18%)显著低于对照组低血糖发生率(19.15%)。结论:糖尿病患者实施全健康教育模式后,护理干预效果显著,值得临床推广应用。

乳铁蛋白作为药物载体的研究进展

乳铁蛋白作为一种从乳汁中提取而得的属于先天免疫系统的食品蛋白,除了具有能够结合和运输铁离子的主要功能外,还具有广谱抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗辐射、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等广泛的生物学活性。目前常作为食品、化妆品的添加剂。随着研究的深入,乳铁蛋白在药用领域作为药物载体的研究越来越受到广泛关注。根据乳铁蛋白作为药物载体的不同特点,本文分类概述其在脑靶向、肝肿瘤靶向、肺肿瘤靶向和口服给药系统中的研究进展。

体外冲击波联合等速肌力训练对膝骨关节炎患者肌力、本体感觉及关节功能的影响

目的观察体外冲击波疗法(ESWT)联合等速肌力训练对轻中度膝骨关节炎(KOA)患者肌力、本体感觉及关节功能的影响。方法采用随机数字表法将60例轻中度KOA患者分为观察组及对照组,每组30例。2组患者均给予等速肌力训练,每次训练30 min,每周训练3次;观察组同时辅以ESWT治疗,每周治疗1次。于治疗前、治疗6周后采用等速训练仪检测患者膝关节屈、伸肌群峰力矩(PT);采用PK254动静态平衡仪评估患者本体感觉功能情况,具体检测指标包括平均轨迹误差和平均负重力量差;采用西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎(WOMAC)指数、Lequesne指数评估患者膝关节功能情况。结果治疗6周后观察组患者膝关节伸肌PT值[(80.58±16.63)N·m]、屈肌PT值[(58.27±11.25)N·m]、平均轨迹误差[(20.33±6.72)%]、平均负重力量差[(0.72±0.26)kg]、WOMAC指数[(23.85±7.93)分]及Lequesne指数[(6.25±2.31)分]均较治疗前、对照组明显改善(P<0.05)。结论ESWT联合等速肌力训练治疗轻中度KOA患者疗效显著,能进一步改善患者膝关节肌力及本体感觉功能,加速膝关节功能恢复。

秋收时节

岁月撞开了秋天的门扉季节的脚步穿行在飒飒的风里田野里满是喜悦的稻禾绽开金灿灿的笑脸迎接镰刀的检阅